1、實驗二十五 凱氏定氮法測定生物樣品中有機氮的含量一實驗目的 1.學習凱氏定氮法的基本原理和操作； 2.用凱氏定氮法測定生物樣品中氮的含量。二實驗原理 凱氏定氮法是使樣品經硫酸和催化劑一同加熱消化，使有機氮分解，其中有機氮素轉化為氮，與硫酸化合為硫酸銨。然后加堿蒸餾，使銨游離出來，用硼酸吸收，再用標準硫酸或鹽酸滴定，根據標準酸的消耗量，即可計算有機氮的含量。三主要儀器及試劑 1.凱氏定氮瓶及蒸餾裝置 2.硫酸銅 3.硫酸鉀 4.硫酸 5.2%硼酸溶液 6.40%氫氧化鈉溶液 %甲基紅 8.0.2%溴甲酚綠 %甲基紅及0.2%溴甲酚綠的1+5混合指示劑 mol/L的標準鹽酸溶液(或1/2硫酸溶液)

2、： 0.1mol/LHCl的配制及標定：吸取9mL濃HCl注入大約1000mL無二氧化碳蒸餾水中，此溶液濃度約為0.1mol/L，用下述方法進行標定：準確稱取于180烘2小時，并于干燥器內冷至室溫的無水碳酸鈉11.5g，置于250mL容量瓶中，定容后搖勻，用移液管吸取25mL放入錐形瓶內，加入無二氧化碳蒸餾水至100mL及4滴甲基橙指示劑，用待標的0.1mol/LHCl滴定至淡桔紅色，記錄用量。同時用無二氧化碳蒸餾水做空白滴定。計算鹽酸標準溶液的濃度。 式中： m 無水Na2CO3的重量，g； V1 滴定無水Na2CO3消耗HCl溶液體積，mL； V0 滴定無二氧化碳蒸餾水消耗HCl溶液體積，

3、mL； 53.00 M(1/2 Na2CO3),g/mol。四實驗操作步驟精確稱取固體試樣1g（含氮總量約30-40mg）于500mL凱氏定氮瓶中，加研細的硫酸銅0.5g，硫酸鉀10g，濃硫酸20mL，輕輕搖勻。于瓶口裝好小漏斗，將凱氏瓶以45°角斜支于石棉網上，小火加熱，使其全部碳化（泡沫消失）后，加強火，使溶液微沸，至液體變為藍綠色透明再加熱30min。冷后加200mL水再放冷。連接蒸餾裝置，冷凝管下端插入接收瓶液面下。接收瓶內盛有2%硼酸溶液50mL及混合指示劑2-3滴。從漏斗放入40%氫氧化鈉溶液70-80mL，搖動，瓶內物料變為深藍色或產生黑色，自漏斗再加水100mL。加熱

4、蒸餾至氨全部蒸餾出來（250mL），使冷凝管下端離開吸收液，再蒸餾1min，停止加熱。用水沖洗冷凝管下端的外部下端。吸收液用標準鹽酸滴定至灰色為終點。同時做空白實驗。注意事項 1.消化時若不易呈透明溶液，可將試液放冷后慢慢加入30過氧化氫23mL，以促進氧化。 2.消化過程以微火集中于凱氏瓶底部，保持緩慢沸騰，避免試樣濺于瓶壁，難于消化使氨損失。 3.實驗中要保證硫酸足量，否則過多的硫酸鉀形成硫酸氫鉀，而削弱了硫酸的消化作用。硫酸鉀的作用是增加溶液的沸點，硫酸銅為催化劑，而且可做蒸氨時加入堿量的指示劑。五實驗結果計算 式中：V1樣品消耗標準酸的體積， mL； V2試劑空白消耗標準酸的體積，mL； C標準鹽酸的物質的量濃度，mol/L； 0.014每毫升1mol/LHCl相當于氮的克數W樣品重量（或體積），g（或mL）。數據列表表示如下： 1.鹽酸濃度的標定：編號瓶+ NaCO3 重m1（g）瓶+ NaCO3重m2（g）NaCO3重m（g）VHCl（mL）V0（mL）CHCl（mol/L）d相對（%）123平 均 值2.樣品測定:編號W(g)V1(mL)V2(mL)CHCl（mol/L）有機氮(%)d相對（%）123平 均 值 六思考題 1.蒸氨時為什么蒸餾瓶內要加濃堿？吸收液為什么要用硼酸溶液？為什么要將冷凝管下端插入接收瓶液面下？能否用其