1、    重組人白細(xì)胞介素-1受體拮抗劑抗肝纖維化的實驗研究        重組人白細(xì)胞介素-1受體拮抗劑(reconbinant human interleukin-1 recpetor antagonist, rhIL-1ra)是IL-1受體的特異阻止劑，能阻止新月體腎小球腎炎發(fā)展、抑制腎間質(zhì)纖維化形成1。但尚未見有關(guān)rhIL-1ra抗肝纖維化的報道。我們運用四氯化碳誘導(dǎo)肝纖維化模型，以低分子肝細(xì)胞生長素（hepatoin, HPN)為陽性對照，探討了rhIL-1ra抗肝纖

2、維化作用。 材料和方法主要藥品及配制：四氯化碳(CCl4，分析純)由重慶化學(xué)試劑廠出品，用前以液體石蠟油稀釋成40%的溶液；rhIL-1ra由北京醫(yī)科大學(xué)分子免疫學(xué)教研室馬大龍教授惠贈，用前以生理鹽水稀釋成1mgml。實驗動物的分組及處理：4液體石蠟液，每周2次。此外，rhIL-1ra處理組、低分子肝細(xì)胞生長素(HPN)處理組和造模組注射CCl4的同時，分別肌肉注射rhIL-1ra、HPN和生理鹽水每天0.5ml/100g。每周稱體重1次以調(diào)節(jié)CCl4及給藥量。各組動物均不限制食量和水量，食物為79.5%單純玉米粉，20%豬油及0.5%膽固醇混合飼料。各組于實驗57d一次性處死，取血分離血清檢

3、測轉(zhuǎn)氨酶(ALT和AST）及血清肝纖維化指標(biāo)；取肝左葉置10%的中性福爾馬林固定，分別作HE和免疫組化染色。主要指標(biāo)的檢測：血清ALT和AST水平采用上海榮盛生物制劑廠ALT、AST試劑盒測試。血清型前膠原（PC）、型膠原（C）和透明質(zhì)酸（HA）、層連粘蛋白(LN)水平分別采用重慶腫瘤研究所和上海海軍醫(yī)學(xué)研究所提供的放免試劑盒測試。肝組織病理學(xué)檢測及肝內(nèi)、型膠原、LN半定量分析按文獻(xiàn)2計數(shù)梭形細(xì)胞數(shù)。采用SABC法檢測肝內(nèi)、型膠原、LN。、型膠原抗體購自上海醫(yī)科大學(xué)病理教研室。層粘連蛋白抗體、ABC試劑盒購自武漢博士德生物制品公司。半定量方法按文獻(xiàn)3。結(jié)果與討論1.肝纖維化大鼠血清生化指標(biāo)及肝

4、臟病理改變：大鼠造模8周肝纖維化形成時血清ALT、AST、PC、C、HA及LN均顯著高于正常對照組，P<0.01，見表1。造模大鼠肝組織HE及免疫組化染色觀察可見肝細(xì)胞索紊亂，肝細(xì)胞濁腫，嚴(yán)重脂肪變性，點、片狀壞死，炎性細(xì)胞浸潤及大量的梭形細(xì)胞增生，膠原纖維沿中央靜脈或匯管區(qū)向外延伸，形成粗大而厚薄不均的纖維間隔包繞肝小葉，可見假小葉形成。1)造模組大鼠血清ALT、AST水平顯著升高，rhIL-1ra處理組于處理后顯著下降，HPN處理組亦同時有所下降，但無統(tǒng)計學(xué)意義（表1）。表明rhIL-1ra抑制實驗性肝細(xì)胞炎癥優(yōu)于HPN。2)血清中PC、C、HA及LN水平于造模后顯著升高，rhIL-

5、1ra處理組血清各指標(biāo)升高明顯受到抑制，其抑制作用與HPN相似。3.rhIL-1ra對肝組織學(xué)的影響：rhIL-1ra處理8周后肝細(xì)胞脂肪變性、壞死、炎性細(xì)胞浸潤明顯較輕，纖維形成減少；匯管區(qū)、纖維間隔以外，肝細(xì)胞之間的梭形細(xì)胞增生顯著受到抑制；、膠原及層粘連蛋白在肝內(nèi)沉積較少（表2）。從以上結(jié)果可看出，rhIL-1ra處理組大鼠血清轉(zhuǎn)氨酶水平，PC、C、HA和LN含量均顯著降低，8周時病理檢查及肝內(nèi)、膠原、LN半定量分析也獲得相似的結(jié)果。說明rhIL-1ra具有抑制肝細(xì)胞炎癥、抗肝纖維化形成的作用，其作用優(yōu)于或與HPN相似。rhIL-1ra抗實驗性肝纖維化的確切機(jī)理不清，可能與其拮抗IL-1

6、致肝纖維化作用有關(guān)。拮抗IL-1促自由基生成作用。近來研究表明，rhIL-1ra可阻斷IL-1誘導(dǎo)的反應(yīng)氧中間物的產(chǎn)生，從而減少脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，減少自由基生成4；直接拮抗IL-1致炎作用。rhIL-1ra可阻斷IL-1或內(nèi)毒素誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)，保護(hù)殘存的肝細(xì)胞免受損害。rhIL-1ra能抑制IL-1誘導(dǎo)的器官非實質(zhì)細(xì)胞增殖、膠原合成5。本文研究亦發(fā)現(xiàn)，造模組梭形細(xì)胞增生活躍，而rhIL-1ra處理組梭形細(xì)胞增生顯著受抑，推測rhIL-1ra可抑制肝內(nèi)梭形細(xì)胞的增生。總之，rhIL-1ra抗肝纖維化的形成可能是通過拮抗以上IL-1的病理作用而實現(xiàn)的。表1rhIL-1ra對大鼠血清ALT、AST、P

7、C、C、LN和HA水平的影響（±s）ALT(U/L)AST(U/L)PC(g/L)C(g/L)LN(g/L)HA(g/L)對照組CCl4#CCl4+HPN*CCl4+rhIL-1ra*#與對照組比較P<0.01；*與CCl4組比較P<0.01 表2rhIL-1ra對大鼠肝組織內(nèi)梭形細(xì)胞數(shù)及、型膠原、LN半定量分析的影響(±s)n梭形細(xì)胞型膠原型膠原層粘連蛋白對照10CCl410#CCl4+HPN8*CCl4+rhIL-1ra10*#與對照組比較P<0.01；*與CCl4組比較P<0.01,*P<0.05；單位為染色積分 作者單位：鄧存良（瀘州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院傳染病科）余光開（瀘州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院傳染病科）陳國民（重慶醫(yī)科大學(xué)病毒性肝炎研究所）劉林（重慶醫(yī)科大學(xué)病毒性肝炎研究所）參考文獻(xiàn)：4誘導(dǎo)大鼠肝纖維化動物模型、型膠原生成變化的研究. 中華病理學(xué)雜志, 1997, 26（2）:74-77.4Tacchini L, Recalcati S, Zazzera BA, et al. Induction of ferritin synthesis in ischemia-reperfused rat liver: analysis of molecular