1、題目：木瓜酶活性的題目：木瓜酶活性的提高提高對蛋白質(zhì)水解效果對蛋白質(zhì)水解效果 成員：2008級生物工程 王佳寧 2008級生物工程 漆亞喬 2008級生物技術(shù) 李芮實驗?zāi)康模簩嶒災(zāi)康模?以未成熟的以未成熟的青果木瓜青果木瓜漿汁為原料，提漿汁為原料，提取取木瓜酶木瓜酶（木瓜蛋白酶、木瓜凝乳蛋白（木瓜蛋白酶、木瓜凝乳蛋白酶酶A A、木瓜凝乳蛋白酶、木瓜凝乳蛋白酶B B及木瓜肽酶）。通及木瓜肽酶）。通過利用適量的過利用適量的激活劑激活劑，提高木瓜酶的活，提高木瓜酶的活性，得到更好的蛋白質(zhì)水解能力。尋找最性，得到更好的蛋白質(zhì)水解能力。尋找最適激活劑，在生產(chǎn)、應(yīng)用中盡量避免加入適激活劑，在生產(chǎn)、應(yīng)用中盡

2、量避免加入抑制劑抑制劑。方法：方法： 收集新鮮木瓜乳汁，處理后得到木瓜收集新鮮木瓜乳汁，處理后得到木瓜酶液。向酶液中加入不同添加劑（激活劑酶液。向酶液中加入不同添加劑（激活劑或抑制劑），與或抑制劑），與酪蛋白酪蛋白底物反應(yīng)相同時間，底物反應(yīng)相同時間，通過測定反應(yīng)后通過測定反應(yīng)后酪氨酸酪氨酸的含量，說明不同的含量，說明不同添加劑對木瓜酶催化反應(yīng)的影響。添加劑對木瓜酶催化反應(yīng)的影響。取青木瓜漿汁取青木瓜漿汁制成濁液制成濁液過濾過濾取濾液透析取濾液透析制成酶液制成酶液在不同添加劑環(huán)在不同添加劑環(huán)境下測定酶活境下測定酶活繪制酪氨酸繪制酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線標(biāo)準(zhǔn)曲線根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，分析不同添加劑分析

3、不同添加劑的作用機(jī)理的作用機(jī)理實驗步驟：a.a.取取9 9支試管，編號，按下表格加入試劑。支試管，編號，按下表格加入試劑。 單位：單位：(ml)(ml)1 11 11 11 11 11 11 11 11 1酚試劑酚試劑5 55 55 55 55 55 55 55 55 5碳酸鈉溶碳酸鈉溶液液0.20.20.30.30.40.40.50.50.60.60.70.70.80.80.90.91 1蒸餾水蒸餾水0.80.80.70.70.60.60.50.50.40.40.30.30.20.20.10.10 0500ug/500ug/mlml酪氨酸溶酪氨酸溶液液8 87 76 65 54 43 32

4、21 10 0試劑試劑b.b.振蕩、置于振蕩、置于3030恒溫水中恒溫水中顯色顯色15min15minc.c.用分光光度計在用分光光度計在A680nmA680nm處測定處測定680nm680nm的光吸收值的光吸收值d.d.以酪氨酸含量為橫坐標(biāo)，光吸收值為縱坐標(biāo)，繪制酪蛋白的標(biāo)準(zhǔn)曲線以酪氨酸含量為橫坐標(biāo)，光吸收值為縱坐標(biāo)，繪制酪蛋白的標(biāo)準(zhǔn)曲線, , 根據(jù)散點寫出回歸線性方程。根據(jù)散點寫出回歸線性方程。繪制酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線：繪制酪氨酸標(biāo)準(zhǔn)曲線：試劑試劑0 01 12 23 34 45 56 67 78 8蒸餾水蒸餾水3 37 72 21 11 11 11 1木瓜酶液木瓜酶液1 11 11 11 11

5、 11 11 11 1NaNa2 2S0S03 31 1EDTAEDTA二鈉二鈉1 11 11 1CuSOCuSO4 41 11 1ZnSOZnSO4 41 11 1酪蛋白酪蛋白5 55 55 55 55 55 55 55 555水浴水浴反應(yīng)反應(yīng)1010分鐘后，用分鐘后，用2ml 10%2ml 10%三氯乙酸沉淀蛋白質(zhì)三氯乙酸沉淀蛋白質(zhì) 過濾，取濾液過濾，取濾液2ml2ml碳酸鈉碳酸鈉7 77 77 77 77 77 77 77 77 7酚試劑酚試劑1 11 11 11 11 11 11 11 11 1用分光光度計在用分光光度計在A680nmA680nm處測定光吸收值。處測定光吸收值。不同添加

6、劑不同添加劑環(huán)境下酶活力的測定：環(huán)境下酶活力的測定：0有蛋白有蛋白無酶無酶1無蛋無蛋白有白有酶酶2無添無添加劑加劑3NaNa2 2S0S03 34EDTAEDTA二鈉二鈉5CuSOCuSO4 46ZnSOZnSO4 47CuSOCuSO4 4EDTAEDTA二鈉二鈉8ZnSOZnSO4 4EDTAEDTA二鈉二鈉現(xiàn)象現(xiàn)象(白色沉白色沉淀淀)+012345678現(xiàn)象現(xiàn)象(淺藍(lán)淺藍(lán)-灰藍(lán)灰藍(lán)-深黑藍(lán)深黑藍(lán))+OD值值0.3140.0671.3782.4621.7200.8120.6940.7540.562 0 1 2 3 4 5 6 7 80號號2號號3號號4號號5號號6號號7號號8號號0 有蛋白

7、有蛋白無酶無酶8ZnSO4EDTA二鈉二鈉7CuSO4EDTA二鈉二鈉3Na2S034EDTA二鈉二鈉1無蛋白無蛋白有酶有酶5CuSO46ZnSO42無添加劑無添加劑結(jié)論：結(jié)論：l在在55水浴條件下，木瓜酶與足量底物反應(yīng)水浴條件下，木瓜酶與足量底物反應(yīng)10min，得到，得到的酪氨酸用酚試劑測定其含量。根據(jù)的酪氨酸用酚試劑測定其含量。根據(jù)OD值計算可知：值計算可知：lNa2SO3和和EDTA二鈉可以提高木瓜酶活性，分別提高二鈉可以提高木瓜酶活性，分別提高78.7%和和24.8%lCu2+和和Zn2+的引入會降低木瓜酶的活性，分別減小的引入會降低木瓜酶的活性，分別減小41.1%和和49.6%l在純木瓜酶的反應(yīng)中可得知：在純木瓜酶的反應(yīng)中可得知：lEDTA二鈉可與金屬離子螯合，降低金屬對酶活的影響。二鈉可與金屬離子螯合，降低金屬對酶活的影響。l但是加入順序不同效果就