1、16命題點5生物技術實踐真題重溫練(A卷)1. (2018 江蘇，31)酵母的蛋白質含量可達自身干重的一半，可作為飼料蛋白的來源。有些酵母可以利用工業廢甲醇作為碳源進行培養，這樣既可減少污染又可降低生產成本。研究人員擬從土壤樣品中分離該類酵母，并進行大量培養。下圖所示為操作流程， 請回答下列問稱后土樣梯度稀鐸1H平板澆注分離“劃線純化T大培養(1)配制培養基時，按照培養基配方準確稱量各組分，將其溶解、定容后，調節培養基的,及時對培養基進行分裝，并進行 滅菌。(2)取步驟中不同梯度的稀釋液加入標記好的無菌培養皿中，在步驟中將溫度約(填“25 C” “50 C”或“80 C”)的培養基倒入培養皿混

2、勻，冷凝后倒置培養。 挑取分離平板中長出的單菌落，按步驟所示進行劃線。下列敘述合理的有a.為保證無菌操作，接種針、接種環使用前都必須滅菌b.劃線時應避免劃破培養基表面，以免不能形成正常菌落c.挑取菌落時，應挑取多個菌落，分別測定酵母細胞中甲醇的含量d.可以通過逐步提高培養基中的甲醇的濃度，獲得甲醇高耐受株(4)步驟中，為使酵母數量迅速增加，培養過程中需保證充足的營養和 供應。為 監測酵母的活細胞密度，將發酵液稀釋1 000倍后，經等體積臺盼藍染液染色，用 25X16型血細胞計數板計數5個中格中的細胞數，理論上 色細胞的個數應不少于9,才能達到每毫升 3X10個活細胞的預期密度。答案 (1)pH

3、 高壓蒸汽(濕熱)(2)50 C (3)a、b、d (4)氧氣無 30解析(1)配制培養基時，進行計算、稱量、溶解、定容后，需先調節pH再分裝到錐形瓶中進行高壓蒸汽滅菌。(2)倒平板時的培養基溫度約為 50 C,冷凝后倒置培養。(3)平板劃線時，接種針、接種環使用前和每次劃線后都需要進行灼燒滅菌，以免造成雜菌污染，a正確;劃線時不能劃破培養基表面，否則不能形成正常菌落，b正確；挑取菌落時，應挑取多個不同的菌落，分別測定酵母細胞中蛋白質含量，c錯誤；逐步提高培養基中甲醇的濃度，能篩選出其中的耐受菌，獲得甲醇高耐受菌株，d正確。（4）酵母是兼性厭氧型真菌，在有氧條件下可大量繁殖。酵母擴大培養時，需

4、保證充足的營養和氧氣等條件。由題中信息“經等體積臺盼藍染液染色”可知，計數室中培養液容積實際只有0.1 +2= 0.05 mr3io設5個中方格中無色（活細胞不能被臺盼藍染色）的細胞數目為 x個，則3X 109 = x/5 X25X 1 000 X1000+0.05,解得 x=30。2. （2017 江蘇，31）苯酚及其衍生物廣泛存在于工業廢水中，對環境有嚴重危害。小明同 學準備依據下圖操作步驟，從處理廢水的活性污泥中分離篩選酚降解高效菌株。請回答下列問題：（1）酚降解菌富集培養基含有蛋白月東、K2HPO、MgSG苯酚和水，其中可作為碳源的有（2）將采集到的樣品接種培養，苯酚用量應隨轉接次數增

5、加而逐漸 ,以達到富集 酚降解菌的目的。若上圖平板中菌落過于密集， 應進一步 ,以便于菌落計數與 分離。制備平板培養基時除了需要水、營養物質外，還必須添加 。（3）下圖為連續劃線法示意圖，在圖中 （填圖中序號）區域更易獲得單菌落。（4）采用比色測定法（使用苯酚顯色劑）檢測降解后的廢水中苯酚殘留量。先制作系列濃度梯度并進行顯色反應，下表中15號比色管的苯酚濃度應分別為 呂勺123456苯酚濃度/(mg - L 1)1如果廢水為50 mg/L苯酚溶液，降解后約有21%的苯酚殘留，則需將殘留液稀釋（填序號：51020）倍后，再進行比色。答案（1）蛋白月東、苯酚 （2）增加 稀釋涂布凝固劑（4）0、0

6、.2、0.4、0.6、0.8解析（1）含碳有機物如蛋白豚、苯酚均可作為異養型細菌的碳源。（2）為達到富集苯酚降解菌的目的，培養過程中隨轉接次數增加，應逐漸提高苯酚用量。若平板中菌落過于密集，為便于分離計數，則應進一步稀釋涂布；進行分離計數應制備“固體”培養基，故平板培養基中除需水、營養物質外，還需添加凝固劑。（3）連續劃線法分離菌種時，在最后的劃線區，菌種分散最充分，最宜獲得單菌落。（4）制作系列濃度梯度進行顯色反應應設置無菌水作對照組（苯酚濃度為0）,并設置等差密度梯度，故 15號比色管中苯酚濃度依次為0、0.2、0.4、0.6、0.8。若廢水為50 mg/L苯酚溶液，降解后約有 21%勺苯

7、酚殘留，則降解后殘留 液中苯酚濃度為50X21%= 10.5（mg/L），宜將其稀釋20倍方可達到適宜比色管苯酚濃度。3. （2016 江蘇，29）為了探索海藻酸鈉固定化對綠球藻生長的影響，以及固定化藻對含 Zn2+污水的凈化作用，科研人員用篩選到的一株綠球藻進行試驗，流程及結果如下。請回答下列問題：: : : :;取舌 量 凝 膠 制備固定化綠球藻凝膠球一 清洗23次一培養液中培養 取1-里您取，檸檬酸鈉溶液溶解凝膠球，測定藻數量海靛酸鈉濃度*r 2,0%一. 一 15%725%r 口”. 11)%-空白凝膠球24187296培相時間 圖I0244«72培指I4間Lh)圖2（1）實

8、驗中的海藻酸鈉作用是, CaCl2的作用 是（2）為洗去凝膠球上殘余的CaCl2和其他污染物，并保持綠球藻活性，宜采用洗滌。圖1中1.0%海藻酸鈉組培養24 h后，移去凝膠球,溶液呈綠色,原因是2（3）為探索固定化藻對含 Zn污水的凈化作用，應選用濃度為 海藻酸鈉制備凝膠球。（4）圖2中空白凝膠球組 Zn"濃度下降的原因是 。結合圖1和圖2分析，固定化藻的實驗組2448 h間Zn濃度下降速度較快的主要原因是、一 2+一 、. ，一，_._.> 7296 h間Zn濃度下降速度較慢的原因有答案（1）包埋綠球藻（包埋劑）與海藻酸鈉反應形成凝膠球 （凝固劑）（2）培養液（生理鹽 水）海

9、藻酸鈉濃度過低（凝膠球孔徑過大）（3）2.0% （4）凝膠球吸附 Zn2+ 綠球藻生長 （增殖）速度快 綠球藻生長（增殖）速度減慢，溶液中Zn"濃度較低解析（1）海藻酸鈉溶液在 CaCl2溶液中形成凝膠球，包埋綠球藻。（2）可采用培養液或生理鹽水洗去凝膠土上殘余的 CaCl2和其他污染物，并保持綠球藻活性。溶液呈綠色，說明固定 化的綠球藻數量少，原因是海藻酸鈉濃度過低（凝膠球孔徑過大）。（3）根據圖1可知，濃度為2.0%的海藻酸鈉制備的凝膠球最有利于綠球藻的繁殖。（4）空白凝膠球容易吸附 Zn2+,導2致溶液中Zn濃度下降；根據圖1和圖2分析，固定化藻的實驗組 2448 h間綠球藻數

10、量 增加最快（處于“S”型曲線的 K/2值處），導致Zn"濃度下降速度較快；7296 h間綠球藻 數量基本不再增加。4. （2015 江蘇，31）人工瘤胃模仿了牛羊等反芻動物的胃，可用來發酵處理秸稈，提高秸 稈的營養價值。為了增強發酵效果，研究人員從牛胃中篩選纖維素酶高產菌株，并對其降解纖維素能力進行了研究。請回答下列問題：（1）在樣品稀釋和涂布平板步驟中，下列選項不需要的是 （填序號）。酒精燈培養皿顯微鏡無菌水（2）在涂布平板時，滴加到培養基表面的菌懸液量不宜過多的原因是（3）向試管內分裝含瓊脂的培養基時，若試管口粘附有培養基，需要用酒精棉球擦凈的原因（4）剛果紅可以與纖維素形成紅

11、色復合物，但并不與纖維素降解產物纖維二糖和葡萄糖發生這種反應。研究人員在剛果紅培養基平板上，篩到了幾株有透明降解圈的菌落 （見下圖）。圖中降解圈大小與纖維素酶的 圖中序號）。有關。圖中降解纖維素能力最強的菌株是（填降解圈索落菌落菌落巾（5）研究人員用篩選到的纖維素酶高產菌株J1和J4,在不同溫度和pH條件下進行發酵，測得發酵液中酶活性的結果見下圖，推測菌株 更適合用于人工瘤胃發酵，理由是.=色匚昆-"一基生理卻募式答案（1）（2）培養基表面的菌懸液會出現積液，導致菌體堆積，影響分離效果（3）避免培養基污染棉塞（4）量與活性 （5）J 4發酵過程會產熱和產酸，J4菌株在較高溫度和酸性環

12、境下酶的活性更高解析（1）樣品稀釋和涂布平板的操作不需要顯微鏡。（2）涂布平板時若培養基表面的菌懸液過多，菌體堆積，會影響分離效果。（3）試管口粘附的培養基，需要用酒精棉球擦凈，避免培養基污染棉塞。（4）菌株產生的降解纖維素酶的量越多、活性越高，會使降解圈越大。降 解纖維素能力最強的菌株是，因其菌株菌落最小，但降解圈最大。（5）分析圖中曲線可知，J4菌株在較高溫度和酸性環境下酶的活性更高，而發酵過程會產熱和酸，故該菌株最適合用于人工瘤胃發酵。5. （2014 江蘇，30）為了獲得3 -胡蘿卜素產品，某小組開展了產 3 -胡蘿卜素酵母的篩選 與色素提取實驗。請回答下列問題：（1）實驗用的培養皿常

13、用的兩種滅菌方法是 ;為了減少 滅菌后器皿被污染，滅菌前應該 。（2）為了篩選出酵母菌，培養基中添加了青霉素，其目的是（3）下圖是滅菌鍋及其局部剖面示意圖，圖中甲、乙、丙指示的依次是 。（填序號）甲安全閥、放氣閥、壓力表放氣閥、安全閥、壓力表安全閥、放氣閥、溫度表放氣閥、安全閥、溫度表（4） 為了將分離到的菌株純化，挑取了菌落在3 塊相同平板上劃線，結果其中一塊平板的各劃線區均未見菌生長，最可能的原因是。 為增加3 -胡蘿卜素提取量，在研磨酵母細胞時，添加石英砂的目的是；研磨時（ 填“需要”或“不需要”） 添加CaCO3，理由是 。答案 （1） 干熱滅菌和濕熱滅菌（ 高壓蒸汽滅菌） 用牛皮紙（

14、 報紙 ） 包扎器皿（2） 抑制細菌（放線菌）生長（3）（4）接種環溫度過高，菌被殺死（5）有助于研磨充分不需要 3 -胡蘿卜素較耐酸解析 （1） 培養皿滅菌常用的方法有濕熱滅菌（ 高壓蒸汽滅菌） 、干熱滅菌等。將培養皿放入滅菌鍋之前通常用牛皮紙或報紙包扎，避免滅菌后的再次污染。（2） 青霉素能抑制細菌和放線菌的生長繁殖，但對酵母菌等真菌不起作用，因此添加青霉素可篩選出酵母菌。（3） 圖中乙連接軟管，為排（ 放 ） 氣閥，甲為安全閥，丙是壓力表。（4） 三塊平板中有兩塊平板長有菌落，說明含有菌株并可在培養基上生長；而其中一塊平板未見菌落，說明接種不成功，可能是接種環灼燒后未冷卻或未充分冷卻，使

15、菌株因溫度過高而被殺死。（5）從3-胡蘿卜素酵母中提取3-胡蘿卜素，參照葉綠體中色素提取的方法，可添加石英砂，因為石英砂有助于研磨充分。在提取葉綠體中色素時，CaCO3 的作用是中和酸性物質，防止葉綠素被分解，而3-胡蘿卜素較耐酸，不易被分解，故在研磨酵母細胞時無需添加CaC6. （2018 全國出，37）回答下列與酵母菌有關的問題：（1）分離培養酵母菌通常使用 （填“牛肉膏蛋白月東” “ MS或“麥芽汁瓊脂”） 培養基，該培養基應采用滅菌法滅菌。若將酵母菌劃線接種在平板上，培養一段時間后可觀察到菌落，菌落的含義是。（2） 酵母菌液體培養時，若通入氧氣，可促進（ 填“菌體快速增殖”“乙醇產生”

16、或“乳酸產生”） ；若進行厭氧培養，可促進（ 填“菌體快速增殖”“乙醇產生”或“乳酸產生”） 。（3） 制作面包時，為使面包松軟通常要在面粉中添加一定量的酵母菌，酵母菌引起面包松軟的原因是答案 （1） 麥芽汁瓊脂高壓蒸汽由一個細胞繁殖而來的肉眼可見的子細胞群體（2） 菌體快速增殖乙醇產生 （3）酵母菌分解葡萄糖會產生CO, CO使面包松軟解析 （1） 麥芽汁瓊脂培養基的碳氮比較高，而且含糖量高，更適合酵母菌培養；該培養基應采用高壓蒸汽滅菌法滅菌；若將酵母菌劃線接種在平板上，培養一段時間后可觀察到由一個細胞繁殖而來的肉眼可見的子細胞群體，這就是菌落。（2） 酵母菌液體培養時，若通入氧氣，進行有氧

17、呼吸產生 HO和CO,釋放能量多，細胞增殖快；若進行無氧培養，酵母菌進行無氧呼吸，產生酒精和 CO,釋放能量少，增殖慢。（3）制作面包時，在面粉中添加一定量 的酵母菌，因酵母菌可以分解面粉中的葡萄糖，產生二氧化碳，二氧化碳是氣體，遇熱膨脹而形成小孔，使得面包松軟多孔。模擬對位練（B卷）1.微生物在發酵食品的加工中起著極其重要的作用，可利用微生物制作果酒和果醋等。下 圖是利用微生物制作果醋的流程示意圖和發酵裝置示意圖，回答有關問題：何a管口2 管口_營口 方 氏斐一（i）發酵時裝置要清洗干凈，并且用 消毒。作為果酒的發酵裝置，管口2應該,以防止排氣時空氣中的微生物污染。（2）與A發酵過程有關的微

18、生物在 發酵液中可以生長繁殖，該環境對雜菌則有 抑制作用。發酵后期，酒精的含量一般不超過12%原因是（3）制葡萄醋的過程中，要打開閥a,原因是（4）在發酵過程中要定時打開閥b檢測發酵液中微生物總數是否超標，為此進行了相關實驗。先將一定量的果醋進行 ，然后用 將菌液接種于固體培養基上，經培養后進行計數，計數日應選擇菌落數在 的平板進行計數。答案（1）70%的酒精 長而彎曲并且管口朝下（2）缺氧、酸性 酒精對細胞有毒害作用，會抑制酵母菌的代謝活動（3）醋酸菌是好氧細菌，用酒精產醋酸需要氧氣參與（4） 一系列的梯度稀釋涂布器 30300解析（1）對于清洗干凈的發酵裝置還需用70%勺酒精進行消毒。為防

19、止排氣時空氣中的微生物污染，果酒發酵裝置的管口2應該長而彎曲并且管口朝下。（2）A是酒精發酵，與此過程有關的微生物酵母菌在缺氧、酸性的發酵液中可以生長繁殖。由于酒精對細胞有毒害作用，且會抑制酵母菌的代謝活動，所以發酵后期，酒精的含量一般不超過12%（3）制葡萄醋的過程中，利用的醋酸菌是一種好氧細菌，用酒精產醋酸需要氧氣參與，因此 要打開閥a,以通入空氣。（4）為檢測發酵液中微生物總數是否超標， 需先將一定量的果醋進行一系列的梯度稀釋，然后用涂布器將菌液接種于固體培養基上，經培養后進行計數，計數時應選擇菌落數在30300的平板進行計數。2. （2018 江蘇揚、通、泰、徐、淮、宿、連七市高三調研

20、）圖1表示研究人員為篩選纖維素酶高產菌株進行的相關實驗流程，其中透明圈是微生物在固體培養基上消耗特定營養物質形成的。請回答下列問題:浸泡落菇培養基放茯得懸浮海|稀稀偉樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養基上m七培拇d測域產生的透明圈直徑（D）及菌落直徑 3I選擇門加比值較大的菌株.并測定所產纖維素醒活性大小I啼選纖堆紫福高產翦株一LEi一藝年逑I相2圖3（1）本實驗中，選擇蘑菇培養基質作為纖維素酶高產菌株的來源，這是因為（2）篩選用的培養基應以 作為唯一碳源，并在配制培養基時加入 作為凝 固劑。篩選時應選擇 D/d比值較大的菌株，因為這一指標值越大說明（3）圖2、圖3是研究纖維素酶的最適溫度和熱穩

21、定性的結果。研究纖維素酶的熱穩定性時，首先將纖維素酶液置于3565 c的不同溫度條件下保溫2h,再取上述不同溫度處理的纖維素酶液和 ,并在 C下測定纖維素酶的催化速率，計算酶活性殘留率。生產中使用該纖維素酶時，最好將溫度控制在40 c左右，依據是答案（1）蘑菇培養基質中富含纖維素， 會聚集較多的纖維素分解菌（2）纖維素 瓊脂 單個菌體產生的纖維素酶的活性越強（3）未經保溫處理的纖維素酶液50該溫度下，纖維素酶的熱穩定性高，作用時間持久，且酶活性相對較高解析（1）從生物與環境適應性角度分析，能大量合成纖維素酶的微生物應該生活在纖維素豐富的環境中，而蘑菇培養基質以植物秸稈等為主，含有豐富的纖維素，

22、 能聚集較多的纖維素分解菌。（2）在以纖維素為唯一碳源的培養基中能夠增殖的微生物一定能夠合成纖維素酶，所以篩選用的培養基應以纖維素作為唯一碳源，在配制培養基時可加入瓊脂作為凝固劑。在培養過程中，透明圈直徑越大，說明微生物產生的纖維素酶越多，而菌落直徑越小，說明微生物數量越少，因此透明圈直徑與菌落直徑比值的大小反映微生物單細胞產生的纖維素酶的 活性大小，該比值越大，則纖維素酶活性越大。（3）酶熱穩定性測量中，酶活性殘留率是指酶分子在一定溫度條件下，一段時間后的催化活性與未保溫處理前酶催化活性的比值。因此,在實驗中需要設置對照（沒有進行溫度處理的酶活性測量）。在進行酶活性測定時，提供的溫 度應選擇

23、最適溫度，根據圖 2實驗可知，纖維素酶催化的最適溫度在50 c左右。（4）在生產中，使用酶催化時，酶有鈍化現象（催化活力逐漸下降），因此，考慮到生產成本和可持續 生產，需要特別注意盡可能保證酶具有較高的熱穩定性。3. 科研人員開展海藻酸鈉固定化乳酸菌的相關研究，得到如下實驗結果。 請回答下列問題：海藻酸鈉濃度對成珠的影響加4 6 S 10 ）2 14 16 18 20 22 24發碑時間小海潮酸鈉濃度對乳酸發醉的影響海藻酸鈉濃度/%成珠狀況0一1.0成珠較易，但強度較低1.5成珠容易，強度適中2.0成珠較難，強度較局2.5成珠困難，強度高（1）本研究中固定化細胞的技術屬于 法，其優點是 。（2

24、）實驗中需要先將溶化的海藻酸鈉溶液冷卻至 后，才能加入乳酸菌。為保證配制 的海藻酸鈉濃度準確，在海藻酸鈉完全溶化后需要 。（3）根據實驗結果，研究人員認為海藻酸鈉濃度為1.5%為宜，這是因為用較低濃度的海藻酸鈉固定時，凝膠珠內部網格較大，有利于 ,乳酸發酵速度快。而與 濃度為1.0%比較，1.5%時形成的凝膠珠 ,有利于凝膠珠的重復利用。（4）利用固定化乳酸菌發酵時，凝膠珠添加量過高會抑制菌株生長，進而使乳酸產量下降。試寫出探究凝膠珠適宜添加量的實驗思路：答案（1）包埋 操作簡單，對細胞損傷小（2）室溫 加無菌水（蒸儲水）定容 （3）凝膠珠內外物質交換強度適中 （4）取等量的發酵液，分別加入不

25、同量的凝膠珠，在適宜條件下發酵，相同時間后，比較各發酵液的酸度（或乳酸含量）(2)解析（1）海藻酸鈉通常被用作包埋法制備固定化細胞時的包埋材料，因此本研究中固定化 細胞的技術屬于包埋法。利用包埋法固定化細胞的優點是：操作簡單，對細胞損傷小。實驗中需要先將溶化的海藻酸鈉溶液冷卻至室溫后才能加入乳酸菌，否則高溫會導致乳酸菌死亡。為保證配制的海藻酸鈉濃度準確，在海藻酸鈉完全溶化后需要加無菌水或蒸儲水定容。（3）用較低濃度的海藻酸鈉固定時，凝膠珠內部網格較大，用于乳酸菌發酵時，有利于凝膠 珠內外物質交換，乳酸發酵速度較快。海藻酸鈉濃度過高或過低都不利于凝膠珠保持完整。由表格信息可知，與海藻酸鈉濃度為1

26、.0%比較，1.5%時形成的凝膠珠強度適中，有利于凝膠珠的重復利用。（4）根據實驗目的可知，該實驗的自變量為凝膠珠添加量，因變量為乳酸 產量，發酵液用量、發酵條件、發酵時間等為無關變量。因此該實驗的大體思路是：取等量 的發酵液，分別加入不同量的凝膠珠，在適宜條件下發酵，相同時間后，比較各發酵液的酸 度（或乳酸含量）。4. （2018 蘇錫常鎮四市高三調研二 ）MICP技術是通過向巖土中注入某種微生物以及膠結液 （尿素和氯化鈣溶液），利用該微生物將尿素水解為俊離子和碳酸根離子，碳酸根離子與鈣離子形成碳酸鈣晶體，從而將巖土原位固化。某研究人員對該種微生物進行了分離并在最適生 長條件（溫度35 C,

27、搖床轉速200 r/min）下測定了其生長曲線，結果如圖。請回答下列問 題：蒯菌濃度（OD."O 3川15 20 2,5 30 ；巧如必50茄60 6G 7075時間 由 注：OD州為樣品中蛋白質核酸的濃度.用此指標來代衣加肉濃度（1）此研究中的微生物能合成 ,從而將尿素分解。被該種微生物分解后的 膠結液pH（填“升高”或“降低”），使N尿素固體培養基中的澳甲酚紫呈紫色， 從而有利于挑取出該種微生物。（2）本研究中的N4尿素固體培養基，從功能上看，屬于 培養基。在其滅菌過程中，需用到高壓蒸汽滅菌鍋。 下面是關于高壓蒸汽滅菌鍋使用過程中的操作，正確的先后順序是©O 裝入待滅菌

28、物品加蓋加熱滅菌鍋打開排氣閥關閉排氣閥切斷電源壓力表的壓力降到零打開蓋子取出滅菌物品（3）研究初期，需將土樣置于選擇培養液中培養24 h ,目的是 。（4）通常在培養末期細菌的數量會顯著減少，但實驗人員實際測得的細菌濃度（OD600）下降較慢最可能白原因是。（5）使用該菌體和膠結液進行巖石工程原位加固時，還需向深層的巖土介質補充 c答案（1）月尿酶（或分解尿素的酶）升高（2）鑒別（3）對該尿素分解菌擴大培養，使尿素分解菌的濃度增加（4）死亡菌體蛋白質核酸沒有分解（5）溶解氧解析（1）酶具有專一性，該微生物可分解尿素，說明該微生物能合成分解尿素的月尿酶。該 種微生物可將膠結液中的尿素水解為俊離子

29、和碳酸根離子，由于碳酸根離子可與鈣離子形成碳酸鈣晶體，因此被這種微生物分解后的膠結液pH會升高。（2）能產生月尿酶的微生物可使NA-尿素固體培養基中的澳甲酚紫呈紫色，說明NA-尿素固體培養基可用于能產生月尿酶的微生物的鑒定，屬于鑒別培養基。利用高壓蒸汽滅菌鍋對培養基滅菌的操作步驟是：裝入待滅菌物品一加蓋一加熱滅菌鍋一打開排氣閥，使水沸騰，排出鍋內冷空氣一冷空氣完全排盡后，關閉排氣閥一到滅菌時間后，切斷電源一讓鍋內溫度自然下降，壓力表的壓力降到零一打開排氣閥一打開蓋子一取出滅菌物品。（3）研究初期，需將土樣置于選擇培養液中培養24 h,目的是對該尿素分解菌進行擴大培養，使尿素分解菌的濃度增加。（

30、4）在培養末期，雖然細菌的數量顯著減少，但由于死亡菌體蛋白質核酸還沒有分解， 因此實驗人員實際測得的細菌濃度（OD6oo）下降較慢。（5）搖床培養通常用于需氧微生物的培養，由此可知，使用該菌體和膠結液進行巖石工程原位加固時，還需向深層的巖土介質補充溶解氧。5. （2018 南京三模）固定化的高溫淀粉酶被大規模用于工業生產。研究者從熱泉中篩選出 高效產生高溫淀粉酶的嗜熱菌，其篩選和固定過程如圖1所示。菌株在含有淀粉的固體培養基上可釋放淀粉酶分解淀粉，在菌落周圍形成透明圈。請分析回答問題：I號培養基II號培養基圖】酹的固定化 0 白)CIAE田團學（1）與大腸桿菌相比，嗜熱菌DNA堿基組成白特點是

31、。（2） I號、n號培養基的配制主要包括如下步驟：a.溶化，b.調pH, c.滅菌，d.稱量，正確的操作步驟順序是（用字母和箭頭表示）。（3）將配制好的培養基放入高壓蒸汽滅菌鍋內，加蓋并將排氣管插入內層滅菌桶內的排氣槽 內。擰緊固定蓋子的螺栓時，注意 ,以免漏氣。（4） I號培養基中以淀粉為唯一碳源，從功能上講該培養基屬于 。待 菌落長出后，應選擇 的菌落接種到H號培養基，第二次以后的劃線，總是從開始，實驗中過程的目的是 。（5）若要保證高溫淀粉酶的活性在固定化處理時不受損失，且在多次重復使用后仍能維持穩定的酶活性，則最好選擇下圖 2中的 固定化工藝（填圖中字母）。圖2答案（1）堿基G和C含量

32、較高（2）d - a-b-c （3）要同時旋緊相對的兩個螺栓，使螺栓松緊一致（4）選擇培養基 透明圈大 上一次劃線的末端（轉移）擴大培養 （5）c解析 （1）由于G-C堿基對間形成的氫鍵數多于 A T堿基對間形成的氫鍵數，因此堿基 G 和C含量越高的DNA吉構越穩定。所以與大腸桿菌相比，嗜熱菌DNAg基組成的特點是堿基G和C含量較高。（2）配制I號、n號培養基的基本步驟是：d稱量一a溶化一b調pHHc滅菌。（3）使用高壓蒸汽滅菌鍋滅菌的過程中，擰緊固定蓋子的螺栓時，注意要同時旋緊相對 的兩個螺栓，使螺栓松緊一致，以免漏氣。（4）以淀粉為唯一碳源的培養基可用于篩選能產生淀粉酶的菌株，從功能上講，

33、該培養基屬于選擇培養基。待菌落長出后，應選擇透明圈大的菌落接種到H號培養基， 因為透明圈越大，說明菌落產生的淀粉酶的量及活性越大。利用平板劃線法接種菌種時，第二次及以后的劃線總是從上一次劃線的末端開始。實驗中過程的目的是進行擴大培養。（5）圖2中a代表的固定工藝易導致酶失活，b代表的固定工藝易出現酶與承載物分離， 而c代表的固定工藝在固定化處理時酶的活性不受損失，且在多次重復使用后仍能維持穩定的酶活性，故最好選擇c工藝進行固定。6. （2018 南京、鹽城三模）圖甲是從土壤中篩選產纖維素酶細菌的過程，圖乙是纖維素酶基因轉錄的 mRNAB分序列，已知終止密碼子為 UAA UAG UGA請回答下列

34、問題:JOg 土填樣相選擇 鑒別 國培養基 培養基 菌種挑取 單菌落 C(l(；ACUC；AC；AAA(iAAtX；U-271 （表示從起始密碼開始算起的就底序列）乙（1）圖甲中細菌培養基和選擇培養基成分上的主要區別是后者 。（2） 土壤樣品需稀釋后振蕩搖勻，用 準確吸取0.1 mL土壤懸液，滴加在培養基中，均勻涂布，將培養皿倒置后放在 中培養一段時間，獲得細菌菌落。（3）在5個細菌培養基平板上，共接種稀釋倍數為105的土壤樣品液0.5 mL ,培養一段時間后，平板上長出的細菌菌落數分別為13、156、462、178和191,則每毫升土壤樣品中的細菌數量為 個。（4）圖中菌種若要長期保存，應該

35、將其放在 條件下。若在保存過程中有一菌株因基 因突變導致纖維素酶失活，突變后的基因轉錄形成的 mRNAE圖乙箭頭處增加了 70個核甘酸 （無終止密碼子），使該酶的結構發生變化（假設圖中271位之前無終止密碼子），則該酶的氨 基酸數量比原來多 個，假設氨基酸平均相對分子質量為130,則突變后的蛋白質（兩條肽鏈）分子量為 。答案（1）以纖維素為唯一碳源（2）移液管（或移液槍）恒溫箱 （3）1.75 X 108 （4）冷凍21 12 916解析（1）圖甲中選擇培養的目的是篩選產纖維素酶細菌，因此，用于篩選的選擇培養基應 該以纖維素為唯一碳源，在這樣的培養基上，能夠產生纖維素酶的細菌可以分解利用纖維素而生長，而其他細菌不能生長。（2）準確吸取0.1 mL土壤懸液應使用移液管或移液槍。接種后應將培養皿倒置后放在恒溫箱中培養一段時間，獲得細菌菌落。（3）根據題意，每個平板0.5上接種的土壤樣品液體積=0.1（mL） o挑選菌落數介于 30300之間的平板用于計數，5則每個平板上的平均菌落數=156+178+191 = 175（個），因此每毫升土壤樣品中的細菌數