1、丁苯酞治療大鼠腦缺血再灌注損傷作用機制的研究         11-06-05 16:50:00     編輯：studa20                 作者：鄭獻召 張三軍 石莉 宋學云 郭宗艷 張勇【關鍵詞】  丁苯酞；大鼠；腦缺血再灌注；研究    

2、0;     丁苯酞軟商品名為恩必普，其化學名稱為消旋-3-正丁基苯酞，由石藥集團恩必普藥業有限公司生產，是我國擁有自主知識產權的國家一類新藥。國內外有關丁苯酞注射液神經保護作用的大部分研究都集中在急性腦缺血模型，有關丁苯酞注射液作用于腦缺血再灌注模型的實驗研究報道尚未見報道。本文探討丁苯酞治療大鼠腦缺血再灌注損傷的作用機制，為臨床治療腦缺血再灌注損傷提供理論基礎。1  材料與方法1.1  實驗動物及分組  健康雄性Wistar大鼠36只，體質量240280g，由河南省實驗動物中心提供。隨機將大鼠分為4組，每組各9只。A組為

3、假手術組，B組為缺血再灌注組，C組為丁苯酞低劑量治療組，D組為丁苯酞高劑量治療組。1.2  實驗動物模型的建立  改良線栓法制作大鼠左側大腦中動脈阻塞腦缺血模型。大鼠仰臥位固定，縱行切開左側頸部旁正中皮膚，鈍性分離左側頸總動脈、頸外動脈、頸內動脈和翼腭動脈，在近心端根部結扎翼腭動脈，顯微動脈夾暫時夾閉頸總動脈和頸內動脈，在頸外動脈兩結扎線間剪一小口，將制備好的栓線經切口插入頸外動脈，牽拉頸外動脈遠端使其與頸內動脈呈一直線并向前送栓線，進入17mm19mm時會遇到輕微阻力感，此時結扎備用線將栓線固定在頸外動脈，外留1cm長尼龍栓線，縫合皮膚。對照組模型制作在分離結扎頸外動脈分

4、支后，栓線僅插入頸外動脈內，不進入頸內動脈。其余步驟同上。1.3  丁苯酞給藥方法  低劑量治療組（C組）給予丁苯酞20mg/kg，高劑量治療組（D組）給予丁苯酞40mg/kg，B組給予等劑量生理鹽水。假手術組不給藥。1.4  神經癥狀評分標準  缺血2h再灌注24h后，參考Bederson1的5級分級法，于術后24h進行神經功能的行為學評分：0級：無功能缺損；1級：不能完全伸展右前肢；2級：右前肢屈曲，向右側推動時阻力下降；3級：爬行時向右側轉圈；4級：意識水平受抑制，無自主活動，包括術后24h內死亡。1.5  病理檢查  經左心室

5、灌注1.25%戊二醛和1.75%多聚甲醛PBS混合液（pH 7.27.4）固定、取腦。10%中性甲醛固定24h，酒精梯度脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，制成5m切片，常規HE染色，中性樹膠封片，光鏡觀察。1.6  腦梗死體積測定  術后24h斷頭取腦，從前向后做厚2mm的切片，置于2%的TTC溶液中避光溫浴30min，之后用10%甲醛溶液固定，10d內測定梗死體積。1.7  統計學分析  數據以均數±標準差表示，采用SPSS 10.0統計軟件分析。2組均數比較采用t檢驗，多組均數比較采用單因素方差分析，兩變量相關性采用Pearson相關分析，以=0

6、.05為檢驗水平。2  結果2.1  TTC染色結果  假手術組腦片染成均勻紅色，無梗死灶。B組腦組織有蒼白梗死灶，邊界清晰，位于皮質、皮質下白質和基底節。C組和D組的腦片染色后有范圍不等的梗死灶，位置恒定于大腦中動脈供血的額、頂葉皮質及基底節區。2.2  缺血2h再灌注術后24h神經功能評分及腦梗死體積  見表1。表1  丁苯酞治療大鼠缺血再灌注損傷后的神經功能評分及腦梗死體積（略）與缺血再灌注組相比，*P0.05，aP0.05；與低劑量治療組相比，*P0.05，aP0.052.3  腦組織病理學改變  鏡下可見

7、假手術組神經元形態結構正常，間質致密無水腫（圖1）。手術對照組缺血區神經細胞明顯減少，殘存神經細胞胞體縮小，核固縮，胞漿濃縮呈深伊紅染色，神經原纖維疏松，組織間水腫顯著（圖2）。治療組缺血梗死邊界不清，低劑量治療組有部分神經元核固縮，多數神經元結構完整，形態相對正常，間質水腫輕（圖3），高劑量治療組神經細胞基本正常，間質無水腫（圖4）。3  討論    腦缺血是指各種原因所致腦動脈供血障礙而引起相應癥狀、體征、病理生理和病理變化的一類疾病。再灌注是指受阻的血管再通或（和）周圍側支循環開放，使缺血組織的血流供應部分或全部恢復2。當組織、器官缺血一段時間后即

8、使恢復血流再灌注，其缺血損傷也并不減輕，反而加重，甚至使可逆性損傷轉變為不可逆性損傷，這種在原有缺血性損傷基礎上繼發的損傷稱為缺血再灌注損傷3。我們的研究認為，丁苯酞治療腦缺血再灌注損傷主要與以下機制有關4。3.1  保護缺血腦組織和改善腦能量代謝  腦作為能量代謝最活躍的器官，其能量儲備十分有限，血流中斷后，僅能維持數分鐘，能量耗竭是局灶性缺血再灌注引起腦組織最早期和最直接的損傷。丁苯酞能明顯減少腦組織缺血后乳酸的升高和ATP、和磷酸肌酸的降低5，提示NBP具有保護缺血腦組織和改善腦能量代謝的作用。3.2  抑制自由基損傷  與缺血再灌注損傷有關的自由

9、基主要有氧自由基和NO兩種。腦缺血再灌注后，由于線粒體功能障礙、Ca2+超載、環氧化酶及氮氧合酶的激活，自由基生成大大超過了機體保護機制的作用，從而導致DNA、蛋白質及脂類的損傷6。動物實驗研究表明，丁苯酞可以抑制黃嘌呤-黃嘌呤氧化酶反應系統中超氧陰離子自由基的形成，提高神經細胞線粒體和腦灰質總超氧化物歧化酶(SOD)和線粒體谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-PX)活性，增加自由基清除7，從而發揮抗自由基作用。3.3  抑制炎癥損傷  炎癥是造成腦缺血再灌注損傷的一個重要原因8。Ca2+等第二信使的激活、自由基的增多和低氧血癥本身等均可觸發轉錄因子的合成，導致大量致炎基因的表達；內皮細胞表面的黏附分子被誘生，與中性粒細胞表面的互補受體相互作用，導致中性粒細胞與內皮細胞黏附，在細胞因子的協同作用下進入缺血腦組織。中性粒細胞通過粘附和聚集造成微血管阻塞、血流量降低或形成“無復流”現象；活化的中性粒細胞釋放多種具有細胞毒性的蛋白水解酶，降解細胞外基質成分，增加血管通透性而引發水腫，損傷BBB基底膜的完整性使紅細胞溢出，從而促進梗死向出血轉變；中性粒細胞