1、在剛剛過去的半個世紀里，大多數的免疫檢測需要昂貴分析設備和儀器，并且要專業人員操作檢測。雖然這些昂貴的檢測方法具有很高的靈敏度和特異性，但卻因為昂貴、不方便攜帶、專業性等原因，而無法滿足人們健康保障的日常需求。膠體金免疫層析診斷技術是根據免疫反應原理、利用大孔徑微孔濾膜為載體、以膠體金做為固相標記物，來定性、半定量或定量檢測樣本中待測物質的一種膠體金快速免疫分析技術。        膠體金免疫層析法即時檢驗技術（或稱“側流免疫層析技術”和“免疫膠體金技術”等）是20世紀九十年代以來在單克隆抗體技術、免疫層析技術及膠體金顯色技

2、術基礎上發展起來的一項新型體外診斷技術。近年來發展迅速，目前已經在農業、畜牧業、環境檢測、尤其是在家庭自檢領域得到了廣泛應用。膠體金免疫層析診斷試劑已經成為近年來生物產業化最成功的產品之一。 一、即時檢驗與膠體金免疫層析法技術展望        隨著社會的發展，生活水平的提高，人們要求社會保健機構能提供包括實驗室檢驗在內的一系列更加完善的服務。要了解病人的身體狀況和病情以確定治療方案通常需要盡快獲得檢驗結果，從而使病人盡早得到治療。在某些情況下，傳統的中心實驗室（Lab Center ）滿足不了人們這種需求。 19

3、95 年3月，美國臨床實驗室標準化委員會（NCCLS）發表了 AST2-P 文件，即患者床邊體外診斷（POCT）檢驗導則。床邊體外診斷是利用便攜式設備和試劑在數分鐘內得出檢驗結果的一種檢驗方式，廣泛適用于醫院、護理病房、救護單位、保險公司、家庭保健網絡等領域，它的出現使傳統上由專門檢驗人員完成的工作更多地交給了非檢驗人員完成。這是一種快速的檢驗方式，可以滿足人們在時間上的要求，適應現代社會發展的需要。 POCT 不僅具有快速得出結果、操作簡單、容易使用和小型化等特點，而且又無需傳統的醫院實驗場地和設備。這使得私人診所或不具備條件的社會醫療機構也能快速正確地得到診斷。最具魅力的是，很多家庭疾病自

4、檢（Homelab ）產品（最主要的是一步法快檢類產品）也陸續出現，這使得患者在自己家中就可以獨立完成一些疾病的檢測操作。使用"一步法"快檢類家庭自檢產品，自我檢測疾病和監視健康狀況，是未來即時檢驗領域的發展趨勢。圖1. 膠體金免疫層析法即時檢驗產品結構拆分圖生物診斷技術必然向著更方便、更靈敏、更準確的方向邁進， 即時檢驗技術的興起也必然會給就診方式和醫療行為帶來革命。免疫分析技術也同時會向兩個方向發展：一類為全自動化的免疫分析；另一類為以硝酸纖維膜為載體的 POCT 快速免疫分析。前者需要價格昂貴的全自動儀器及與 儀器嚴格配套的各種試劑盒，目前只能在醫療及檢測中心應用，雖

5、也能較快速給出結果，但仍需一定時間，不適合遠離醫療及檢測中心的地區，更不能用于“患者床邊檢驗”、家庭疾病自檢 （Homelab） 及流動或廣泛的普查之用。隨著即時臨床診斷及即時臨床決策和普查的需要，以硝酸纖維素膜為載體的快速診斷方法迅速和廣泛的發展起來。其中九十年代興起的“一步法”快檢技術（ONE-STEP）發展最為迅速，應用也最為廣泛。免疫檢測技術將被日益廣泛地應用于以醫療健康為主的領域以及拓展至非醫療領域（比如食品衛生與安全、動物防疫與檢疫等）進而形成獨立的POCT快檢行業 。 上海派坤生物工程有限公司及時抓住這一世界診斷科技發展的最新動向，著重發展了以基因工程抗原/抗體、單克隆抗體、多肽

6、合成抗原、膠體金標記為核心的免疫法 即時檢驗技術平臺，適時的推出了服務于家庭為主的 居家健康自我檢測產品 （Homelab） 體系。 目前派坤生物家庭自檢產品的使用類別除了疾病的家庭自檢以外，也已涵蓋居家健康自檢，如亞健康檢測、營養保健監測、食品衛生與安全監測、化妝品衛生與安全監測、寵物及家居植物疾病診斷、室內（車內）環境監測、水質監測、藥物濫用監控、出行安全監控等預防保健應用領域。.二、派坤生物即時檢驗技術背景       派坤生物公司（Bioengine）聯合天津大學生命科學與工程研究院率先在中國建立起產品門類齊全的膠體金免疫層析

7、診斷技術的研發、生產基地以及帶領業內同行共同搭建起膠體金快檢技術咨詢平臺:天津大學-派坤生物聯合實驗室,為國內有望介入該領域的生物和醫藥公司提供政策咨詢、行業分析和技術輸出等CRO相關服務，并提供自制的膠體金相關設備、材料、試劑以及參與國內膠體金新興應用領域的項目合作。        派坤生物公司聘請了強大的技術智囊團和公司顧問團，他們均為國內知名的診斷試劑行業專家，天津大學的教授，或海外留學人員，以及國內外診斷試劑公司高級技術人員和管理人員。派坤生物公司的發展模式可概括為以下兩點：   

8、60;    1、天津大學技術研究與生產合作中心（MRC）模式        派坤生物公司采取與技術互補或生產優勢的國內企業或科研單位共建技術研究與生產合作中心（MRC）的方式進入產業領域。公司利用自身的科研渠道優勢定期安排員工或天津大學MRC 的研究生到國內、外研究機構進行技術交流、工作培訓，或邀請各方學者到公司講學，并舉辦學術討論會。此外，派坤生物公司美國和加拿大分支機構還從事國際間科技項目合作和國際貿易項目咨詢、代理的業務。     

9、60;  2、CRO發展模式         天津大學生命科學與工程研究院通過自身不斷發展的委托研發服務體系（Contract Research Organization, CRO）協助生物公司及醫療器械公司設計、經營或管理臨床試驗。協助國內企業將自己的產品打入FDA 國際市場體系，同時代理多家國外著名家庭自檢（Homelab ）品牌產品，將最優質的產品引入中國，以促進國內家庭預防醫學體系的完善以及醫療器械體外診斷行業的發展。         我

10、們的實踐還表明：在國外設立研發中心或者直接引進國外膠體金免疫層析技術以提高企業的研發能力和穩定原料供應，在國內設立生產基地以利用相對較低的人力資源是國內企業比較可行的發展途徑。        在國內的市場需求推動下，在動物檢疫與防疫，食品衛生與安全等領域，即時檢測技術也展示了廣闊的應用空間，比如高致病性禽流感檢測，牛奶抗生素殘留檢測，豬肉瘦肉精檢測等等。派坤生物希望在中國不斷優化升級的產業政策推動下，逐步加大和其他檢測應用領域的公司、科研單位和健康服務機構的項目合作和技術交流，共同將膠體金一步法快速檢測技術的即時檢測內涵不斷

11、擴充和完善。.派坤生物技術平臺基礎派坤生物聯合天津大學生命科學與工程研究院即時檢驗中心（POCT Service Center of Tianjin University）共同開展基因工程抗原抗體、多肽合成抗原、單克隆抗體、膠體金一步法快檢、蛋白質芯片、親和層析、磁分離等方向的基礎研究 ，其天津大學-派坤生物聯合實驗室檢測應用領域的科研方法主要采取電化學庫倫陣列檢測器-HPLC儀器檢測與 膠體金一步法快檢試紙快速檢測相互對照和聯合的方式，共同形成臨床、食品安全等檢測項目的完備解決方案。        派坤生物與美國圣地亞哥B

12、IOMED 納米技術實驗室建立起長期的項目合作和委托生產（OEM）關系，主要針對美國市場上成熟的膠體金一步法快檢系列產品進行技術工藝配方 、抗原、抗體原料和成品、半成品的引進， 通過人員互派、技術互換、聯合研發等方式的不斷交流和合作、共同形成了天津大學現有的膠體金快檢研發基礎平臺。這種國際間合作無疑加快了派坤生物疾病檢測、藥物濫用監測、法醫鑒定、動植物疾病診斷等類別的 POCT/Homelab 產品的國產化研發進程。技術研究和生產合作中心（MRC）派坤生物目前構建的兩個技術研究和生產合作中心 （MRC） 中，天津大學 MRC 側重于在臨床即時檢測、蛋白質芯片、基因診斷等領域跟蹤世界最先進水平的

13、技術，并進行食品安全領域高精尖儀器檢測配合免疫層析試紙條研發的應用研究；以及 美國膠體金一步法快檢類產品線的引進和吸收，經過國內設備和工藝改造在GMP實驗環境下進行中試放大，生產出可供國內企業和科研院所直接應用的大板。其技術優勢主要體現在以下方面：1 適合國情的膠體金一步法快檢產品生產工藝、配方、設備；2 基因工程、生物分離、多肽合成 、單克隆抗體、小分子蛋白偶聯、親和層析、磁分離等其他已有技術基礎；3 率先在國內引進了國際領先的電化學庫倫陣列檢測器-HPLC儀器檢測系統，使天津大學 MRC 在疾病診斷、食品安全、食物營養、毒品檢測、中藥指紋圖譜等檢測領域具備了國際領先的設備優勢。 

14、       此外，美國圣地亞哥 MRC 側重于臨床體外診斷（IVD）方向膠體金標記、乳膠標記等免疫層析類產品工藝配方的研究，并且嚴格按照國際標準進行"一步法"快檢類家庭自檢（Homelab）產品的外協生產。天津大學MRC則根據國內的新情況進行食品安全、動植物疾病診斷等方向的小試和中試研究。        兩個中心配備的主要技術和生產人員很多都在天津大學生命科學與工程研究院學習深造過，具備較高的學歷和技術素養，并經過派坤生物嚴格的公司技術訓練，保

15、證了派坤生物快檢技術的長足進步以及產品的一路領先。        在國內即時檢驗技術產業合作聯盟基礎之上，經過各合作方的共同努力，派坤生物CRO體系對國內即時檢驗產業的科研貢獻以及推動作用主要表現在以下三個方面：.1、膠體金一步法快檢產品快速研發平臺的建立        已經成熟的掌握了單克隆抗體制備技術和小分子蛋白偶聯技術并建立了膠體金標記膠體金一步法快檢產品快速研發平臺；完善了用于膠體金類產品研發的關鍵原料抗原/抗體的快速篩選方案；篩選和專門定制了適合

16、國內生產一步法快檢試劑盒的玻璃纖維膜，聚酯膜，硝酸纖維素膜，吸水紙，塑料外殼，塑料底板（片材）等專用耗材，形成了派坤質量體系下的原材料標準和產品設計和組裝規格、半成品和成品質量標準等，建立了完備的國內、國外半成品（大板）供應體系。2、穩定的膠體金類產品研發標準配方工藝         天津大學MRC師生團隊通過派坤生物不斷的科研項目推進，必要的翻譯和整理了大量的美國 MRC 技術文獻資料、培養了國內眾多的快檢專業人才、并組織撰寫了一步法新產品研究實驗過程工藝的標準研發操作規程（SOP），將樣品墊、金標墊、硝酸纖維素點膜的配方

17、和工藝優化，并固定化以及形成模塊化。        一步法快速檢測試劑盒制備所需的玻璃纖維膜，聚酯膜，硝酸纖維素膜，吸水紙，塑料外殼，塑料底板（片材）等專用耗材標準化等研發思想和操作實踐經驗的形成和完善將極大地降低新產品研發的諸多不確定性，為一步法快速研發平臺的建立提供了便利條件 ，因而可根據國內市場的需要快速研發出一系列新產品。 3、適合中國國情的膠體金類快檢產品生產線設備        天津大學 MRC 已研制成功的連續生產型點膜儀（通用型）

18、是用于膠體金一步法快檢試劑盒等領域的生產型設備，能連續地把reagent均一地分布在硝酸纖維素膜上，在生產效率上大大地高于實驗室用設備，機器配置兩套高精度生化泵、相應點膜管線及點膜頭（均美國進口），可同時點C、T線，不會劃傷膜。該機器的使用只需要引入220CAV/1KVA的電源即可，整機觸摸屏操作，全中文提示，操作簡單，經過大規模生產型企業的考驗，性能非常穩定。        點膜機和切條機是一步法快檢試劑盒的研發和生產的兩種必備的設備，噴金標機則根據金標墊制備工藝不同作為可選設備；國外設備用于 快檢產品生產的一般為全自動化

19、連續生產，不需太多人員操作，但此類設備極其昂貴，而且對耗材提出更苛刻的標準化要求，生產成本很高，不適合中國國情，派坤生物-天津大學 MRC 將在已研制成功的通用型點膜機的基礎上進一步研發適合中國生產實際需要的多型號連續型點膜機，不斷填補國內該產業專業設備方面的空白。 .三、 派坤學苑與膠體金免疫層析法即時檢驗技術推廣膠體金免疫層析法即時檢驗技術的優勢        1971年Faulk 和Taytor將膠體金引人免疫化學，此后免疫膠體金技術作為一種新的免疫學方法，在生物醫學各領域得到了日益廣泛的應用。免疫膠體金技術是四大免疫

20、標記技術之一，問世三十多年來發展十分迅速，在生物醫學各研究領域特別是在醫學檢驗中得到了日益廣泛的應用。目前在醫學 和保健檢測中的應用主要是被通俗的稱為“一步法”的側流免疫層析技術（immunochromatogra-phy）和免疫滲濾技術 （Dot-immuogold filtration assay DIGFA），此外，還有基于膠體金等標記及硝酸纖維素膜的蛋白質芯片技術。        下圖為以 膠體金免疫層析法進行單項檢測和多指標聯合檢測的產品的實物圖（左圖分別為檢測試紙條，檢測卡，檢測筆；右圖為五項聯檢卡）： 

21、;                        免疫層析法 （Immunochromatography）即時檢驗技術是九十年代在美國興起的一種基于免疫膠體金技術的快速 檢測技術， 臨床上應用的產品主要采用雙抗體夾心的設計，其原理是：樣品中如果含有抗原，其首先在加樣墊下與膠體金顆粒標記的單克隆抗體（鼠源）結合，形成抗原-抗體*膠體金復合物，并靠毛細作用向檢測線移動。在檢測板的硝酸纖維薄膜的檢測線上固定有另一

22、單克隆抗體。當樣品處理液層析至檢測線時，可以進一步形成抗體-抗原-抗體*膠體金夾心復合物，并在檢測線上聚積顯現出一條可見的紅線。無此紅線則表示樣品中無抗原存在。從加樣墊中泳動過來的膠體金標記的單克隆抗體是鼠源性的，無論攜帶抗原與否，均可被固定于對照線處的羊抗鼠抗體所捕獲，形成紅色的線條，這表示加樣量充足及液體流動正常。        目前在美國以POCT臨床檢驗新模式為背景以及 膠體金免疫層析法即時檢驗技術為基礎已經形成一個獨立的POCT快檢產業，該產業在美國圣地亞哥已經形成相當的產業規模。·癌胚抗原（CEA）一步

23、法快速檢測原理圖：·癌胚抗原（CEA）一步法快速檢測試劑結構圖：            上圖為癌胚抗原（CEA）一步法快檢試劑條的結構功能區圖。        膠體金免疫層析法即時檢驗技術與以往的任何一項檢測技術相比的突出優點，除了快速（全部檢測過程僅需 3-20分鐘）以外，還包括：        ·準確：采用單克隆抗體技術，使產品的靈敏

24、性和特異性都非常好。        ·簡便：不需其它任何儀器設備，操作也極其簡單，可隨時隨地進行。        ·價格低廉：人員，場地，儀器，管理成本等方面的節省使進行該項檢測的醫療整體成本比較低。        ·人為操作誤差小：由于全部操作過程只有“加樣”一步，所以操作所帶來的誤差非常小。     &#

25、160;  ·可單人份檢測：對標本既能成批檢測，又可單份檢測，患者可立刻拿到結果，不必等待。        ·可進行聯檢：該層析法為通過硝酸纖維素膜進行橫向流動，允許并聯多個試劑條進行多項指標聯合檢測。        ·穩定性好：金標試劑穩定，不用冰箱條件，可長期保存（一般為兩年）。        ·檢測標本種類多：既可用于查血，又可用于檢尿或唾液，因而適合各種人群和場合的普查。        目前該技術已經在國外的臨床醫學檢驗中得到廣泛應用，由于該免疫技術形成的產品使用起來非常簡單，并且在正確操作的前提下檢測結果甚至可以同醫院