1、阿司匹林原料和制劑在體內及體外含量測定方法藍星宇 藥學1101 31104026摘要 阿司匹林,又名：2-(乙酰氧基)苯甲酸或乙酰水楊酸，是一種歷史悠久，應用最早，最廣和最普通的解熱陣痛藥。誕生于1899年3月6日。用于治感冒、發熱、頭痛、牙痛、關節痛、風濕病，還能抑制血小板聚集，用于預防和治療缺血性、心絞痛、心肺梗塞、腦血栓形成，也可提高植物的出芽率，應用于血管形成術及旁路移植術也有效。中國藥典（2010版）中阿司匹林原料藥及其制劑的含量測定采用酸、堿滴定法，而近幾十年來，隨著色譜技術、光譜技術、電泳技術等的飛快發展，阿司匹林的含量測定方法有了突破與發展。該文主要分析阿司匹林原料及以阿司匹林

2、為主藥的多種制劑在體內和體外的含量測定方法關鍵詞 阿司匹林 含量測定 制劑正文1. 阿司匹林原料藥在體內含量測定方法反相高效液相色譜法色譜條件：填充劑十八烷基硅烷鍵合硅膠（5um）；色譜柱4.6mm×150mm；流動相甲醇-水-正丁醇-磷酸（300:200:10:0.05）；檢測波長237nm；柱溫：室溫。對照品溶液制備：精密稱取阿司匹林對照品適量，加甲醇溶解并制成濃度分別為0.5mg/ml樣品處理：取血清樣品0.1ml，置于1.5ml具塞離心管中，加入50ul高氯酸（30%），再加不同濃度的阿司匹林及內標溶液適量，使濃度均為10ug/ml.渦旋振蕩2min，于10000r/min離

3、心5min。測定方法：取上清液20l進樣，用峰面積計算濃度CX。計算公式：CX=（CR×AX）/AR（CR為對照品溶液的濃度（ug/ml）；AX和AR分別為樣品溶液與對照品溶液中阿司匹林的峰面積）2. 阿司匹林原料藥在體外含量測定方法1）直接滴定法 直接滴定法即將阿司匹林溶于中性乙醇、甲醇或丙酮中，以酚酞、酚紅或酚硫酞為指示劑，用氫氧化鈉滴定液直接滴定。阿司匹林含量測定的反應原理： 測定方法：取本品約0.4g，精密稱定，加中性乙醇（對酚酞指示劑顯中性）20ml溶解后，加酚酞指示劑3滴，用氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)滴定。每1ml氫氧化鈉滴定液(0.1mol/L)相當于18.02

4、mg的C9H8O4。計算公式：NaOH滴定度T=0.1×180.16×(1/1)=18.02（mg/ml）F=M（實際）/M(規定)含量（%）=（V×T×F）/W×100%（V為滴定液體積（ml）； T為氫氧化鈉的滴定度 ，W為供試品稱樣量（g）； F為滴定液濃度校正因子（F=滴定液實際濃度/滴定液規定濃度）2）水解后剩余量滴定法利用阿司匹林酯結構在堿性溶液中易于水解的特性，加入定量過量的氫氧化鈉滴定液，加熱使酯鍵水解后，再用硫酸滴定液回滴定剩余的氫氧化鈉滴定液。反應原理：測定方法：取本品1.5g，精密稱定，加氫氧化鈉滴定液（0.5mol/L）

5、50.0ml，混合，緩緩煮沸10min，放冷，加酚酞指示液，用硫酸滴定液（0.25mol/L）滴定，并將滴定結果用空白試驗校正。計算公式：從上述反應式可知：阿司匹林與硫酸的摩爾比為1:1硫酸的T=0.25×（1/1）×180.16=45.04(mg/ml)含量（%）=（V0-V）×F×T/W×100%（V0為空白試驗消耗硫酸滴定液的體積（ml）；V為樣品測定時消耗硫酸滴定液的體積（ml）；W為阿司匹林樣品的稱取量（g）；F為硫酸的濃度校正因數；T為硫酸溶液的滴定度）3. 阿司匹林制劑藥在體內含量測定方法高效液相色譜法高效液相色譜法可用于小劑量阿

6、司匹林制劑的體內研究。色譜條件：色譜柱 Inertsil C18(250mm ×46mm，5um)；流動相 甲醇一25醋酸(45：55，vv)；柱溫 35 ；流速 12 ml/min；檢測波長 237nm。溶液的配制：水楊酸標準儲備液：精密稱取厄貝沙坦標準品1000mg，置100mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻即為100 g/ml的水楊酸標準儲備液，并用甲醇稀釋成不同濃度的系列溶液。標準曲線的建立：分別精密吸取適量水楊酸溶液，加入空白血漿，配制成濃度為03、05、l、2、4、6、8ug/ml的血漿樣品，精密移取血漿樣品05ml于10 ml離心管內，加入100ul磷酸，混勻。

7、加入25 ml乙醚，渦旋提取3min，4000r/min 離心10 min，取上清液20ml，37 水浴中氮氣流吹干。殘留物用100ul流動相溶解，取20ul進樣分析。以樣品峰面積(y)對血藥濃度(c)作線性回歸，得回歸方程Y=78038c-18518r=09996。血漿樣品的處理：精密移取血漿05ml于10 ml離心管內，加入100ul磷酸，混勻。加入25 ml乙醚，渦旋提取3min，4000r/min 離心10 min，取上清液20ml，37 水浴中氮氣流吹干。殘留物用100ul流動相溶解。測定方法：取20ul進樣，將血漿樣品的峰面積Y代入標準曲線方程，計算樣品濃度C。4. 阿司匹林制劑藥

8、在體外含量測定方法1）兩步滴定法因阿司匹林片劑中除存在其水解產物水楊酸及醋酸外，在制劑工藝中添加了抑制阿司匹林水解的穩定劑酒石酸或枸櫞酸，因而采用此法。兩步滴定法系指測定過程分兩步進行：第一步中和制劑中的酸性水解產物和酸性穩定劑（同時中和阿司匹林的游離羧基），以消除其干擾；第二步水解與滴定，即水解后剩余量滴定法。阿司匹林片含量測定的原理：中和：水解與滴定：測定方法：中和：取本品10片，精密稱定，研細，精密稱取片粉適量（約相當于阿司匹林0.3g），置錐形瓶中，加中性乙醇（對酚酞指示劑顯中性）20ml，振搖使阿司匹林溶解，加酚酞指示液3滴，滴加氫氧化鈉滴定液（0.1mol/ml）至溶液顯粉紅色。此

9、時中和了供試品中存在的游離酸，阿司匹林也同時成為鈉鹽。水解與滴定：在中和后的供試品溶液中，精密加氫氧化鈉滴定液（0.1mol/ml）40ml，置水浴上加熱15分鐘并時時振搖，迅速放冷至室溫，用硫酸滴定液（0.05mol/ml）滴定，并將滴定的結果用空白試驗校正。計算公式：從上述反應式可知：阿司匹林與硫酸的摩爾比為2：1硫酸的T=0.05×（2/1）×180.16=18.02（mg/ml）標示量%=（V0-V）×F×T×W(平均)/（W×標示量）×100%（V0為空白試驗消耗硫酸滴定液的體積（ml）；V為樣品測定時消耗硫酸滴定

10、液的體積（ml）；F為硫酸滴定液的濃度校正因數；T為硫酸的滴定度（mg/ml）；W為供試品片粉的取樣量（g）；W（平均）為供試品的平均片重（g）；標示量為片劑的規格（mg/片）2）柱分配色譜-紫外分光光度法采用柱色譜分離法消除阿司匹林膠囊和栓劑中輔料及降解產物的干擾。以阿司匹林膠囊柱分配色譜-紫外分光光度法為例：色譜柱的制備：于玻璃柱(20cm×2.5cm)下端塞入少量玻璃棉，裝入硅藻土3g和新制碳酸氫鈉(112)2ml的混合填充劑。對照溶液的制備：取阿司匹林對照品約50mg，精密稱定，置50ml量瓶中，加冰醋酸0.5ml，加三氯甲烷溶解并稀釋至刻度，混勻。精密量取5ml，置100m

11、l量瓶中，用冰醋酸三氯甲烷（1100）稀釋至刻度，混勻。制成每1ml中約50ug的溶液。供試品的制備：取膠囊20粒，盡可能完全傾出內容物，精密稱定，研細，混勻；取細粉適量(相當于阿司匹林50mg)，精密稱定，置50ml量瓶中，加鹽酸甲醇溶液（150）1ml，加三氯甲烷稀釋至刻度，混勻。精密量取5ml，移至色譜柱填充劑上，用三氯甲烷5ml、25ml相繼洗滌，棄去洗液，用冰醋酸三氯甲烷溶液（150）10ml洗滌后，再用冰醋酸三氯甲烷溶液（1100）85ml洗脫，收集洗脫于100ml量瓶中，并用冰醋酸三氯甲烷溶液（1100）稀釋至刻度，混勻。測定法：用1cm吸收池，以三氯甲烷為空白，立即于最大吸收波

12、長280nm處測定對照溶液和供試溶液的吸光度。計算公式：阿司匹林（mg）=CR×(AX/AR)（CR為阿司匹林對照溶液濃度（ug/ml）；AX和AR分別為供試溶液和對照溶液的吸光度） 3）離子抑制-反相高效液相色譜法典型芳酸類非甾體抗炎藥物制劑大多采用離子抑制-反相高效液相色譜法測定，用外標法計算含量。以阿司匹林栓的含量測定為例，方法如下：色譜條件與系統適用性試驗：用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈-四氫呋喃-冰醋酸-水（20：5：5：70）為流動相；檢測波長為276nm。理論板數按阿司匹林峰計算不低于3000，阿司匹林峰與水楊酸峰的分離度應符合要求。測定方法：取本品5粒，精密稱

13、定，置小燒杯中，在4050水浴上微溫熔融，在不斷攪拌下冷卻至室溫，精密稱取適量（約相當于阿司匹林0.1g），置50ml量瓶中，加1%冰醋酸的甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，置冰浴中冷卻1小時，取出，迅速濾過，取續濾液作為供試品貯備液。精密量取供試品貯備液5ml，置100ml量瓶中，用1%冰醋酸的甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻，精密量取1ul，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另取阿司匹林對照品，精密稱定，加1%冰醋酸的甲醇溶液振搖使溶解并定量稀釋制成每1ml中約含0.1mg的溶液，同法測定，按外標法以峰面積計算，即得。計算公式：標示量%=CR×(AX/AR) ×D×W(平均)/(W

14、×標示量) ×100% （CR為對照品溶液濃度（mg/ml）；AX和AR分別為供試品溶液和對照品溶液的峰面積；D為稀釋體積（ml，D=50×100/5=1000）；W為栓劑熔融物取樣量（g）；W(平均)為栓劑平均粒重(g)；標示量為栓劑規格（mg/支）4）可見分光光度法以阿司匹林腸溶片為例：原理：阿司匹林腸溶片的主要成分為乙酰水楊酸，分子中酯基在堿性溶液中可與羥胺反應生成羥肟酸;后者在酸性條件下與三氯化鐵形成酒紅色的羥肟酸鐵，最大吸收波長為520nm，在一定濃度范圍內，吸光度呈線性關系，可測出阿司匹林藥片中乙酰水楊酸的含量。標準溶液系列和樣品溶液的配制：分別取0.

15、5g·L-1乙酰水楊酸標準溶液0.00mL(空白溶液)，0.50mL，1.00mL，1.50mL，2.00mL和阿司匹林樣品溶液1.00mL置于25mL容量瓶中，分別加入7%鹽酸羥胺乙醇液1.00ml，2mol·L-1NaOH1.00ml，放置3分鐘，再分別加入4mol·L-1HCl和10%FeCl3各1.00mL，加水至刻度，搖勻。標準曲線的繪制：標準溶液系列和樣品溶液放置10分鐘后，用空白溶液作對照，在520nm處測定吸光度。以吸光度為縱坐標，標準溶液濃度為橫坐標作圖，繪制出標準曲線。樣品的測定：通過測定樣品的吸光度，從標準曲線上，找出阿司匹林樣品稀釋溶液的濃

16、度C（g/L），計算公式：原阿司匹林樣品溶液的濃度=C×25（C為阿司匹林樣品稀釋溶液的濃度（g/L）；25為稀釋倍數）5）差示分光光度法差示分光光度法是利用被測物在兩種不同溶液中吸收光譜發生了特征性變化，而共存干擾物在該兩種溶液中未引起光譜變化，測定兩種溶液的吸收度差值（A值），根據A與被測物濃度C的線性關系進行定量測定。以阿司匹林腸溶片為例：原理：利用阿司匹林在01 mol/L 鹽酸溶液和01 mol/L 氫氧化鈉溶液中紫外光譜發生變化的特征，試用差示分光光度法，通過測定差示吸收值(A)直接測定阿司匹林的含量。測定波長的選擇：精密稱取阿司匹林對照品1029 mg，置100 ml量

17、瓶中，加01 mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋至刻度，制成阿司匹林對照品溶液。精密量取2等份，每份10ml，各置l0 ml量瓶中，分別以01 mol/L鹽酸溶液和01mol/L氫氧化鈉溶液稀釋至刻度，搖勻。以前者作參比液，后者為樣品液，在波長260320 nm范圍內進行掃描，本品在297 nm波長處有最大差示吸收值(A)，而輔料在此處的吸收值(A)為零，故選用297 nm為測定波長線性關系考察：精密量取對照品溶液10、15、20、25、30 ml各兩等份，分別置10 ml量瓶中，每組分別用01mol/L 鹽酸溶液和01 mol/L 氫氧化鈉溶液稀釋至刻度，搖勻。以前者作參比液，后者為樣品液，在29

18、7nm處測定A，求得回歸方程：A=518746C一004373，r=09998。結果表明，阿司匹林在10293087 mg/L 范圍內線性關系良好。樣品的測定：取本品20片，精密稱定，研細，精密稱取適量(約相當于阿司匹林25 mg)，置100 ml量瓶中，加01mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，濾過。精密量取續濾液兩等份，每份20 ml，各置25 ml量瓶中，分別用01mol/L鹽酸溶液和01 mol/L氫氧化鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，以前者作參比液，后者為樣品液，照紫外可見分光光度法，在297 nm的波長處測定吸光度；另精密稱取阿司匹林對照品適量，同法測定，計算含量。計算公式：C樣=（

19、A樣×C對）/A對標示量（%）=( C樣×D×W（平均）) /（W×標示量）×100%(A樣為樣品差示吸收值；C對為對照品濃度；A對為對照品差示吸收值；D為稀釋倍數；W（平均）為樣品的平均片重（g）；W為樣品片粉的取樣量（g）)6）百分吸收系數法供試品：精密稱取阿司匹林注射液適量，置100ml量瓶，用乙醇定容。精密量取2ml置100ml量瓶，用乙醇定容，即得。含量測定：在276nm下測定A計算公式：（A= E1%cm×C×L）C= A / E1%cm 樣品% = A / E1%cm ×F/W（F = 稀釋倍數和濃度

20、換算因子 W = 取樣量）7）電極法以三芐基錫辛酸酯為活性物質, 制備具有良好的電位響應性能和選擇性能的PVC 膜水楊酸根離子敏感電極，該電極應用于阿司匹林制劑的含量測定。阿司匹林易水解得到水楊酸根離子, 且反應定量。因此, 通過對水楊酸根離子的測定即可得出樣品中的阿司匹林含量。待測樣品的處理將適量阿司匹林片藥品( 10 片) 研制成粉狀，精密稱取11. 5 g ， 在0. 5 mol/ L NaOH 溶液25 ml 中加熱回流1 h 后過濾，定容至250 ml。吸取10ml 濾液，用稀硫酸調至pH 5. 5， 再用pH 5. 5的磷酸鹽緩沖液定容至100 ml 作為待測液。測定方法：使用該電

21、極通過標準溶液法和樣品加入法, 分別測定藥品經前述處理后所得試樣中的水楊酸根離子濃度, 通過換算得出藥劑中阿司匹林的含量。8）同步掃描熒光光譜原理：熒光光度計同步掃描時, 得到兩組分互不干擾的熒光峰, 借此分別測定兩組分的含量。溶液的配制：對照液：精密稱取阿司匹林對照品適量，置100ml量瓶，用乙醇定容。精密量取2ml置100ml量瓶，用乙醇定容，即得。供試品：精密稱取阿司匹林注射液適量，置100ml量瓶，用乙醇定容。精密量取2ml置100ml量瓶，用乙醇定容，即得。測定方法：用對照品溶液測定熒光強度與濃度的線性關系后，再在每次測定前，用一定濃度的對照品溶液校正儀器的靈敏度；然后再相同的條件下

22、，分別讀取對照品溶液及其試劑空白的熒光強度與供試品溶液及其空白的熒光強度計算公式：CX =（RXRXb）/（RrRrb）×Cr（CX和 Cr為供試品溶液、對照品溶液的濃度，RX供試品溶液熒光強度，RXb供試品溶液試劑空白的熒光強度，Rr對照品溶液的熒光強度，Rrb為對照品溶液的試劑的空白熒光強度）9）線性掃描伏安法以玻碳電極為指示電極, 用線性掃描伏安法測定水楊酸, 從而間接測定阿司匹林。原理：在硫酸- 硫酸鉀底液中,阿司匹林的水解產物水楊酸在玻碳電極上產生一靈敏的氧化峰, 峰電位為1. 16 V; 在4. 0×10- 5mol/ L8. 0×10- 3mol/

23、L 濃度范圍內水楊酸與峰電流呈良好線性關系, 最低檢測濃度為2. 0×10- 5 mol/ L。溶液的配制：0. 1 mol/ L NaOH 溶液: 稱取4g NaOH 于100 ml燒杯,用水溶解并轉移到1 000 ml容量瓶中, 用水定容。0.01mol/ L 水楊酸標準溶液: 稱取0. 138 2 g分析純水楊酸, 用0. 1 mol/ L NaOH 溶液溶解并定容到100ml, 放置陰涼處保存。5 mol/ L硫酸溶液: 于720 ml水中徐徐加入280 ml濃硫酸, 同時用玻璃棒攪拌。0. 5 mol/ L 硫酸鉀溶液: 稱取8. 713 g 硫酸鉀于100 ml燒杯中,

24、用水溶解并轉移到100 ml容量瓶中, 用水定容。所用水均為去離子水.工作曲線制作：按選定實驗條件對不同濃度水楊酸標準溶液進行線性掃描伏安測定, 結果表明水楊酸在4. 0×10- 5mol/L8. 0×10- 3mol/ L 濃度范圍內與峰電流呈良好線性關系, 最低檢測濃度為2. 0×10- 5mol/ L. 工作曲線回歸方程為I p= - 7. 336 2C- 4. 687 6, 相關系數R= 0. 9941.精密稱取10 片阿司匹林藥片, 均勻研細, 再從中準確稱取相當于一片重量的樣品, 用0. 1 mol/ L NaOH溶液溶解, 放置10 min, 再用0. 1 mol/ L NaOH 溶液定容至50 ml。 從中移取1. 00 ml至25. 00 ml容量瓶, 加入5 mol/