1、 實驗五實驗五 血小板計數(shù)臨檢指點血小板計數(shù)臨檢指點P48P48目的目的 掌握普通光學(xué)顯微鏡直接血小板計數(shù)掌握普通光學(xué)顯微鏡直接血小板計數(shù)法。法。 1.概述概述 血小板是由骨髓中成熟巨核細(xì)胞的胞質(zhì)分割而生成。血小板是由骨髓中成熟巨核細(xì)胞的胞質(zhì)分割而生成。其生成受血小板生成素其生成受血小板生成素TPO的調(diào)理。的調(diào)理。 正常靜息形狀下，血小板為雙面微凸的圓盤形，直正常靜息形狀下，血小板為雙面微凸的圓盤形，直徑徑24m、平均體積、平均體積7.2fl的非細(xì)胞構(gòu)呵斥分。的非細(xì)胞構(gòu)呵斥分。 v染色后鏡下可見血小板的胞質(zhì)呈淡藍(lán)色，內(nèi)含染色后鏡下可見血小板的胞質(zhì)呈淡藍(lán)色，內(nèi)含v 較多的紫紅色嗜天青顆粒。較多的

2、紫紅色嗜天青顆粒。v血涂片上，為紅細(xì)胞數(shù)的血涂片上，為紅細(xì)胞數(shù)的1/301/20，通常每個，通常每個v 油鏡視野可見油鏡視野可見735個，分散或個，分散或35成群分布。成群分布。2.光學(xué)顯微鏡直接計數(shù)法光學(xué)顯微鏡直接計數(shù)法1原理原理 血液血液(20l)經(jīng)稀釋液經(jīng)稀釋液(0.38ml)按一定比例稀釋按一定比例稀釋和破壞紅細(xì)胞后，充入血細(xì)胞計數(shù)池內(nèi)，在顯微和破壞紅細(xì)胞后，充入血細(xì)胞計數(shù)池內(nèi)，在顯微鏡下計數(shù)一定范圍內(nèi)的血小板數(shù)，經(jīng)換算求出每鏡下計數(shù)一定范圍內(nèi)的血小板數(shù)，經(jīng)換算求出每升血液中的血小板數(shù)量。升血液中的血小板數(shù)量。 由于血小板易黏附、聚集以致破壞，優(yōu)質(zhì)的血小板稀釋液應(yīng)具備的條件是： 1有效

3、地阻止凝血。2很快地固定血小板，防止血小板聚集和變形。3溶血稀釋液要求紅細(xì)胞破壞完全。4組成簡單、容易保管、不長細(xì)菌。 根據(jù)所采用的稀釋液不同而又分為根據(jù)所采用的稀釋液不同而又分為破壞紅細(xì)胞稀釋法溶血法：破壞紅細(xì)胞稀釋法溶血法： 草酸銨溶血法：草酸銨溶血法： 對紅細(xì)胞破壞力強，血小板形狀對紅細(xì)胞破壞力強，血小板形狀清楚。清楚。 為首選常規(guī)計數(shù)方法。為首選常規(guī)計數(shù)方法。 復(fù)方尿素溶血法：尿素可溶解紅細(xì)胞、甲醛可固復(fù)方尿素溶血法：尿素可溶解紅細(xì)胞、甲醛可固定血小定血小 板和防腐，稀釋后血小板脹大板和防腐，稀釋后血小板脹大易識別，易識別， 尿素容易分解，試劑容易失效。尿素容易分解，試劑容易失效。尿素

4、尿素 不能完全破壞紅細(xì)胞。不能完全破壞紅細(xì)胞。 高鐵氰化鉀溶血法：試劑穩(wěn)定易于長期保管但不高鐵氰化鉀溶血法：試劑穩(wěn)定易于長期保管但不能完全能完全 破壞紅細(xì)胞。破壞紅細(xì)胞。 不破壞紅細(xì)胞稀釋法：復(fù)方碘稀釋液。紅細(xì)胞未破不破壞紅細(xì)胞稀釋法：復(fù)方碘稀釋液。紅細(xì)胞未破壞及試劑易細(xì)菌生長，干擾計數(shù)，已被淘汰壞及試劑易細(xì)菌生長，干擾計數(shù)，已被淘汰 。實驗五實驗五 血小板計數(shù)血小板計數(shù)2操作步驟操作步驟 1汲取稀釋液：準(zhǔn)確汲取汲取稀釋液：準(zhǔn)確汲取10g/L草酸銨溶血劑草酸銨溶血劑0.38ml于小于小 試管內(nèi)。試管內(nèi)。 2采血：準(zhǔn)確采血采血：準(zhǔn)確采血20l參與上述試管，立刻充分參與上述試管，立刻充分混勻。混勻

5、。 3靜置：待完全溶血后再混勻靜置：待完全溶血后再混勻1min。 4充池：混勻血小板懸液，并取充池：混勻血小板懸液，并取1滴充入血細(xì)胞計滴充入血細(xì)胞計數(shù)池，數(shù)池， 靜置靜置10min。 5計數(shù)：用高倍鏡計數(shù)中央大方格內(nèi)的中央及四計數(shù)：用高倍鏡計數(shù)中央大方格內(nèi)的中央及四角共角共5個個 中方格內(nèi)的中方格內(nèi)的 血小板數(shù)量。血小板數(shù)量。實驗五實驗五 血小板計數(shù)血小板計數(shù)3計算計算 血小板數(shù)血小板數(shù)/L=N51020106=N109/L 參考值：參考值： 100300109/L實驗五實驗五 血小板計數(shù)血小板計數(shù)4本卷須知本卷須知 1稀釋液必需符合優(yōu)質(zhì)的血小板稀釋液，稀釋液必需符合優(yōu)質(zhì)的血小板稀釋液，因此

6、稀釋因此稀釋 液必需新穎、干凈，無雜物和細(xì)菌污染；液必需新穎、干凈，無雜物和細(xì)菌污染；定期檢定期檢 查稀釋液的質(zhì)量，實驗前應(yīng)先做稀釋液查稀釋液的質(zhì)量，實驗前應(yīng)先做稀釋液空白計空白計 數(shù)，符合儀器運用闡明方可運用。數(shù)，符合儀器運用闡明方可運用。2器材及操作必需規(guī)范化和規(guī)范化器材及操作必需規(guī)范化和規(guī)范化 所用器材必需校準(zhǔn)、干凈、枯燥。所用器材必需校準(zhǔn)、干凈、枯燥。采血、充液、計數(shù)均應(yīng)規(guī)范，防止血小板激活或破壞。采血、充液、計數(shù)均應(yīng)規(guī)范，防止血小板激活或破壞。血小板懸液充入計數(shù)池后必需靜置血小板懸液充入計數(shù)池后必需靜置15min再計數(shù)，并在采再計數(shù)，并在采 血后血后1h內(nèi)完成計數(shù)。時間過短或過長那么

7、可導(dǎo)致血小板內(nèi)完成計數(shù)。時間過短或過長那么可導(dǎo)致血小板未完未完 全下沉或失去光澤，使計數(shù)結(jié)果偏低。全下沉或失去光澤，使計數(shù)結(jié)果偏低。充液前必需悄然搖動血小板懸液充液前必需悄然搖動血小板懸液2min2min或或200200次以上，但用力次以上，但用力不宜過大，以免呵斥血小板破壞或產(chǎn)生氣泡，引起計數(shù)誤差。不宜過大，以免呵斥血小板破壞或產(chǎn)生氣泡，引起計數(shù)誤差。鏡下察看時的光線要適中，并留意與細(xì)胞碎片、灰塵、微生鏡下察看時的光線要適中，并留意與細(xì)胞碎片、灰塵、微生物等鑒別。物等鑒別。 3及時核準(zhǔn)血小板計數(shù)結(jié)果 由閱歷豐富的檢驗人員進(jìn)展。 常用的方法有： 用同1份血標(biāo)本制備良好的血涂片，察看血小板數(shù)量、

8、形 態(tài)和分布情況，進(jìn)展核對。 用血小板計數(shù)的參考方法核對計數(shù)結(jié)果。 每份標(biāo)本最好做2次計數(shù)，假設(shè)2次計數(shù)誤差小于10%，取 其均值報告；假設(shè)計數(shù)誤差大于10%，應(yīng)做第3次計數(shù)，取 2次相近結(jié)果的均值報告。4排除非技術(shù)要素的影響排除非技術(shù)要素的影響 某些病理情況可干擾計數(shù)，出現(xiàn)血小板假性減少或某些病理情況可干擾計數(shù)，出現(xiàn)血小板假性減少或增多。增多。血小板聚集或凝集、異常蛋白血癥、宏大血小板、衛(wèi)血小板聚集或凝集、異常蛋白血癥、宏大血小板、衛(wèi) 星景象、高脂血癥導(dǎo)致血小板假性減少。星景象、高脂血癥導(dǎo)致血小板假性減少。HbH包涵體病人的紅細(xì)胞碎片、慢性淋巴細(xì)胞性白血包涵體病人的紅細(xì)胞碎片、慢性淋巴細(xì)胞性

9、白血 病病人的淋巴細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)碎片、小紅細(xì)胞等可被病病人的淋巴細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)碎片、小紅細(xì)胞等可被 誤以為血小板，導(dǎo)致血小板假性增多。誤以為血小板，導(dǎo)致血小板假性增多。5標(biāo)本采集標(biāo)本采集 最好清晨采血，采集過程中應(yīng)防止反復(fù)握拳、拍打采最好清晨采血，采集過程中應(yīng)防止反復(fù)握拳、拍打采血部位、扎止血帶的時間過長血部位、扎止血帶的時間過長1min，以免血小板激，以免血小板激活而影響計數(shù)結(jié)果。活而影響計數(shù)結(jié)果。 采血后立刻進(jìn)展血小板檢測。采血后立刻進(jìn)展血小板檢測。5方法學(xué)評價方法學(xué)評價 1普通光學(xué)顯微鏡直接計數(shù)法：普通光學(xué)顯微鏡直接計數(shù)法： 以草酸銨溶稀釋液法為常規(guī)方法和參考方法。以草酸銨溶稀釋液法為常規(guī)方法和參考方法。 2相差顯微鏡直接計數(shù)法：相差顯微鏡直接計數(shù)法： 此法計數(shù)的準(zhǔn)確性高，血小板易于識別，并可于照相此法計數(shù)的準(zhǔn)確性高，血小板易于識別，并可于照相 后核對計數(shù)結(jié)果，是計數(shù)血小板的參考方法。但由于后核對計數(shù)結(jié)果，是計數(shù)血小板的參考方法。但由于 所用儀器昂貴，臨床上較少選用。所用儀器昂貴，臨床上較少選用。 3血細(xì)胞分析儀計數(shù)法血細(xì)胞分析儀計數(shù)法 ： 簡便、快速、反復(fù)性好，可同時測定血小板、簡便、快速、反復(fù)性好，可同時測定血小板、MPV及及PDW等多個目的的特點，已廣泛用于臨床。但由于電阻抗等多個目的的特點，已廣泛用于臨床。但由于電阻抗法不