1、農(nóng)產(chǎn)品/食品微生物檢驗課程-微教材微課名稱儀器檢驗方法概述與VIDAS全自動酶聯(lián)免疫分析儀關(guān)鍵詞微生物；致病菌；儀器檢驗方法；VIDAS全自動酶聯(lián)免疫分析儀微課類型講授型微課形式PPT動畫式教學(xué)設(shè)計模式講授法教學(xué)目標(biāo)掌握微生物儀器檢驗方法的必要性和基本情況了解VIDAS全自動酶聯(lián)免疫分析儀進行致病菌篩選的步驟教學(xué)內(nèi)容知識點技能點儀器檢驗方法的必要性儀器檢驗方法概況全自動酶聯(lián)免疫分析儀mini-VIDAS的儀器及試劑盒的構(gòu)成全自動酶聯(lián)免疫分析儀mini-VIDAS的操作過程全自動酶聯(lián)免疫分析儀mini-VIDAS的應(yīng)用情況全自動酶聯(lián)免疫分析儀mini-VIDAS的儀器及試劑盒的構(gòu)成全自動酶聯(lián)免疫

2、分析儀mini-VIDAS的操作過程知識講解儀器檢測方法概述與VIDAS全自動酶聯(lián)免疫分析儀 儀器檢測方法主要有VIDAS快速篩選法，VITEK全自動生化鑒定法和PCR檢驗方法。一、 儀器檢驗方法簡介，主要有儀器檢驗方法的必要性和儀器檢驗方法概況等兩個方面1、 儀器檢驗方法的必要性傳統(tǒng)培養(yǎng)方法過程繁瑣（需要增菌-分離-生化試驗-血清學(xué)鑒定），費時費力（一般需要4-6天），質(zhì)量控制難（來自人員、試劑等的不確定因素過多），易發(fā)生主觀片面錯誤（主要通過肉眼觀察與判讀）；這就需要快速準(zhǔn)確、高效靈敏、自動化的檢驗手段，這就出現(xiàn)了今天我們要一起學(xué)習(xí)的儀器檢測方法。2、 儀器檢驗方法概況微生物快速檢驗方法分

3、為衛(wèi)生指標(biāo)菌和致病菌的快速檢測。其中衛(wèi)生指標(biāo)菌的快速檢測方法主要有紙片法、顯色培養(yǎng)基法。儀器方面主要有1）ATP法：目前產(chǎn)品較多。2）電化學(xué)法：世界上最好的電化學(xué)微生物快速檢測產(chǎn)品4300系統(tǒng)和梅里埃公司推出的Tempo檢測儀； 3）顏色變化法：如梅里埃的3D系列全自動細(xì)菌檢測系統(tǒng)和Foss公司的MicroFoss檢測儀。由于成本較高，在衛(wèi)生指標(biāo)菌檢驗時用的最廣泛的還是紙片法和顯色培養(yǎng)基法，不需要依賴昂貴的儀器設(shè)備，由于常規(guī)商業(yè)無菌檢測需要至少10天的保溫，所以3D針對于商業(yè)無菌檢測也開始廣泛使用致病菌的儀器檢驗方法主要應(yīng)用于快速篩選檢驗、生化鑒定、菌株分型檢測三種類別，其中快速篩選檢測法常用

4、的儀器主要有蛋白水平的酶聯(lián)免疫系統(tǒng)和核酸水平的PCR或熒光PCR；生化鑒定系統(tǒng)主要有半自動的ATB細(xì)菌鑒定儀和全自動的梅里埃公司生產(chǎn)的VITEK2微生物鑒定儀以及BD公司生產(chǎn)的鳳凰100細(xì)菌鑒定儀。菌株分型主要有梅里埃公司生產(chǎn)的DiversiLab。致病菌快速檢驗常用的儀器設(shè)備主要有：全自動酶聯(lián)免疫分析儀Mini-VIDAS 、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)PCR儀、全自動微生物鑒定系統(tǒng)VITEK 2 compact。二、 全自動酶聯(lián)免疫分析儀mini-VIDAS，包括儀器和試劑盒簡介、操作步驟和應(yīng)用現(xiàn)狀等三個方面1、儀器簡介全自動酶聯(lián)免疫分析儀Mini-VIDAS及其配套的試劑盒用于致病菌的篩選檢測，耗時不

5、超過48小時，是一種標(biāo)準(zhǔn)化的分析手段，大大簡化了手工操作的步驟；但要注意的是，它僅作為篩選方法，所獲得的陽性結(jié)果是推定性的，需用標(biāo)準(zhǔn)生物化學(xué)和血清學(xué)反應(yīng)加以確證。全自動酶聯(lián)免疫分析儀Mini-VIDAS使用免疫檢測原理，其中包括免疫捕獲，利用抗體捕捉目標(biāo)抗原；免疫夾心，標(biāo)致著酶的抗體與抗原結(jié)合；以及根據(jù)儀器量度反應(yīng)熒光強度來進行檢測等，所測得的藍色熒光與標(biāo)本中抗原的含量成正比。1）系統(tǒng)構(gòu)成：全自動酶聯(lián)免疫系統(tǒng)是由儀器+試劑盒兩部分構(gòu)成的。2）主機構(gòu)成：檢測倉+顯示面板+鍵盤+打印機+條碼閱讀器3）用途：用來檢測標(biāo)本中可能存在的致病性微生物；4）檢測項目：包括血清、病毒、寄生蟲和食品微生物中的致

6、病菌的檢測；5）分為上下兩個檢測倉，上部用來放置包被吸嘴，下部用來放置試劑條；6）增菌肉湯在試劑條和包被吸嘴之間流動，儀器無任何其他管道，避免了交叉污染。2、試劑盒簡介全自動酶聯(lián)免疫分析儀Mini-VIDAS的配套試劑的組成和原理，試劑盒包含的一次性即可用試劑分為2部分： 第1部分是包被吸嘴SPR，其內(nèi)側(cè)由抗體包被，此包被針作為固相吸管功能；第2部分為條形碼標(biāo)記試劑條，其上有樣品孔、緩沖液、清洗液、標(biāo)志物以及底物，含所有所需試劑，可直接用于檢測。試劑盒由包被吸嘴、說明書、試劑條、標(biāo)準(zhǔn)曲線卡片、質(zhì)控物（包括陽性質(zhì)控C1、陰性質(zhì)控C2和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)S1VIDAS提供10種試條，用于不同致病菌的檢測,主

7、要用于篩選食品和環(huán)境樣品中的6種致病菌,分別是單增李斯特菌、李斯特菌、大腸桿菌O157、沙門氏菌、金葡菌、彎曲菌、試條類別由試條上顏色標(biāo)貼及3字母的標(biāo)志識別。3、操作步驟：25克樣本加入到225 mL增菌肉湯均質(zhì)后，按照標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的相應(yīng)溫度培養(yǎng)，如沙門氏菌先在BPW中培養(yǎng)24-26小時，再取0.1 mL轉(zhuǎn)移到10 mL選擇性增菌肉湯中培養(yǎng)24-26小時，取1-2ml于試管中加熱15min,取0.5ml加入到配套的試劑條上，上機進行檢測，一般會在45分鐘內(nèi)出結(jié)果，儀器會自動判讀，給出陰性或陽性的結(jié)果。按照操作說明書首先編制工作表，進行標(biāo)準(zhǔn)線條碼的輸入，標(biāo)準(zhǔn)曲線的校正，再進行樣本的測定，樣品測定的步驟主要有：1）取相應(yīng)數(shù)量的試劑條和包被吸嘴放入儀器檢測倉的相應(yīng)位置2）1和2號位加入標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)S1，做兩個；3）3號位加入陽性質(zhì)控物C1；4）4號位加入陰性質(zhì)控物C2；5）5號位加入樣品的增菌肉湯；6）檢查試劑條與包被吸嘴是否一一對應(yīng)；7）按壓顯示屏上的“start”按鈕，儀器掃描條碼并運行?？焖贉y定方法只適用于做過校正曲線并且試劑條未過期的項目時用，操作步驟為：在儀器檢測倉內(nèi)分別放入試劑條和包被吸嘴，加入0.5ml樣品的增菌液肉湯，按壓顯示屏上的start section按鈕，再按壓選擇倉位就開始檢測了。4、應(yīng)用及現(xiàn)狀VIDAS是用于食源性致病菌篩選的全球參考方法，6