1、 收稿日期 :2008-10-29; 修回日期 :2008-12-20基金項目 :內蒙古自治區蒙藥現代化研究項目 蒙藥材質量標準研究 (NO. MX2005Z B002 作者簡介 :高建萍 (1961- , 女 , 內蒙古醫學院藥學院天然藥物化學教研室副教授 。 蒙醫藥論壇 超聲提取山茶花總黃酮的工藝研究高建萍 , 王玉華 , 賈國賢(內蒙古醫學院 藥學院 , 內蒙古 摘 要 :目的 :。 方法 :用超聲提取技術 , 確立最佳 提取條件 , 采用正交表 L 9(34 、 、 提取次數 、 對總黃酮提取的影響 , 以總黃酮 :提取劑濃度 >提取次數 >提取時 間 >乙醇用量 ,

2、 :60%的乙醇 、 提取次數 3次 、 超聲提取時間 30m in 、 料液比 1 15。結論 :超 、 方法簡單 、 結果準確 。關鍵詞 :山茶花 ; 總黃酮 ; 正交試驗 ; 超聲提取中圖分類號 :R284. 2 文獻標識碼 :A 文章編號 :1004-2113(2009 01-0052-03U LTRAS ONI C EXTRACTI ON TECHNI QUEOF T OTAL F LAV ONE FR OM CA M E LL I AG AO J ian -p ing, WANG Yu -hua, J I A Guo -xian(D epart m ent of Phar m ac

3、y, InnerM ongolia M edical College, Hohhot 010059China Abstract:O bjecti ve:To study the ultras onic extracti on technique of t otal flavonone in ca melliaand op ti m ize extracti on technique . M ethods:An orthogonal test table L 9(34was used with the fact ors of ethanol concentrati on extracting t

4、i m e and repetiti on ti m e, and the quantity of ethanol . Results:The content of t otal flavones was deter m ined by s pectr ophot o metry . The fact ors effected the extracti on tech 2nique are the consistency of extracti on liquid >the extracti on ti m es >the ti m e of extracti on >the

5、 quanti 2ty of ethanol . The op ti m u m technol ogy was:extracti ong ti m e 30m in, repetiti on three ti m es, 60%ethanol as extracting s olvent, s olid t o liquid rati o 1 15. Conclusi on:The ultras onic extracti on techniques of t o 2tal flavonoids in ca mellia, was si m p le and accurate .Key wo

6、rds:ca mellia; t otal flavones; orthogonal test; ultras onic extracti on 山茶花主產于云南及長江以南各地 , 用于希拉 病引起的皮膚和眼睛發黃 , 血希拉即亞瑪引起的頭 痛1。 有關研究表明山茶花中有效成分主要是總黃酮 2。 但目前國內對山茶花總黃酮提取工藝研究未見報道 。 為了更好地開發利用這一植物資源 , 本實驗探討了對山茶花總黃酮的最佳提取工藝 。 實驗采用了鋁鹽 A l (NO 3 3顯色 , 可見分光光度法 測定 , 通過正交實驗得到最佳提取條件 , 旨在為蒙25 A cta A cad M ed N ei M

7、ongol Feb . 2009 V ol . 31 N o . 1醫臨床用藥及對山茶花的綜合開發利用提供科學 依據 。1 實驗部分1. 1 儀器與試劑721分 光 光 度 計 (上 海 第 三 分 析 儀 器 廠 ; A s3120超聲提取器 (天津奧特賽思儀器有限公 司 ; F A2004電子天平 (上海精科天平 。蘆丁對 照品 (中國藥品生物制品檢定所提供 , 100086 20306 ; 無水乙醇 、 石油醚 、氧化鈉 、 甲醇試劑1. 2 樣品來源內蒙古中蒙醫院 、 內蒙古天力藥業公司 。 1. 3 最大吸收波長的選擇精密 稱 取 真 空 干 燥 至 恒 重 的 蘆 丁 對 照 品

8、2510mg, 以 95%的乙醇溶解 , 然后用 30%的乙醇定 容至 100mL 容量瓶中 , 靜止 15m in 后取 1mL 置于 25mL 的容量瓶中 , 加 30%的乙醇至 6mL, 加 5% Na NO 2110mL 搖勻 , 放置 6m in, 加 10%A l (NO 3 3 110mL 搖 勻 放 置 6m in 。再 加 1mol/LNa OH 210mL, 然后用 30%的乙醇定容至刻度 , 用 1c m 的 比色 皿 , 以 30%的 乙 醇 做 空 白 對 照 , 在 450 540nm 之間 , 每隔 5n m 測一次吸光度 , 確定最大吸 收波長為 510n m

9、。1. 4 標準曲線的繪制 3, 4取 120減 壓 干 燥 至 恒 重 的 蘆 丁 對 照 品 10167mg, 精密稱定 , 置 50mL 量瓶中 , 加 60%乙醇 適量 , 溫熱使溶解 , 放冷 , 加 60%乙醇稀釋至刻度 , 搖勻 ; 即得 (每 l m L 中含無水蘆丁 012134mg 。精 密吸取 010、 110、 210、 310、 410、 510、 610mL 對照品 溶液分別置 25mL 量瓶中 , 各加 30%乙醇稀釋至 6mL, 加 5%亞硝酸鈉溶液 l m L, 使混勻 , 放置 6m in, 加 10%硝酸鋁溶液 1mL, 搖勻 , 放置 6m in, 加

10、4%氫 氧化鈉試液 10mL, 加 30%乙醇至刻度 , 搖勻 , 放置 15m in 。 在 510n m 波長處測定吸收度 。以吸收度 對溶液濃度進行回歸分析 , 結果濃度在 8154 5112g/mL范圍內呈良好的線性關系 , 回歸方程 Y =010123X -010039, r =019998。1. 5 山茶花總黃酮的提取方法準確稱量山茶花樣品 2g 于具塞錐形瓶 , 加入 一定量提取溶劑超聲提取總黃酮 , 改變提取條件 , 用不同提取劑 、 不同濃度 、 不同提取時間 、 溫度以確 , 然后進 ,52 正交試驗與結果分析2. 1 提取溶劑的選擇黃酮苷元易溶于甲醇 、 乙醇等有機溶劑

11、, 難溶 于水 ; 而黃酮苷易溶于水 , 難溶于有機溶劑 。因此 可用不同濃度的有機溶劑和水來提取 。分別稱取 山茶花樣品 2g, 用 20mL 石油醚浸泡過夜 , 濾過 , 濾 渣用不 同 濃 度 的 甲 醇 、 乙 醇 各 提 取 2次 , 每 次 30m in, 發現乙醇提取率最高 , 甲醇次之 , 考慮到試 劑安全問題 , 選用乙醇水溶液提取 。2. 2 提取的基本工藝流程樣品 石油醚脫脂 過濾 (濾液棄去 濾渣 (正交設計實驗 2. 3 試驗因素與因素水平的確立 6, 7根據預實驗結果 , 選出提取時間 , 提取次數 , 料 液比以及乙醇濃度 4個提取因素 , 每個因素 3個水 平

12、(表 1 的 L9(3×4 正交設計方案 。2. 4 正交試驗 8為了確保產品質量 , 以控制樣品黃酮的含量為指標 , 選用 L9(3×4 正交試驗表安排試驗 (表 2 。 2. 5 結果分析對正交試驗有關數據作極差分析 , 結果見表 1, 2, 最佳超聲提取工藝各因素對總黃酮提取率影響程度依次為 A1>C 3>B 2>D 3, 即乙醇的濃度為 60%, 超聲時間為 30m in, 超聲次數為 3次 , 最佳料 液比為 1 15。 表明乙醇的濃度對山茶花中總黃酮 含量的影響最大 , 其次是提取次數 , 而其他因素不顯著 。 優選的最佳工藝條件為 A1C 3

13、B 2D 3。 3 5內蒙古醫學院學報 2009年 2月 第 31卷 第 1期 表 1 水平與因素 Tab . 1 Fact ors and levels水 平 level乙醇濃度 (% Aethanol concentrati on提取時間 (m in Bextracting ti m e提取次數 Crepetiti on ti m e料液比 D rati o of s olid t o liquid1602011 9 2703021 12 3804031 15表 2 正交設計及結果Tab . 2 L 9(3×4 orthogonal desigl and results No .

14、 A B C D(%1111115221221196313332146421231131522311141623121128731320196832131115933211122K 15194317941084115K 24100415241494120K 33133419641834192k 11198112611361138k 21133115111501140k 31111116511611164R 01870139017501263 討論超聲波是一種彈性機械振動波 , 它可產生強烈 振動 , 高速度 , 強烈的空化效應以及攪拌作用 , 能破 壞植物藥材的細胞膜 , 使溶媒滲透到藥材細胞

15、中 , 從而加速藥材的有效的釋放和溶出 。與傳統的容, , 提高了效率 , , 超聲波提取法將成為植物 。參考文獻1布和巴特爾 , 額爾敦寶力高 . 蒙藥手冊 M.沈陽 :遼寧 民族出版社 , 1995:269-2702袁麗萍 , 范麗 , 董六一 . 山茶花總黃酮 TFC 對實驗性心 肌缺血的保護作用 J .中藥新藥與臨床藥理 , 2004; 15 (64 :25-283黃鎖義 , 姚小敏 . 竹葉中總黃酮的提取及鑒別 J .時珍 國藥研究 , 2006; 17(7 :12284馬陶陶 , 張群林 , 李俊 , 等 . 三氯化鋁比色法測定中藥總 黃酮方法的探討 J .時珍國藥研究 , 2008; 19(1 :54-565肖建波 , 鄒建峰 , 朱華 , 等 . 正交設計提取梨皮總黃酮 J .中國林副特產 , 2004; 12(6 :9-106馬慧萍 , 賈正平 , 謝景文 , 等 . 淫羊藿總黃