1、實實 驗驗 二二細(xì)菌的染色和細(xì)菌細(xì)胞細(xì)菌的染色和細(xì)菌細(xì)胞構(gòu)造的察看構(gòu)造的察看 細(xì)菌的染色和細(xì)菌細(xì)胞構(gòu)造的察看 目的要求目的要求 染色劑和染色的原理染色劑和染色的原理 實驗資料實驗資料 實驗程序?qū)嶒灣绦?思索題思索題目的要求目的要求 學(xué)習(xí)微生物涂片學(xué)習(xí)微生物涂片 掌握細(xì)菌的普通染色發(fā)和革蘭氏染色掌握細(xì)菌的普通染色發(fā)和革蘭氏染色 進一步熟練掌握顯微鏡油鏡的運用技術(shù)進一步熟練掌握顯微鏡油鏡的運用技術(shù) 察看和識別細(xì)菌細(xì)胞的特殊構(gòu)造察看和識別細(xì)菌細(xì)胞的特殊構(gòu)造染色劑和染色原理染色劑和染色原理 微生物染色的根本原理，是借助物理和化學(xué)要素的作用而進展的。微生物染色的根本原理，是借助物理和化學(xué)要素的作用而進展

2、的。物理要素如：細(xì)胞及細(xì)胞物質(zhì)對染料的毛細(xì)景象、浸透、吸附作物理要素如：細(xì)胞及細(xì)胞物質(zhì)對染料的毛細(xì)景象、浸透、吸附作用等。用等。 化學(xué)要素如：正負(fù)離子之間的相互吸引等化學(xué)要素如：正負(fù)離子之間的相互吸引等 染色劑染色劑 染料按其電離后所帶電荷的性質(zhì)可分為以下類型：染料按其電離后所帶電荷的性質(zhì)可分為以下類型： 1. 酸性染料：如酸性復(fù)紅、剛果紅、伊紅、藻紅、苯胺黑等。酸性染料：如酸性復(fù)紅、剛果紅、伊紅、藻紅、苯胺黑等。 2. 堿性染料：普通有堿性復(fù)紅、中性紅、孔雀綠、番紅、結(jié)晶堿性染料：普通有堿性復(fù)紅、中性紅、孔雀綠、番紅、結(jié)晶紫、美蘭、甲基紫等，細(xì)菌易被堿性染料染色。紫、美蘭、甲基紫等，細(xì)菌易被

3、堿性染料染色。 3. 中性復(fù)合染料：如伊紅、美蘭等，中性復(fù)合染料：如伊紅、美蘭等，Wright染料和染料和Gimsa染染料等常用于細(xì)胞核染色。料等常用于細(xì)胞核染色。 4. 單純?nèi)旧哼@類染料的化學(xué)親和力低，大多是偶氮化合物，單純?nèi)旧哼@類染料的化學(xué)親和力低，大多是偶氮化合物，不溶于水，但溶于脂肪溶劑中，如蘇丹類不溶于水，但溶于脂肪溶劑中，如蘇丹類Sudan b)的染料。的染料。染色劑和染色原理染色劑和染色原理微生物染色常用染料如下表：微生物染色常用染料如下表：實驗資料實驗資料 涂片染色用的細(xì)菌培育物涂片染色用的細(xì)菌培育物 .大腸桿菌大腸桿菌Escherichia coli) 24h的斜面培育物

4、。的斜面培育物。 .枯草桿菌枯草桿菌Bacillus subtilis) 1216h的斜面培育的斜面培育物。物。 載玻片、接種環(huán)、鑷子、酒精燈、各種染色液、火柴、載玻片、接種環(huán)、鑷子、酒精燈、各種染色液、火柴、無菌牙簽、玻璃鉛筆、蒸餾水。無菌牙簽、玻璃鉛筆、蒸餾水。 顯微鏡、鏡頭油、擦鏡紙、吸水紙、二甲苯等。顯微鏡、鏡頭油、擦鏡紙、吸水紙、二甲苯等。 示范片示范片 .蘇云金芽孢桿菌蘇云金芽孢桿菌Bacillus thuringiensis的芽孢；的芽孢； .膠質(zhì)芽孢桿菌膠質(zhì)芽孢桿菌Bacillus mucillaginosus的莢膜；的莢膜； .枯草芽孢桿菌的鞭毛?？莶菅挎邨U菌的鞭毛。實驗程序

5、實驗程序 細(xì)菌染色的方法和細(xì)菌染色的方法和步驟步驟 細(xì)菌染色的方法細(xì)菌染色的方法: .單染色法：用一種染色液染菌體后，就可以察看單染色法：用一種染色液染菌體后，就可以察看微生物的大小、外形、和細(xì)胞陳列情況，但不能鑒微生物的大小、外形、和細(xì)胞陳列情況，但不能鑒別微生物以及它的特殊構(gòu)造等。別微生物以及它的特殊構(gòu)造等。 .復(fù)染色法：用兩種或兩種以上染色液進展染色，復(fù)染色法：用兩種或兩種以上染色液進展染色，有協(xié)助鑒別微生物的作用，故也稱鑒別染色法。常有協(xié)助鑒別微生物的作用，故也稱鑒別染色法。常用的有：革蘭氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、用的有：革蘭氏染色法、抗酸染色法、芽孢染色法、芽孢染色法、鞭毛染

6、色法、細(xì)胞染色法等。芽孢染色法、鞭毛染色法、細(xì)胞染色法等。 染色技術(shù)的普經(jīng)過程染色技術(shù)的普經(jīng)過程 涂片涂片枯燥固定染色媒染脫色復(fù)染枯燥固定染色媒染脫色復(fù)染水洗枯燥鏡檢水洗枯燥鏡檢實驗程序?qū)嶒灣绦?簡單染色的方法和步簡單染色的方法和步驟驟 簡單染色法普通染色法簡單染色法普通染色法 .菌種：牙垢細(xì)菌菌種：牙垢細(xì)菌 .涂片涂片 .枯燥：自然氣干或酒精燈枯燥：自然氣干或酒精燈高處悄然加熱。高處悄然加熱。 固定固定 .染色：在整個涂面上滴加染色：在整個涂面上滴加齊氏石炭酸復(fù)紅，染色分齊氏石炭酸復(fù)紅，染色分鐘鐘 。 .水洗：傾去染液，用自來水洗：傾去染液，用自來水細(xì)流沖洗至流下的水中無水細(xì)流沖洗至流下的水

7、中無染料顏色為止。染料顏色為止。 枯燥：空氣中自然枯燥。枯燥：空氣中自然枯燥。 鏡檢：在油鏡下察看牙垢鏡檢：在油鏡下察看牙垢中的各種細(xì)菌形狀并繪圖。中的各種細(xì)菌形狀并繪圖。實驗程序?qū)嶒灣绦?革蘭氏染色的方法革蘭氏染色的方法和步驟和步驟 革蘭氏革蘭氏Gram染色法染色法 1. 涂片涂片 2. 初染：在做好的涂面上滴加初染：在做好的涂面上滴加草酸銨結(jié)晶紫染液，染草酸銨結(jié)晶紫染液，染1分鐘，分鐘，傾去染液，流水沖洗至無紫色。傾去染液，流水沖洗至無紫色。 3. 媒染：先用新配的路哥氏碘媒染：先用新配的路哥氏碘液沖去殘水，而后用其覆蓋涂液沖去殘水，而后用其覆蓋涂面面1分鐘，后水洗。分鐘，后水洗。 4.

8、脫色：除去殘水后，滴加脫色：除去殘水后，滴加95%酒精進展脫色約酒精進展脫色約30秒，后秒，后立刻用流水沖洗。立刻用流水沖洗。 5. 復(fù)染：滴加番紅染色液，染復(fù)染：滴加番紅染色液，染1分鐘，水洗后用吸水紙吸干。分鐘，水洗后用吸水紙吸干。 6. 鏡檢：察看染色結(jié)果并繪圖。鏡檢：察看染色結(jié)果并繪圖。實驗程序?qū)嶒灣绦?莢膜染色的方法和莢膜染色的方法和步驟步驟 莢膜染色法示范：莢膜薄，易變形，莢膜染色法示范：莢膜薄，易變形，因此在涂片過程中不能用加熱固定。因此在涂片過程中不能用加熱固定。 1. 取斜面培育取斜面培育72h左右的膠質(zhì)芽孢桿菌涂左右的膠質(zhì)芽孢桿菌涂片，自然枯燥，自然固定。片，自然枯燥，自然

9、固定。 2. 染色：在已自然晾干的涂面上，滴加染色：在已自然晾干的涂面上，滴加1%結(jié)晶紫染色液染色結(jié)晶紫染色液染色2min，以，以20%硫酸硫酸銅沖洗數(shù)次，再用自來水沖洗銅沖洗數(shù)次，再用自來水沖洗1次，晾干。次，晾干。 3. 鏡檢：油鏡察看示范片并繪圖菌體鏡檢：油鏡察看示范片并繪圖菌體紅色，莢膜無色。紅色，莢膜無色。實驗程序?qū)嶒灣绦?鞭毛染色的方法和鞭毛染色的方法和步驟步驟 菌液的制備及涂片：菌種應(yīng)預(yù)先延續(xù)傳代菌液的制備及涂片：菌種應(yīng)預(yù)先延續(xù)傳代56代。代。 1. 接種：先在斜面底部參與接種：先在斜面底部參與0.51mL無菌水，取活化的枯草無菌水，取活化的枯草桿菌桿菌12環(huán)菌苔，接種于無菌水中

10、，環(huán)菌苔，接種于無菌水中，300C 培育培育1518h。 2. 制備菌液：挑取斜面底部近水面處菌苔數(shù)環(huán)，移入制備菌液：挑取斜面底部近水面處菌苔數(shù)環(huán)，移入1mL與與菌種同溫的無菌水中，在菌種同溫的無菌水中，在280C溫箱中保溫溫箱中保溫10min。 3. 鞭毛涂片：先用懸滴法察看其運動性，假設(shè)運動性很強，鞭毛涂片：先用懸滴法察看其運動性，假設(shè)運動性很強，即可涂片。涂片后自然枯燥、固定。即可涂片。涂片后自然枯燥、固定。 染色：染色液必需新配制，涂片必需充分晾干才干染色。染色：染色液必需新配制，涂片必需充分晾干才干染色。 1. 先用剛過濾的鞭毛染色液先用剛過濾的鞭毛染色液A染染7.58min左右。左右。 2. 傾去傾去A液，再加鞭毛染色液液，再加鞭毛染色液B液染液染35min，水洗，自然枯，水洗，自然枯燥。燥。 .用液石炭酸復(fù)紅復(fù)染用液石炭酸復(fù)紅復(fù)染min，水洗、晾干、鏡檢。，水洗、晾干、鏡檢。 油鏡下察看鞭毛的數(shù)目及著生情況示范鏡并繪圖油鏡下察看鞭毛的數(shù)目及著生情況示范鏡并繪圖 菌體