1、    氨溴索對支氣管肺泡灌洗液中頭孢克肟濃度的影響        摘要目的:對粘痰溶解劑氨溴索(Amb)與第三代口服頭孢菌素頭孢克肟(Cef)合用后Cef肺滲透性進行研究，為臨床二者合用提供理論依據。方法:16例呼吸系患者隨機分為兩組；Cef組給予Cef 0.1 g,Bid，連服3 d；Cef+Amb組除同Cef組給予Cef外，加服Amb 60 mg，Tid,連服3 d。于最后一次服藥后3 h行支氣管肺泡灌洗術，收集支氣管肺泡灌流液(BAL)，同時收集病人血漿。用固相萃取技

2、術富集、純化血漿及BAL中Cef之后，采用HPLC測定Cef濃度。結果：Cef組和Cef+Amb組血漿濃度分別為0.9±0.7,0.9±0.4 mg.L-1，BAL中Cef濃度分別為0.022±0.011，0.037±0.014 mg.L-1。結論:Amb與Cef同服可增加肺部Cef濃度。關鍵詞頭孢克肟，氨溴索，支氣管肺泡液，HPLCInfluence of ambroxol on cefixime levels in bronchoalveolar lavage fluidLiu Songqing,Dai Qing, Zhang Weidong,et

3、al (Department of pharmacy, Southwest Hospital, Third Military Medical College,Chongqing 630038)OBJECTIVES:To study the influence of ambroxol on cefixime levels in bronchoalveolar lavage fluid samples from the patients treated with cefixime or with cefixime and the mucolytic agent ambroxol. METHODS:

4、The controlled study was conducted on 16 patients. They were allocated to two groups in randomized order. One group cefixime 100 mg bid (n=8) and the other with cefixime 100 mg bid+ambroxol 60 mg tid(n=8). The drugs were given during the 3 days preceding the diagnostic examination; the last dose was

5、 given approximately 3h before bronchoscopy. The bronchoalveolar lavage fluid were collected in sterile tubes and the plasma sample was obtained simuiltaneously. Cefixime in plasma and BAL were enriched,extracted and purified using Sep-pak C18 solid phase extraction columns, followed by assay using

6、HPLC. RESULTS:The cefixime in plasma were 0.9±0.7 mg.L-1 in the group receiving ambroxol and 0.9±0.4 mg*L-1 in the controlled group. There were no significant differences in the plasma levels. And the cefixime in BAL were 0.037±0.014 mg*L-1 in the group with ambroxol and 0.022±0.

7、011 mg.L-1 in other. The difference of cefixime in the BAL was statistically significant (P0.05). Comparisons of protein concentrations in BAL samples did not show significant differences in two groups. CONCLUSION:These results showed that ambroxol was able to increase cefixime concentration in the

8、lung after co-administration cefixime with ambroxol. Key wordscefixime,ambroxol,bronchoalveolar lavage fluid, HPLC氨溴索(Ambroxol,Amb)是新一代的粘痰溶解劑，臨床應用于支氣管及肺部疾患的治療。有報道表明Amb能增加阿莫西林對肺組織的穿透性，提高該抗生素在感染部位的濃度1。頭孢克肟(Cefixime,Cef)是一種第三代口服頭孢菌素，它對-內酰胺酶穩定，具有抗菌譜廣，殺菌作用強等特點，臨床應用于呼吸道等感染疾患的治療2。在呼吸系患者口服頭孢克肟后，抗菌治療的成功不僅取決于

9、微生物對其的敏感性，而且與感染部位的藥物濃度密切相關。本實驗采用支氣管灌洗技術，并通過高效液相色譜法測定支氣管肺泡灌洗液(BAL)中Cef濃度，研究Amb與Cef合用后對Cef肺滲透性的影響，提供二者合用的理論依據。1實驗材料1.1藥品與試劑鹽酸氨溴索片(美國加利福尼亞大藥廠，批號68024)；頭孢克肟膠囊(廣州白云山制藥總廠，批號940106)；Cef對照品(日本藤澤藥品公司提供，含無水鹽基89.36%)；內標物：氯霉素(西南合成制藥廠，批號9509094)；甲醇為色譜純，其它試劑為分析純。1.2儀器與色譜條件Waters 810液相色譜儀，包括510泵，484可變波長紫外檢測器，Basel

10、ine 810計算機控制及處理系統；Sep-pak C18萃取小柱(Waters)；-Bondapak C18柱(3.9 mm×300 mm，10 m)；流動相為甲醇-水-磷酸鹽緩沖液(0.02 mol.L-1，pH 3)(222850)；流速為1.1 ml.min-1；檢測波長為286 nm；靈敏度0.005AUFS。1.3試驗對象及方案16例需作纖維支氣管鏡檢查的住院患者，隨機分為兩組，對照組男性6例，女性2例，除1例為肺結核外，其余均為肺癌病人，平均年齡56.4±9.3歲；實驗組男性6例，女性2例，其中肺癌7例，支氣管擴張1例，平均年齡55.0±6.1歲。兩

11、組病人均口服Cef膠囊，每次0.1 g，Bid，連服3 d；實驗組加服Amb片，每次60 mg，Tid，連服3 d。最后一次給藥于檢查前3 h進行。病人局部麻醉后行纖維支氣管鏡檢查，用滅菌生理鹽水60 ml，分3次注入患者的肺葉進行灌洗，灌洗需避開肺部病變區域，選擇右肺中葉或左肺舌葉。灌洗完畢，用負壓將其吸出，收集灌洗液1520 ml離心(3 000 r.min-1，10 min)，上清液備檢，同時抽取受檢者靜脈血20 ml，分取血漿，備用。1.4樣品處理1.4.1萃取小柱的處理取Sep-pak C18小柱，用甲醇2 ml活化，然后用pH 4醋酸緩沖液(2%乙酸，用4 mol.L-1氫氧化鈉調

12、整pH為4.0)2 ml沖洗。1.4.2血漿樣品的制備取血漿1 ml，加入含內標物氯霉素1.6 mg.L-1的2%醋酸液1 ml，充分混勻，以1 ml.min-1的流速通過處理好的小柱，用pH 4醋酸鹽緩沖液洗去水溶性雜質，再用甲醇2 ml洗脫藥物(流速同前)。甲醇液在55水浴中，用氮氣流吹干，流動相1 ml重組，進樣100 l。1.4.3BAL樣品的制備取BAL 4 ml，加入含內標物氯霉素1.6 mg.L-1的2%醋酸液1 ml，充分混勻，余照“血漿樣品制備”項下操作，揮干溶劑后用流動相0.5 ml重組，進樣100 l。2方法結果2.1方法學研究2.1.1色譜行為在本實驗色譜條件下，空白血

13、漿和空白BAL經處理后的色譜峰對Cef及內標物色譜峰無干擾，Cef與內標物分離良好，見1，2。1血漿中Cef色譜a. 空白血漿b. 含藥血漿1 內標(5.32 min)2 Cef(7.48 min)2BAL中Cef色譜a. 空白BALb. 含藥BAL1 內標(5.32 min)2 Cef(7.48 min)2.1.2血漿中Cef的標準曲線準確吸取空白血漿1.0 ml于試管中，分別加入Cef濃度為0.1，0.25，0.5，1.0，2.0，4.0 mg.L-1，內標濃度為氯霉素1.6 mg.L-1的2%醋酸液1 ml，充分混勻，余照“血漿樣品制備”項下操作，測定藥物與內標物峰面積比(R)，用最小二

14、乘法得回歸方程：C=1.702R-0.031 68 ,r=0.999 9。回歸結果表明血漿中Cef在0.14.0 mg.L-1范圍內呈良好線性關系。2.1.3BAL中Cef的標準曲線準確吸取空白BAL 4.0 ml于試管中，分別加入Cef濃度為0.05，0.1，0.2，0.4，0.8，1.6 mg.L-1，內標濃度為氯霉素1.6 mg.L-1的2%醋酸液1 ml，充分混勻，余照“BAL樣品制備”項下操作，測定藥物與內標物峰面積比(R)，用最小二乘法得回歸方程：C=0.946 9R+0.008 749 ,r=0.999 8。回歸結果表明BAL液中Cef在0.012 50.4 mg.L-1范圍內呈

15、良好線性關系。2.1.4回收率試驗分別取空白血漿和空白BAL，加入一定量的Cef，配成0.1，0.5，1.0，2.0 mg.L-1(血漿)和0.025， 0.125， 0.25， 0.4 mg.L-1(BAL)的濃度系列，按樣品處理項下操作測定藥物與內標物之峰面積比，按相應標準曲線求算其濃度，得到血漿中Cef的回收率為99.2%±2.4%，BAL中Cef的回收率為97.9%±2.8%。2.1.5精密度試驗取不同濃度的Cef血樣和BAL樣品，按前法處理，分別于日內和日間進行測定。結果血漿樣品日內RSD為2.3%(n=6)，日間RSD為3.8%(n=3)；BAL樣品日內RSD為

16、2.8%(n=6)，日間RSD為4.6%(n=3)。RSD均小于5%，表明方法的精密度及重現性均較好。2.2血漿、BAL中Cef濃度兩組患者血清標本和BAL標本經Sep-pak C18小柱處理后測定其中Cef濃度；為了控制Cef在BAL中的稀釋程度，測定了其中蛋白的含量，并比較了藥物濃度與蛋白含量的比值，結果見附表。表中數據經t檢驗，兩組病人血清中Cef濃度差異無顯著性(P0.05)，而BAL中Cef濃度差異有顯著性(P0.05)；兩組病人BAL中蛋白濃度差異無顯著性(P0.05)，而BAL中Cef濃度與蛋白濃度比值差異有顯著性(P0.05)。該結果說明了兩組病人BAL中藥物稀釋程度無差異，表

17、明Amb與Cef同服可增加肺部Cef濃度。附表血清中Cef濃度和BAL中Cef濃度、蛋白濃度及其比值(±s,n=8)組別血漿中Cef濃度mg.L-1BAL中Cef濃度mg.L-1BAL中蛋白濃度mg.L-1BAL中Cef濃度與蛋白濃度比Cef0.9±0.70.022±0.0110.54±0.220.06±0.06Cef+Amb0.9±0.40.037±0.014*0.47±0.320.5±0.05* P0.05 3討論3.1固相萃取是近年來發展起來的一種樣品處理新技術，具有高效、簡單、可靠等優點3。本實驗

18、因BAL中Cef濃度極低，且Cef溶解特性決定了其富集過程難以用一般的溶劑萃取來完成，采用固相萃取技術進行血液及BAL中Cef測定的樣品處理，使Cef達到富集、純化的目的；效果較為理想。3.2考慮到臨床用藥較復雜，因而選擇了可能同時應用的幾種藥物，在同樣條件下進樣，除頭孢氨芐保留時間在4.9 min，頭孢拉定保留時間7.7 min，分別干擾內標和Cef外，其余如頭孢他定、頭孢唑啉鈉、頭孢哌酮、氨茶堿、氨溴索等均不干擾Cef的測定。因此，實驗過程中，患者不可同時使用頭孢氨芐或頭孢拉定，以免影響測定結果。3.3本實驗采用BAL中蛋白含量作為藥物濃度稀釋因子，來控制不同病例之間因稀釋程度不同而造成藥物濃度的差異。3.4本實驗中測定的BAL中Cef濃度是經稀釋后的支氣管、肺泡液中藥物濃度，肺組織