1、馬鈴薯論文：轉CBF3基因馬鈴薯提高抗冷性的研究【中文摘要】低溫對植物造成的傷害，表現為膜的損傷，活性氧和 自由基含量增加以與一些滲透調節物質的積累等。這些現象的出現主要是由于低溫對植物細胞膜系統的傷害，導致參與生命活動的各種酶 的結構被破壞，活性降低,從而使細胞的代謝系統紊亂。植物光系統對 低溫脅迫非常敏感，在低溫逆境條件下活性氧的大量積累，導致光合 機構因受氧化脅迫而受損傷，光化學效率下降，同時催化光合暗反響 的酶活性也因對低溫敏感而降低，最終表現為光合速率的下降。本研 究以擬南芥 CBF3(CRT/DRE binding factor 3) 基因為基因，應用農桿 菌介導的轉化法將35SC

2、BF痔口 rd29ACBF3導入馬鈴薯(Solanum tuberosum L)魯引1號塊莖,實現其在馬鈴薯中過量表達得到轉基因 植株,對其進展了分子生物學的驗證與光合生理指標的測定，研究轉AtCBF3基因馬鈴薯對低溫的抗性機理。主要結果如下:(1)短期與長期低溫處理均導致馬鈴薯葉片光合速率，光合羧化效率，表觀量子效 率的下降。轉CBF3基因馬鈴薯葉片降低幅度低于野生型馬鈴薯，誘導 型啟動子植株葉片低于組成型啟動子植株。(2)低溫處理過程中，轉 CBF3基因馬鈴薯的最大光化學效率 【英文摘要】Lowtemperature maycause damageswhich in elude many

3、aspects such as the cha nge of the membra ne lipids phase, the accumulati on of some sec on dary metabolites, the level of reactive oxyge n species and so on. All these phe nomena result from the damages of some en zymes which were invo Ived in the metabolism of pla nts cells. Photo systems are also

4、 very sensitive to low temperature stress, under the low temperature stress Reactive Oxygen Species (ROS) accumulates a great deal, which results in photo apparatus bein 【關鍵詞】馬鈴薯CBF3基因抗氧化酶低溫脅迫光合特性【英文關鍵詞】CBF3 pla nt cold-tolera nee photochemical activity potato【索購全文】聯系固Q1: 138113721囚Q2: 139938848同時提供

5、論文寫作一對一輔導和論文發表服務.保過包發【目錄】轉CBF3基因馬鈴薯提高抗冷性的研究符號說明4-8 中文摘要 8-10 英文摘要10-111前言12-261.1植物對低溫的應答抗氧化系統對低溫逆境的響應13-141.1.2 植物細胞應對低溫脅迫的滲透調節 植物光合機構對低溫脅迫的響應15低溫應答的基因調控15-171.2 有關CBF基因家族17-221.2.1 植物CBF基因家族的發現17-181.2.2 植物CBF的序列特征 18-191.2.3 CBF轉錄因子對COR基因的表達調控植物CBF冷應答通路20-221.3啟動子的類型22-241.3.1 組成型啟動子221.3.2 誘導型啟動

6、子 22-231.3.3 組織特異型啟動子23-241.4研究目的與存在的問題 24-262材料與方法26-392.1實驗材料與處理 262.1.1 實驗材料 26 菌株與質粒26酶和生化試劑262.1.4 PCR引物262.2 實驗方法 26-302.2.1 總 RNA的提取 PCR擴增28連接反響28-292.2.4 大腸桿菌感受態細胞的制備29轉化與克隆篩選29堿法小量提取質粒質粒DNA的酶切鑒定302.2.8 回收302.3原核表達載體的構建獲得目的基因302.3.2 構建重組表達載體30-312.3.3大腸桿菌BL21原核表達的誘導31 聚丙烯酰胺凝膠電泳 重 組蛋白的純化原核表達馬

7、鈴薯CBF3重組蛋白抗體制備332.4蛋白雜交分析植物總蛋白的提取33聚丙烯酰胺凝膠電泳 33半干法蛋白轉移33-342.4.4 封閉與雜交34顯色反響342.4.6 尿素-SDS-PAGE342.5農桿菌介導的馬鈴薯轉化34-362.5.1 侵染用根癌農桿菌的制備 馬鈴薯轉化、再生體系的建立35培養基配方35馬鈴薯的栽培與繁種35轉基因馬鈴薯的鑒定 35-362.6生理指標的測定光合速率的測定調制式熒光儀熒光參數的測定37快速葉綠素熒光誘導曲線的測定37 丙二醛含量和相對電導率的測定 37 抗氧化酶 活性測定37 葉片中葉綠素含量變化測定 37-38 2.7統 計分析38-393結果與分析3

8、9-603.1馬鈴薯CBF3基因原核表達原核表達載體的構建 39重組蛋白的表達與誘導條件的優化 39-403.1.3 pET30a-CBF3重組蛋白的親和純化與抗體的制備40-413.2馬鈴薯轉化與分子鑒定41-43馬鈴薯轉化41轉基因植株的分子鑒定41-433.3短期低溫處理條件下轉基因植株的生理指標測定43-54轉CBF3基因馬鈴薯外部形態的變化43-45低溫處理條件下轉CBF3基因馬鈴薯葉片光合速率的變化低溫處理對PSH相關參數的影響46-503.3.4 低溫處理對MDA含量和電導率的影響50-51低溫處理對AtCBF3轉基因馬鈴薯的活性氧水平的影響51低溫處理對轉CBF3基因馬鈴薯抗氧化酶活性的影響低溫處理對轉CBF3基因馬鈴薯卡爾文循環關鍵酶活性的影響低溫脅迫對煙草葉片脯氨酸和可溶性糖含量的影響543.4長期低溫處理條件下轉基因植株的生理指標測定低溫處理條件下轉CBF3基因馬鈴薯葉片光合速率的變化 54-563.4.2 低溫處理對Fv/Fm