1、探究：探究： 培養(yǎng)液中酵母菌培養(yǎng)液中酵母菌 種群數(shù)量的變化種群數(shù)量的變化探究：培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化探究：培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化目的要求目的要求1、學習利用血球計數(shù)板進行微生物計數(shù)的方法、學習利用血球計數(shù)板進行微生物計數(shù)的方法2、實驗探究培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化、實驗探究培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化3、注意樣方法的應用、注意樣方法的應用4、體會影響種群數(shù)量變化的因素、體會影響種群數(shù)量變化的因素1、酵母菌的繁殖方式主要是、酵母菌的繁殖方式主要是:2、酵母菌的呼吸方式是、酵母菌的呼吸方式是:兼性厭氧兼性厭氧(可進行有氧呼吸和無氧呼吸可進行有氧呼吸和無氧呼吸)回顧思考回顧思考: :出

2、芽生殖出芽生殖3、酵母菌的培養(yǎng)條件要注意那些問題、酵母菌的培養(yǎng)條件要注意那些問題? 比如要用適宜的溫度培養(yǎng)比如要用適宜的溫度培養(yǎng),調(diào)節(jié)好調(diào)節(jié)好PH值值,溶氧量的控制等。溶氧量的控制等。 釀酒和做面包都需要酵母菌。這些酵母釀酒和做面包都需要酵母菌。這些酵母菌可以用液體培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）來培養(yǎng)。培菌可以用液體培養(yǎng)基（培養(yǎng)液）來培養(yǎng)。培養(yǎng)液中酵母菌種群的增長情況，與發(fā)酵食品養(yǎng)液中酵母菌種群的增長情況，與發(fā)酵食品的制作有密切關系。的制作有密切關系。例如：酵母菌的種群數(shù)量在營養(yǎng)條件有限的情況下呈例如：酵母菌的種群數(shù)量在營養(yǎng)條件有限的情況下呈“S” 型增長。溫度、養(yǎng)分會影響酵母菌的生長。型增長。溫度、養(yǎng)分會

3、影響酵母菌的生長。探究：培養(yǎng)液中探究：培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化酵母菌種群數(shù)量的變化問題問題 培養(yǎng)液中酵母菌種群的數(shù)量是怎樣隨時間變化的？培養(yǎng)液中酵母菌種群的數(shù)量是怎樣隨時間變化的？溫溫度會影響酵母菌的生長嗎？營養(yǎng)成分會影響酵母菌的生長度會影響酵母菌的生長嗎？營養(yǎng)成分會影響酵母菌的生長嗎？嗎？ 作出假設作出假設 根據(jù)前面所學的知識，針對這一問題作出假設：根據(jù)前面所學的知識，針對這一問題作出假設：討論探究思路討論探究思路 探究所需要的菌種和無菌馬鈴薯培養(yǎng)液或肉湯培養(yǎng)液、試探究所需要的菌種和無菌馬鈴薯培養(yǎng)液或肉湯培養(yǎng)液、試管、血球計數(shù)板（管、血球計數(shù)板（2mm2mm2mm2mm方格）、滴管、顯微

4、鏡等，都由老方格）、滴管、顯微鏡等，都由老師提供。師提供。 在制訂計劃前，你需要思考以下問題，并與同學討論。在制訂計劃前，你需要思考以下問題，并與同學討論。實驗設計實驗設計 將將9支試管分成支試管分成ABC三組，每組三組，每組3支。支。A組為實驗組為實驗組，裝培養(yǎng)液組，裝培養(yǎng)液10 mL，酵母菌母液，酵母菌母液0.1mL,環(huán)境溫度環(huán)境溫度28。B組裝培養(yǎng)液組裝培養(yǎng)液10 mL，酵母菌母液，酵母菌母液0.1mL,環(huán)環(huán)境溫度境溫度5，與，與A組形成溫度條件對照。組形成溫度條件對照。C組不裝培組不裝培養(yǎng)液，只裝無菌水養(yǎng)液，只裝無菌水10mL,酵母菌母液酵母菌母液0.1mL,環(huán)境溫環(huán)境溫度度28，與，

5、與A組形成營養(yǎng)條件對照。組形成營養(yǎng)條件對照。 實驗操作：實驗操作：(1)、配制無菌馬鈴薯、配制無菌馬鈴薯培養(yǎng)液培養(yǎng)液和和酵母菌母液酵母菌母液；(2)、預先設計分裝預先設計分裝。先每次用。先每次用10mL刻度吸管吸取刻度吸管吸取10mL培養(yǎng)培養(yǎng)液到液到A組和組和B組試管，用另一支組試管，用另一支10mL刻度吸管吸取刻度吸管吸取10mL無菌無菌水到水到C組試管。待分裝完畢，每支試管加塞后把試管扎成捆后，組試管。待分裝完畢，每支試管加塞后把試管扎成捆后，然后用記號筆然后用記號筆注明培養(yǎng)基的名稱、組別、日期。注明培養(yǎng)基的名稱、組別、日期。(3)、用高壓蒸汽滅菌鍋、用高壓蒸汽滅菌鍋滅菌滅菌；(4)、接種

6、菌種接種菌種：用滅菌干凈的：用滅菌干凈的1mL刻度吸管每次吸取刻度吸管每次吸取0.1mL酵酵母菌母液，往每支試管中加入。（注意滴加量不要太多，避免母菌母液，往每支試管中加入。（注意滴加量不要太多，避免初始菌數(shù)過多。）初始菌數(shù)過多。）(5)、培養(yǎng)培養(yǎng)：將：將 A、C試管置于試管置于 28的恒溫箱中培養(yǎng)。將的恒溫箱中培養(yǎng)。將 B試管試管置于置于5的恒溫箱中培養(yǎng)。（的恒溫箱中培養(yǎng)。（5的恒溫箱可由某些型號冰箱保的恒溫箱可由某些型號冰箱保溫室設定溫室設定5時代替。）時代替。）(6)、計數(shù)和記錄計數(shù)和記錄：每天取樣時間大體一致，每次每組按序號取：每天取樣時間大體一致，每次每組按序號取一支試管。計數(shù)過程中

7、一定要遵守無菌操作規(guī)范，取樣的吸管一支試管。計數(shù)過程中一定要遵守無菌操作規(guī)范，取樣的吸管要干凈且分開使用，每次取樣前要試管振蕩搖勻。顯微鏡下進要干凈且分開使用，每次取樣前要試管振蕩搖勻。顯微鏡下進行細胞計數(shù)后，立即將數(shù)據(jù)填到記錄表格中。行細胞計數(shù)后，立即將數(shù)據(jù)填到記錄表格中。 分析結果，得出結論分析結果，得出結論 將所得數(shù)值用曲線圖表示出來，分析實驗結果是否支持你將所得數(shù)值用曲線圖表示出來，分析實驗結果是否支持你所做的假設。所做的假設。 酵母菌的種群數(shù)量在營養(yǎng)條件有限的情況下是呈酵母菌的種群數(shù)量在營養(yǎng)條件有限的情況下是呈 “S”型增長，但之后會下降。溫度、營養(yǎng)成分會型增長，但之后會下降。溫度、

8、營養(yǎng)成分會影響酵母菌種群數(shù)量的變化。影響酵母菌種群數(shù)量的變化。探究的結論：探究的結論：一、怎樣進行酵母菌的計數(shù)？一、怎樣進行酵母菌的計數(shù)？ 提示：對一支試管中的培養(yǎng)液提示：對一支試管中的培養(yǎng)液(可定為可定為10ml)中的酵母菌逐個計數(shù)是非常困難的，可以采用中的酵母菌逐個計數(shù)是非常困難的，可以采用抽樣檢測抽樣檢測的方法：先將蓋玻片放在計數(shù)室上，的方法：先將蓋玻片放在計數(shù)室上，用吸管吸取培養(yǎng)液，滴于用吸管吸取培養(yǎng)液，滴于蓋玻片蓋玻片邊緣，讓邊緣，讓培養(yǎng)培養(yǎng)液液自行滲入，多余培養(yǎng)液用濾紙吸去，稍待片自行滲入，多余培養(yǎng)液用濾紙吸去，稍待片刻，待酵母菌細胞全部刻，待酵母菌細胞全部沉降到計數(shù)室底部沉降到計

9、數(shù)室底部，將，將計數(shù)板計數(shù)板放在載物臺的中央，放在載物臺的中央，計數(shù)計數(shù)一個小方格內(nèi)一個小方格內(nèi)的酵母菌數(shù)的酵母菌數(shù) 量，再以此為根據(jù)，量，再以此為根據(jù)，估算估算試管中試管中的酵母菌總數(shù)。的酵母菌總數(shù)。 介紹介紹:血球計數(shù)板的構造血球計數(shù)板的構造1、血球計數(shù)板：、血球計數(shù)板：是顯微鏡上的外掛物件，可用來測是顯微鏡上的外掛物件，可用來測量細胞，細菌等一些微小物體的長度，還有就是測量量細胞，細菌等一些微小物體的長度，還有就是測量數(shù)量，如單位體積細胞的數(shù)量。血球計數(shù)板是由一塊數(shù)量，如單位體積細胞的數(shù)量。血球計數(shù)板是由一塊比普通載玻片厚的特制玻片制成的。玻片中有四條下比普通載玻片厚的特制玻片制成的。玻

10、片中有四條下凹的槽，構成三個平臺，中間的平臺較寬，其中間又凹的槽，構成三個平臺，中間的平臺較寬，其中間又被一短橫槽隔為兩半，每半邊上面被一短橫槽隔為兩半，每半邊上面,刻有一個方格網(wǎng)。刻有一個方格網(wǎng)。化化放大后的方格網(wǎng)計數(shù)室放大后的方格網(wǎng)計數(shù)室 I H G F E D C B A251616252、方格網(wǎng)的構成：、方格網(wǎng)的構成：方格網(wǎng)上刻有方格網(wǎng)上刻有9個大方格，其中個大方格，其中只有只有中間的一個大方格中間的一個大方格為計數(shù)室，計數(shù)室通常有兩種規(guī)格：一種是大方格內(nèi)分為計數(shù)室，計數(shù)室通常有兩種規(guī)格：一種是大方格內(nèi)分為為16中格，每一中格又分為中格，每一中格又分為25小格；另一種是大方格小格；另一

11、種是大方格內(nèi)分為內(nèi)分為25中格，每一中格又分為中格，每一中格又分為16小格。但是不管計小格。但是不管計數(shù)室是哪一種構造，它們都有一個共同的特點，即數(shù)室是哪一種構造，它們都有一個共同的特點，即每一每一大方格都是由大方格都是由1625=2516=400個小方格組成。個小方格組成。3、使用方法、使用方法: 將血球計數(shù)板用將血球計數(shù)板用擦鏡紙擦鏡紙擦凈，在中央的計數(shù)室上擦凈，在中央的計數(shù)室上加蓋專用的蓋玻片，將稀釋后的酵母菌懸液，用吸管加蓋專用的蓋玻片，將稀釋后的酵母菌懸液，用吸管吸取一滴置于蓋玻片的邊緣，使菌液緩緩滲入，多余吸取一滴置于蓋玻片的邊緣，使菌液緩緩滲入，多余的菌液用吸水紙吸取，稍待片刻，

12、使酵母菌全部沉降的菌液用吸水紙吸取，稍待片刻，使酵母菌全部沉降到血球計數(shù)室內(nèi)，加蓋蓋玻片。到血球計數(shù)室內(nèi)，加蓋蓋玻片。5、單位換算、單位換算: 以以1mm1mm為例，大方格的長和寬各為為例，大方格的長和寬各為1mm，深度為，深度為0.1mm，其體，其體積為積為0.1mm3。換算為。換算為1mL：1000/0.1= 104即即1mL是是104 個個0.1mm3 。 4、計數(shù)室的規(guī)格：、計數(shù)室的規(guī)格：計數(shù)室長計數(shù)室長寬有：寬有：1mm1mm, 2mm2mm,3mm3mm等等深度均為深度均為0.1mm。 如果使用規(guī)格為如果使用規(guī)格為16格格25格的計數(shù)室，要格的計數(shù)室，要按對角方位，取左上、右上、左

13、下、右下按對角方位，取左上、右上、左下、右下4個個中格中格(即即100個小格個小格)的酵母菌數(shù)。的酵母菌數(shù)。 如果使用規(guī)格為如果使用規(guī)格為25格格16格的計數(shù)室，除格的計數(shù)室，除了取其了取其4個對角方位外，還需再數(shù)中央的一個個對角方位外，還需再數(shù)中央的一個中格中格(即即80個小方格個小方格)的酵母菌數(shù)（五點取樣的酵母菌數(shù)（五點取樣法）。法）。 出芽的酵母菌，芽體達到母細胞大小一半時，即出芽的酵母菌，芽體達到母細胞大小一半時，即可作為兩個菌體計算。可作為兩個菌體計算。 6、如何計數(shù)呢？、如何計數(shù)呢？規(guī)格為規(guī)格為25格格16格的計數(shù)室，五點取樣法格的計數(shù)室，五點取樣法7、蓋玻片下的培養(yǎng)液厚度為、蓋

14、玻片下的培養(yǎng)液厚度為0.1mm，請推算出將，請推算出將一個小方格范圍內(nèi)的酵母菌數(shù)，換算成一個小方格范圍內(nèi)的酵母菌數(shù)，換算成10ml培養(yǎng)液培養(yǎng)液中酵母菌總數(shù)的公式。中酵母菌總數(shù)的公式。 每每1ml菌液中所含的酵母菌個數(shù)計算公式菌液中所含的酵母菌個數(shù)計算公式 （以（以1mm1mm為例）：為例）： （1）16格格25格的血球計數(shù)板計算公式格的血球計數(shù)板計算公式 酵母細胞數(shù)酵母細胞數(shù)/ml=(100小格內(nèi)酵母細胞個數(shù)小格內(nèi)酵母細胞個數(shù)/100)400 104 稀釋倍數(shù)稀釋倍數(shù) 即：一小方格內(nèi)酵母菌個數(shù)即：一小方格內(nèi)酵母菌個數(shù) 4 106稀釋倍數(shù)稀釋倍數(shù) （2）25格格x16格的血球計數(shù)板計算公式格的血

15、球計數(shù)板計算公式 酵母細胞數(shù)酵母細胞數(shù)/ml=(80小格內(nèi)酵母細胞個數(shù)小格內(nèi)酵母細胞個數(shù)/80)400 104 稀釋倍數(shù)稀釋倍數(shù)即：一小方格內(nèi)酵母菌個數(shù)即：一小方格內(nèi)酵母菌個數(shù) 4 106稀釋倍數(shù)稀釋倍數(shù) 課本中大方格的長和寬各為課本中大方格的長和寬各為2mm，深度為，深度為0.1mm，其體積為其體積為0.4mm3。換算為。換算為1mL：1000/0.4 = 2.5103 ，即即1mL是是 2.5103個個 0.4mm3。 則：每則：每1ml菌液中所含的酵母菌個數(shù)計算公式菌液中所含的酵母菌個數(shù)計算公式（2mm 2mm ） ：（1）16格格25格的血球計數(shù)板計算公式格的血球計數(shù)板計算公式 酵母細

16、胞數(shù)酵母細胞數(shù)/ml=(100小格內(nèi)酵母細胞個數(shù)小格內(nèi)酵母細胞個數(shù)/100)400 2.5103稀釋倍數(shù)稀釋倍數(shù)即：一小方格內(nèi)酵母菌個數(shù)即：一小方格內(nèi)酵母菌個數(shù)106稀釋倍數(shù)稀釋倍數(shù)（2）25格格x16格的血球計數(shù)板計算公式格的血球計數(shù)板計算公式: 酵母細胞數(shù)酵母細胞數(shù)/ml=(80小格內(nèi)酵母細胞個數(shù)小格內(nèi)酵母細胞個數(shù)/80)400 2.5103 稀釋倍數(shù)稀釋倍數(shù) 即：一小方格內(nèi)酵母菌個數(shù)即：一小方格內(nèi)酵母菌個數(shù)106稀釋倍數(shù)稀釋倍數(shù)使酵母菌混合均勻。使酵母菌混合均勻。不需要，因不同時間取樣已形成對照。不需要，因不同時間取樣已形成對照。 需要。盡量減少誤差。對每個樣品計需要。盡量減少誤差。對每

17、個樣品計數(shù)三次數(shù)三次,取其平均值。取其平均值。二、從試管中吸出培養(yǎng)液進行計數(shù)之前，建二、從試管中吸出培養(yǎng)液進行計數(shù)之前，建議你將試管輕輕振蕩幾次。這是為什么？議你將試管輕輕振蕩幾次。這是為什么？ 三、本探究需要設置對照嗎？如果需要三、本探究需要設置對照嗎？如果需要,請討論對照組應怎樣設計和操作，如果請討論對照組應怎樣設計和操作，如果不需要，請說明理由。不需要，請說明理由。 四、需要做重復實驗嗎？四、需要做重復實驗嗎？ 時間時間（d） 酵母菌酵母菌細胞數(shù)量（細胞數(shù)量（ 106個個/mL） A組 B組 C組A1A2A3平均B1B2B3平均C1C2C3平均1234567五、怎樣記錄結果？記錄表怎樣設

18、計？五、怎樣記錄結果？記錄表怎樣設計？ . 只計數(shù)相鄰兩邊及其頂角的只計數(shù)相鄰兩邊及其頂角的酵母細胞數(shù)酵母細胞數(shù) 稀釋培養(yǎng)液。稀釋的目的是便于酵母菌懸液的計數(shù)，以每稀釋培養(yǎng)液。稀釋的目的是便于酵母菌懸液的計數(shù)，以每小方格內(nèi)含有小方格內(nèi)含有4-5個酵母細胞為宜，一般稀釋個酵母細胞為宜，一般稀釋10倍即可。倍即可。八、血球計數(shù)板的清潔八、血球計數(shù)板的清潔 血球計數(shù)板使用后，用自來水沖洗，切勿用硬物洗刷，洗血球計數(shù)板使用后，用自來水沖洗，切勿用硬物洗刷，洗后自行晾干或用吹風機吹干，或用后自行晾干或用吹風機吹干，或用95%的乙醇、無水乙醇、丙的乙醇、無水乙醇、丙酮等有機溶劑脫水使其干燥。通過鏡檢觀察每

19、小格內(nèi)是否殘留酮等有機溶劑脫水使其干燥。通過鏡檢觀察每小格內(nèi)是否殘留菌體或其他沉淀物，若不干凈，則必須重復清洗直到干凈為止。菌體或其他沉淀物，若不干凈，則必須重復清洗直到干凈為止。六、如果一個小方格內(nèi)酵母菌過多，難以數(shù)清，應當六、如果一個小方格內(nèi)酵母菌過多，難以數(shù)清，應當采取怎樣的措施？采取怎樣的措施？ 七、對于壓在小方格界線上七、對于壓在小方格界線上的酵母菌，應當怎樣計數(shù)？的酵母菌，應當怎樣計數(shù)？ 表達和交流表達和交流 1、向全班匯報本小組、向全班匯報本小組7天的數(shù)據(jù)，算天的數(shù)據(jù)，算出每一天全班各組數(shù)據(jù)的平均值，根據(jù)平出每一天全班各組數(shù)據(jù)的平均值，根據(jù)平均值重新畫酵母菌種群數(shù)量的增長曲線。均

20、值重新畫酵母菌種群數(shù)量的增長曲線。將這個增長曲線與本小組的曲線進行比較，將這個增長曲線與本小組的曲線進行比較，分析其相似程度，并做出合理的解釋。分析其相似程度，并做出合理的解釋。 2、根據(jù)各組平均數(shù)據(jù)畫出的增長曲線、根據(jù)各組平均數(shù)據(jù)畫出的增長曲線有沒有什么總趨勢？如果有，作出說明。有沒有什么總趨勢？如果有，作出說明。如果設計了無菌水的對照，也畫出增長曲如果設計了無菌水的對照，也畫出增長曲線。線。 3、影響酵母菌的種群數(shù)量增長的因素可、影響酵母菌的種群數(shù)量增長的因素可能是什么？能是什么？ 除了本實驗中溫度、營養(yǎng)以外還包括除了本實驗中溫度、營養(yǎng)以外還包括酵母菌菌種本身性質(zhì)、接種時間、酵母菌菌種本身性質(zhì)、接種時間、p值、值、接種量、溶氧量等影響因素。接種量、溶氧量等影響因素。 1取少量酵母菌液放入血球計數(shù)板直接計數(shù)，測得的數(shù)目是（ ） A活細胞數(shù) B死細胞數(shù) C菌落數(shù) D細胞總數(shù)A2、探究酵母菌的種群數(shù)量實驗中，某學生的部分操作、探究酵母菌的種群數(shù)量實驗中，某學生的部分操作過程如下：過程如下：（1）把）把酵母菌培養(yǎng)液放置于冰箱中培養(yǎng)