1、DNA、RNA提取的差別極性化合物，溶于水，不溶于乙醇、氯仿等有機(jī)溶劑，鈉鹽比游離核酸易溶于水。在酸性溶液中，DNA、RNA易水解，在中性或弱堿性溶液中較穩(wěn)定。天然狀態(tài)的DNA 是以脫氧核糖核蛋白(DNP)形式存在于細(xì)胞核中。核酸的理化性質(zhì)核酸的理化性質(zhì)提取提取DNADNA、RNARNA總的原則總的原則 :1 保證核酸一級(jí)結(jié)構(gòu)的完整性；2 其他生物大分子的污染應(yīng)降低到最低程度；3 不應(yīng)存在對(duì)酶有抑制作用的有機(jī)溶劑和過(guò)高濃度的金屬離子；4 其他核酸分子，也應(yīng)盡量去除。核酸提取核酸提取的基本步驟的基本步驟1.材料準(zhǔn)備2.破碎細(xì)胞或包膜內(nèi)容物釋放3.核酸分離、純化4.沉淀或吸附核酸，并去除雜質(zhì) 5.

2、核酸溶解在適量緩沖液或水中DNADNA和和RNARNA提取的主要差別提取的主要差別 DNA和RNA的降解 DNA不易降解 RNA易降解濃鹽法濃鹽法：有機(jī)溶劑抽提法：有機(jī)溶劑抽提法：密度梯度離心法：密度梯度離心法：利用利用RNP和和DNP在鹽溶液中溶解度不同，將二者分離在鹽溶液中溶解度不同，將二者分離有機(jī)溶劑作為蛋白變性劑，同時(shí)抑制核酸酶的降解作用有機(jī)溶劑作為蛋白變性劑，同時(shí)抑制核酸酶的降解作用利用不同內(nèi)容物密度不同的原理分離各種內(nèi)容物利用不同內(nèi)容物密度不同的原理分離各種內(nèi)容物基因組基因組DNADNA的提取的提取吸附材料結(jié)合法吸附材料結(jié)合法非基因組非基因組DNADNA的提取的提取堿裂解法堿裂解法

3、密度梯度離心法密度梯度離心法煮沸法煮沸法質(zhì)粒質(zhì)粒DNA的提取的提取SDSSDS法流程圖法流程圖 （以動(dòng)物組織為例）（以動(dòng)物組織為例） 動(dòng)物組織動(dòng)物組織細(xì)胞裂解細(xì)胞裂解上層溶液上層溶液組織勻漿組織勻漿抽提抽提干燥溶解干燥溶解離心洗滌離心洗滌酒精沉淀酒精沉淀DNA溶液溶液基因組基因組DNADNASDSSDS法法RNARNA提取的通用方法提取的通用方法異硫氰酸胍/苯酚法 原理：細(xì)胞在變性劑異硫氰酸胍的作用下被裂解，同時(shí)核蛋白體上的蛋白變性，核酸釋放；釋放出來(lái)的DNA和RNA由于在特定pH下溶解度的不同而分別位于整個(gè)體系中的中間相和水相，從而得以分離；有機(jī)溶劑抽提，沉淀，得到純凈RNA。 異硫氰酸胍/

4、苯酚法 步驟:材料準(zhǔn)備：盡量新鮮。裂解變性：異硫氰酸胍（亞硫氫胍，巰基乙醇，N-月桂肌氨酸等）。 使細(xì)胞及核蛋白復(fù)合物變性，釋放RNA，有效抑制核酸酶。純化分離：苯酚，氯仿，異戊醇。苯酚/氯仿可抽提去除雜物。洗滌：70乙醇。沉淀：異丙醇、無(wú)水乙醇。 乙酸鈉（pH4.0）：維持變性的細(xì)胞裂解液的pH值，沉淀RNA。 此外還常用氯化鋰選擇沉淀RNA。RNARNA提取的通用方法提取的通用方法TRIzolTRIzol試劑提取試劑提取RNARNA、DNADNA TRIzol試劑有多組分分離作用,最大特點(diǎn)是可同時(shí)分離一個(gè)樣品的RNADNA蛋白質(zhì) TRIzol使樣品勻漿化, 因同時(shí)含有RNase抑制劑可保持RNA的完整性. 加入氯仿離心后,溶液分為水相和有機(jī)相 水相：RNA-異丙醇沉淀回收； 中間層：DNA-乙醇沉淀回收； 有機(jī)相：蛋白質(zhì)-異丙醇沉淀回收NaINaI法提取外周血細(xì)胞基因組法提取外周血細(xì)胞基因組DNADNA 實(shí)驗(yàn)結(jié)果：260=0.123Abs; 280=0.086Abs Ratio