1、ABO/RhD血型定型檢測試劑卡操作規程【試驗目的和原理】 ABO血型鑒定是通過檢測被檢者紅細胞上是否存在A和/或B抗原（正定型）以及被檢者血漿中是否存在抗A和/或抗B抗體（反定型）來確定。 對于成年個體被檢者，紅細胞上的A和/或B抗原與血漿中的抗A和/或抗B抗體存在一種對應關系。其獨特性質在于：紅細胞上缺乏A和/或B抗原，則血清中存在與所缺乏的抗原對應的強反應性抗體，如紅細胞上缺乏A抗原，則可以預見血漿中存在抗A抗體。常規的ABO定型必須包括正定型（紅細胞定型）和反定型（血漿定型），并將正反定型結果相互驗證，只有正反定型結果一致時才能準確定型。 Rh陽性和陰性的鑒定是通過檢測被檢者的紅細胞上

2、是否有D抗原，有D抗原為Rh陽性，沒有D抗原則為Rh陰性。ABO/RhD血型定型檢測試劑卡 采用凝膠作為微柱凝膠卡的填充物，將生物化學的凝膠分子篩過濾技術、離心技術和血型血清學的抗體特異性結合在一起，其中抗A凝膠管中灌注了含抗A抗體的凝膠，抗B凝膠管中灌注了含抗B抗體的凝膠，抗D凝膠管中灌注了含IgM抗D抗體的凝膠。A細胞、B細胞及Ctr管中灌注了不含血型抗體的凝膠，抗A、抗B及抗D凝膠管用于紅細胞上A、B及D抗原檢測，而A細胞、B細胞及Ctr管用于檢測血漿中的抗體。當抗原抗體反應時，凝集的紅細胞在離心力的作用下不能通過凝膠而留在凝膠上層或游離在凝膠中，呈現陽性反應；而抗原抗體沒有反應時，未凝

3、集的紅細胞在離心力的作用下可通過凝膠而沉積在微柱凝膠管的底部，呈現陰性反應 【ABO/RhD血型定型檢測試劑卡的用途】1、用于輸血前檢測（1）鑒定ABO，以備選擇 ABO血型相配合的血液用于交叉配血。（2）鑒定RhD血型，以備選擇RhD血型相配合的血液用于交叉配血。2、用于圍產期檢查（1）用于產前夫婦的ABO、RhD血型檢測，進行新生兒溶血病產前預測。（2）用于產后母子的ABO、RhD血型檢測，進行新生兒溶血病產后診斷。3、用于常規ABO、RhD血型化驗檢查，如健康體檢等?！緲颖疽蟆?、建議使用抗凝的血樣，尤其是EDTA抗凝管采集的血樣，需要量2ml 。（EDTA抗凝采血管為紫帽管）。2、血

4、液樣本在采集后48小時以內檢測。 【所需儀器設備及耗材】1、 Rh血型分型卡（含抗C、抗c、抗D、抗E、抗e及自身陰性對照）2、血型血清學離心機（用于離心分離血漿、洗滌紅細胞）3、微柱凝膠卡離心機4、微量移液槍及吸頭【試驗操作】 按照下列步驟進行操作一、被檢血液樣本的處理及反定型A型、B型紅細胞的準備步驟操作1EDTA抗凝的血液樣本離心（900-1000g）1分鐘，將上清血漿轉入一支12 ´ 75-mm 試管中，余下的壓積紅細胞備用。如果血漿有不溶物（如混入的紅細胞）或不澄清透明，則需要將血漿再次離心，直到澄清透明不含不溶物為止。2另取一支12 ´ 75-mm 試管中，加入

5、0.1ml上述步驟1中的壓積紅細胞 ，用生理鹽水洗滌一次，棄上清，得到壓積紅細胞。3在一支12 ´ 75-mm 試管中，加入1ml生理鹽水（或Liss液），加入步驟2中得到的壓積紅細胞10微升，混勻得到0.8-1%濃度的被檢紅細胞。4 將反定型A及B紅細胞用生理鹽水調節到0.8-1%濃度。二、ABO、RhD定型步驟操作1取ABO/RhD血型定型檢測試劑卡 一片，注意檢查外觀，確保凝膠管的凝膠上層存在液面，凝膠不會干枯。將符合要求的卡進行標記，按照試驗需要撕開封口膜。2用微量移液槍分別向抗A、抗B、抗D孔及Ctr孔的每孔樣品槽中沿樣品槽內壁呈45°角緩慢加入50微升0.8-1

6、%濃度的被檢者紅細胞。3 向A細胞孔中加入50微升0.8-1%濃度的A型紅細胞。 4向B細胞孔中加入50微升0.8-1%濃度的B型紅細胞。5分別向A細胞、B細胞、Ctr孔中加入25微升被檢者血漿。6在臺面交替輕叩卡左下角和右下角，確保所加入的液體在卡的樣品槽中呈水平狀態，而不是偏向一側。7將卡放入微柱凝膠卡離心機離心，LB-3000低速離心機第一檔離心5分鐘，判讀結果并記錄?！窘Y果判讀及解釋】1、反應陰、陽性的判讀反應圖反應強度4+3+2+1+雙群陰性紅細胞分布凝集紅細胞在凝膠頂部表面，呈線條形凝集紅細胞開始進入凝膠，但集中在凝膠頂部及上半部分凝集紅細胞進入凝膠內部的中下部分凝集紅細胞集中在凝

7、膠下半部分，且向底部集中離心后凝集的紅細胞位于凝膠頂部；而陰性紅細胞集中在微管底部所有紅細胞通過凝膠，沉積在微孔底部必須注意：如果紅細胞發生凝集，預期其凝集強度2+ ; 如果反應弱于2+則需要進一步試驗才能準確定型。2、陰陽性結果解釋-A-B-DAcBcctr管結果2+02+02+0A型D陽性02+2+2+00B型D陽性002+2+2+0O型D陽性2+2+2+000AB型D陽性2+0002+0A型D陰性02+02+00B型D陰性0002+2+0O型D陰性2+2+0000AB型D陰性【注意事項】1. 血液樣本建議是抗凝的樣本，尤其是EDTA抗凝的樣本，以避免紅細胞凝集塊加入凝膠引起假陽性反應。2

8、. 按照臨床輸血技術規范，血液樣本在采集后應該在48小時內進行檢測 。 3. 凝膠卡在使用前需仔細檢查，若凝膠卡封口開裂、孔中凝膠干涸、凝膠中有氣泡時，不可使用。4. 撕開凝膠卡封口膜時，不宜用力過猛，以免造成凝膠微孔間的交叉污染。5. 被檢的紅細胞懸液的濃度為0.81%，濃度過高或過低會影響檢測結果。 6. 溶血、脂血、細菌污染等情況的樣本可影響檢測結果。7.10.吸附部分無抗體或補體致敏體致敏的 被檢紅細胞在配制成0.8-1%濃度前必須洗滌1次，保證充分去除血漿成分，且 沒有纖維蛋白不溶物，否則會阻擊紅細胞在微柱凝膠中的沉降，呈現假陽性反應。8. 在Ctr孔（自身陰性對照）孔結果為陽性時，

9、試驗結果無效?？赡茉蚴怯捎诒粰z紅細胞已經致敏IgM抗體導致自發凝集，此時可以用DTT將已經致敏到紅細胞上的IgM抗體破壞后再行Rh分型試驗。9. 人源血液樣本存在潛在的傳染性，凝膠卡使用后按醫療生物垃圾廢棄物處理。10. 抗D凝膠不能鑒定弱D、部分D（如D）抗原。對于患者，如果抗D凝膠管中患者的紅細胞反應為陰性，則確定為RhD陰性。11. 若出現2+的弱陽性反應，須做進一步試驗才能準確定型，即確認弱反應是由于被檢者的抗原減弱還是凝膠微孔之間的交叉污染引起。12. 若出現混合視野反應，需要了解被檢者近期3個月內是否有輸血史，或被檢者是否為骨髓移植患者。13. 由于6月齡以下的嬰兒其血漿/血清中

10、不似成人一樣存在可預見的抗A/抗B抗體，因此只做正定型不做反定型。 【ABO正反定型不一致原因分析】如果血型定型正反定型結果不一致時，則不能準確定型，需要分析產生不一致的原因。 引起正反定型不一致的原因如下：（一）正定型出現弱反應或缺失抗原.亞型、亞型或亞型。.白血病導致或抗原減弱。.何杰金病（Hodgkins）有時會抑制抗原表達，與白血病類似。.由于某種疾?。ㄈ绺骨话⒁认侔е卵獫{中存在大量的型物質，中和抗或抗抗體，引起正定型為假陰性或弱陽性。 需要將正定型的紅細胞用生理鹽水洗滌后再次定型可解決此問題。.骨髓移植.非ABO同型輸血（二）正定型紅細胞上多余的抗原反應.自身凝集紅細胞、抗體致

11、敏紅細胞導致。.細胞未洗滌，血漿蛋白引起的假陽性反應。.細胞未洗滌，血漿中存在針對正定型試劑中某種成分的抗體導致。 .骨髓移植。.獲得性B。.B(A)現象。.ABO非相合輸注。 （三）正定型出現混合視野反應.近期輸血.骨髓移植.異卵雙胞胎或雙受精卵產生的嵌合體。 .胎兒和母體出血。（四）反定型血清中出現弱反應或反應缺失 .年齡相關：新生兒以及小于6月齡的嬰兒以及老年人。 .ABO亞型有亞型抗體，如A2、A2B型人的抗A1。 .低球蛋白血癥（如白血病人、使用免疫抑制劑患者、免疫缺陷患者）。 .移植患者使用抗排異藥物。.雙胞胎或雙受精卵產生的嵌合體。（五）反定型出現多余的抗體反應 .冷自身抗體 .特異性冷同種抗體 .血清中存在針對試劑紅細胞保存液成分的抗體。 .某些疾病導致球蛋白水平增高（多發性骨髓瘤、巨