1、              作者：劉建紅 張成武 竇拉加 【摘要】  目的 探討基質金屬蛋白酶-2(mmp-2)和尿激酶型纖溶酶原激活物(u-pa)在人胃癌中的表達及意義。方法 采用免疫組織化學s-p法檢測60例胃癌和30例正常胃組織mmp-2和u-pa表達情況。結果 mmp-2和u-pa在胃癌組織中陽性表達率分別為61.67、75.00；在正常胃組織中陽性表達率分別為13.33、6.67。mmp-2的表達與胃癌的浸潤深度、淋巴結轉移情況密切相關，而與胃癌

2、分化程度無關；u-pa的表達與胃癌分化、浸潤深度、淋巴結轉移情況相關,且mmp-2、u-pa在胃癌組織中的表達具有相關性。結論 mmp-2和u-pa在胃癌侵襲及轉移過程中發揮重要作用，兩者呈正相關，可作為判斷胃癌預后的分子標志物。 【關鍵詞】  胃癌 基質金屬蛋白酶-2 尿激酶型纖溶酶原激活物     abstract  objective  to study the significance of mmp-2 and u-pa expression and the relationship with invasion and met

3、astasis of gastric cancer as well as their interactionmethods  mmp-2a and u-pa  expression were examined by immunochemical s-p staining method in 60 cases of human gastric cancer and in 30 cases normal tissueresults  the positive rates for the expression of mmp-2 and u-pa in gastric c

4、ancer tissues were 61.6 and 75.00; 13.33 and 6.67 in normal tissue respectively. there were significant correlation between the positive expression of mmp-2 and the depth of invasion, lymph node metastasis except for differentiation. the positive expression of u-pa are correlated with the differenti

5、ation，depth of invasion and lymphatic metastasis. moreover, there was a positive relationship between the expression of mmp-2 and u-pa in gastric cancer tissues. conclusion the positive expression of mmp-2 and u-pa are correlated with the invasion and metastasis in gastric carcinoma. the expression

6、may be important to the determination of the malignant biological property and the prognosis of gastric cancer     key words  gastric cancer  mmp-2  u-pa     細胞外基質和基底膜的降解、破壞是腫瘤侵襲轉移的重要步驟，研究發現基質金屬蛋白酶(mmps)是降解細胞外基質蛋白的最主要的蛋白水解酶，mmp-2是基質金屬蛋白酶家族中的重要成員，在腫瘤侵襲轉移的過

7、程中起重要作用。尿激酶型纖溶酶原激活物（u-pa）存在于人類大多數腫瘤細胞中，通過參與組織結構的再改造過程促進腫瘤侵襲和轉移。我們對60例胃癌手術患者的胃癌組織及30例正常胃組織中的 mmp-2、u-pa表達水平進行了檢測，希望通過該檢測結果分析、探討mmp-2、u-pa的表達與胃癌浸潤程度、分化程度及與淋巴轉移間的關系。     1  材料與方法     11  材料     收集 2006年 12月至2007年 12月青海大學附屬醫院手術采集的胃癌標本 60例和正常胃組織(距癌邊緣

8、5 cm以外)標本30例。其中男性 38例，女性 22例，年齡 3076歲，平均年齡約為53歲。60例患者中癌細胞呈中高分化者28例，低分化者32例；侵及漿膜層者42例，未侵及漿膜層者18例；淋巴結轉移者40例，淋巴結未轉移者20例。所有患者術前未經放療和化療。標本均經10中性福爾馬林液固定和石蠟包埋，連續切片后常規制切片。主要試劑鼠抗人mmp-2單克隆抗體、鼠抗人u-pa單克隆抗體、s-p試劑盒、 dab顯色劑均購自福州邁新生物技術有限公司。     12  方法     石蠟標本經連續切片后，所有標本均常規行he染色和鏈

9、霉素親和素-生物素-過氧化酶復合物(s-p)法染色。免疫組織化學染色程序嚴格按 s-p試劑盒說明書進行。每組染色均設立對照，以 pbs液代替一抗作陰性對照。     13  結果判斷     mmp-2判定：胞膜和胞質內顯示棕黃色顆粒或團塊者視為陽性。細胞計數方法：每張切片隨機觀察5個高倍視野，在每個視野所觀察的100個細胞中計數出其中的陽性細胞數，取5個視野均值以百分數表示細胞陽性指數。陽性細胞< 10者為陰性(-)，10者為陽性(+)。     u-pa判定：染色以胞漿為主，胞核、胞膜

10、有時亦可見染色，出現棕黃色顆粒者判定為陽性。每張切片觀察5個視野 ，中度或中度以上著色細胞數25者為陽性(+)，<25者為陰性(-)。     14  統計學方法     采用spss 12.0統計軟件進行統計學處理，計數資料采用2檢驗，相關性分析采用 spearman相關性檢驗 ，檢驗水準=005。     2  結果     21  mmp-2、u-pa的表達     mmp-2、u-pa在胃癌組織陽性表達

11、率分別為61.67、75.00，在正常胃組織中表達率分別為13.33、6.67。mmp-2、u-pa在胃癌組織中的陽性表達與在正常胃組織中的表達有差別(p<0.001)，在胃癌組織中呈高表達，見表 1。表1mmp-2、u-pa在胃癌組織和正常胃組織中的表達情況    22   mmp-2、u-pa表達與胃癌臨床病理特征的相關性分析     mmp-2表達與胃癌淋巴結轉移、浸潤程度有關(p     23  mmp-2與u-pa表達的相關性分析   &#

12、160; 對癌組織中mmp-2和u-pa的表達水平進行相關性分析，二者的相關系數為rspearman=0.336，p=0.009，此二者關系呈正相關，見表 3。表2胃癌組織mmp-2、u-pa表達和臨床病理特征的關系 例()     病理因素例數mmp-2陽性2值p值u-pa陽性2值 p值浸潤程度  侵及漿膜層4231(73.81)36(85.71)  未侵及漿膜層186(33.33)8.730.059(50.00)8.570. 05分化程度  中高分化2816 (57.14)15 (53.57)  低分化3221(65.6

13、2)0.450.0530(85.71)12.850. 05淋巴結轉移  轉移4030(75.00)35(93.75)  未轉移207 (35.00)9.02 0. 0510(50.00)10.580. 05  表3mmp-2與u-pa的表達相關性     3  討論     轉移和浸潤是惡性腫瘤最重要的生物學特征，其機制復雜,尚未得以闡明。mmp-2是一種 zn 依賴性蛋白酶，是降解細胞外基質的主要酶類，其底物為?型膠原，具有很強的水解?型膠原的能力，其主要作用是降解細胞外基質(ecm)，分解基

14、底膜中的纖維連接蛋白和層粘連蛋白。因此它在腫瘤細胞浸潤轉移中起重要作用。     本實驗結果顯示，在正常胃組織中其表達率為13.3。結果與國內外研究略有差異，國內潘留蘭1 、國外derric等2報道正常胃黏膜上皮mmp-2呈陰性表達，本實驗中mmp-2在正常胃組織中表達陽性不除外與取材于同一標本因素有關。mmp-2在胃癌組織中陽性表達率為61.67，mmp-2高表達與胃癌浸潤深度、淋巴結轉移程度有關，本實驗結果與多數研究結果相一致。nomura3研究發現，mmp-2主要表達于進展期胃癌，并與腫瘤的血管侵犯情況密切相關。allgayer4同樣認為mmp-2的激活酶在

15、過度表達的情況下，mmp-2可作為判斷胃癌預后的指標。     近年來的研究表明，腫瘤浸潤轉移與局部的纖溶酶活性增強有關。u-pa及upa-r系統可降解消化大多數基質物質，并且使膠原酶原形成活性膠原酶共同在腫瘤轉移過程（如腫瘤血管生成，腫瘤細胞脫落，基質浸潤、侵入和逸出循環系統等多個重要過程）發揮作用。在很多腫瘤組織中upa-r的表達明顯高于正常組織，且upa-r的表達與腫瘤生長方式明顯相關5。bianchi等6發現，upa-r出現在浸潤的乳腺癌中，而在正常組織中未出現。本實驗結果顯示，u-pa在胃癌組織陽性表達率達75.0，其與腫瘤的分化程度、淋巴結轉移程度、浸

16、潤程度相關（p     目前對這兩個因子的聯合研究很少。我們的研究顯示，mmp-2和u-pa在胃癌侵襲及轉移過程中發揮重要作用，且兩者作用呈正相關。allgayer h 研究表明，高水平upa-r表達的胃癌患者組存在mmp-2與預后的相關性，提示僅在mmp-2的激活酶過度表達的情況下，mmp-2可作為胃癌的預后因素。纖維蛋白酶原在u-pa 作用下形成纖維蛋白溶解酶，后者可降解消化大多數基質物質，與mmp-2的作用有相同之處，因此通過聯合檢測mmp-2和u-pa可為臨床判斷胃癌的預后提供有效依據。【參考文獻】  1 潘留蘭，鮑曉蕾 ，陳永勝，等.mmp-2

17、、mmp-7蛋白在胃癌組織中表達的意義.實用癌癥雜志，2006，21（4）363-3652derrico a, garbisa s, liotta la, et al. augmentation of type iv collagenase, lamin receptor, ki 67 proliferation antigen associated with human colon, gastric and breast carcinoma progression. mod pathol, 1991，4239-2463 nomura h, fujimoto n, seiki m, et al

18、. enhanced production of matrix metalloproteinases and activation of matrix metalloproteinase 2 (gelatinase a) in human gastric j cancer, 1996,699-164allgayer h, heiss mm, sohildberg fw. prognostic factors in gastric cancer. br j surgery， 1997，841651-16645 童苗，張啟良，倪玉英，等.胃和結腸組織中upa受體表達的病理意義.上海第二軍醫大學學報，1994，14217-2206 bianchi e,cohen rl,thor