1、3射線內照射對人增生前列腺細胞凋亡的影響作者：谷欣權 曹霞 孔祥波 馬慶杰【摘要】目的探討3射線內照射對人增生前列腺細胞凋亡的影響。方法20 例前列腺增生(BPH)患者隨機分為 4 組：對照組未行內照射，3 組照射組于前 列腺切除術前 1, 4, 7 d 行 90Sr/90Y3射線內照射，采用 TUNEL 染色、流式細 胞術和瓊脂糖凝膠電泳檢測前列腺細胞凋亡變化。結果與對照組比較，3射線內照射后前列腺細胞凋亡增多，并隨時間延長而增加(Pv0.01 )，對照組基因組 DNA 保持完整，3射線輻射 7 d 后基因組 DNA 呈現梯狀帶凋亡改變。結論3射線內照射能夠有效誘發人增生的前列腺細胞凋亡，進

2、而引起前列腺組織萎縮。【關鍵詞】前列腺增生；電離輻射；細胞凋亡【Abstract 】ObjectiveTo investigate the effect of3irradiati on on cell apoptosis in huma n hyperplastic prostatic tissues.Methods 20 patie nts with benign prostatic hyperplasia (BPH) were divided into 4groups accord ing to the differe nt time treated with 90Sr/90Y3irrad

3、iation to prostatichyperplasia applicator before prostatectomy or TURP. The cell apoptosis of huma nhyperplastic prostatic tissues was detected by TUNEL and flow cytometry and agarosegel electrophoresis.ResultsCompared with con trol group,the perce ntage of cell apoptosis arose after treated with 90

4、Sr/90Y3irradiati on and grew more with time going (Pv0.01). DNA keptcomplete in con trol group while typical DNA ladder band appeared in DNA fragme ntelectrophoresis and the positive cells that prese nted browed were observed in3irradiation 7 group. Conclusions3rays irradiati on can efficie ntly in

5、duce cell apoptosis from huma n prostatichyperplasia tissue and cause the atrophy of prostatic tissue.【Key words 】 Benign prostatic hyperplasia ; Radiation ；Apoptosis細胞凋亡在前列腺增生(BPH 的發生、發展中具有關鍵性作用 1, 2。電離輻射作為一種基因毒素，除了可使前列腺組織中與細胞凋亡相 關的基因和細胞因子發生改變外，還能直接或間接引起DNA 損傷而誘發凋亡3，4。本實驗采用 TUNEL 染色、流式細胞術(FCM 和瓊脂糖凝

6、膠電泳檢測3射線內照射對增生前列腺細胞凋亡的影響，為采用電離輻射治療 BPH 提供實驗依據。1 材料與方法1.1實驗分組 BPH 患者 20 例，年齡 5872 歲，病程 213 年， 患者隨機分為 4 組，每組 5 例：3 個照射組于前列腺切除術前 1, 4, 7 d 行 90Sr/90YB射線內照射，照射劑量為 3050 Gy,對照組未行內照射。各組均 行經尿道前列腺切除術或經膀胱前列腺摘除術獲得前列腺標本。1.2TUNEL 染色檢測細胞凋亡4%多聚甲醛固定前列腺組織 46h,石蠟包埋。切片加蛋白酶 K 37C消化 5 min，TBS 洗滌。加含有 TdT 和 DIGdUTP 的標記液 2

7、0 卩 1/片，37C標記 2 h，TBS 洗滌 2 minX3次。加封閉液 50 卩 1/片室溫 30 min，加封閉液 1 : 100 稀釋生物素化抗地高辛抗體 50 卩 1/片，37T反應 30 min，TBS 洗滌。力卩 SABC 37C反應 60 min，TBS 洗滌。 DAB 顯色15 min，蘇木素復染，常規脫水、透明、封片。顯微鏡下凋亡陽性細 胞核呈深淺不一的棕黃色，正常細胞核呈藍色，在每張切片上隨機選取10 個高倍鏡視野，計陽性細胞數和細胞總數， 計算 陽性反應細胞數占細胞總數的平 均百分比。1.3FCM 檢測凋亡細胞 DNA 含量新鮮組織研磨成單細胞，70%乙醇固定，4C過

8、夜。600 r/min 離心 5 min，棄上清，加 0.01 mol/L PBS 5ml，混勻 1 500 r/min 離心，棄上清，反復 3 次。用 PBS 調整細胞濃度106/ml，過 350 目濾網，制成單細胞懸液，加入濃度 200 卩 g/ml 的 RNase A 37E水浴 30 min，加入低滲熒光染料溶液混勻，4C避光染色 30 min。用流式 細胞儀攝取 PI熒光，測凋亡細胞核百分率。1.4DNA 瓊脂糖凝膠電泳組織研碎后，離心去上清，加入 10 倍體積的 DNAtt提液混勻，37E水浴 1 h，加入蛋白酶 K，50C水浴 3 h，12 000 r/min 離心 5 min，

9、用飽和苯酚抽提上清 1 次，再用苯酚/氯仿/異丙醇(25 : 24 : 1) 1ml 充分混勻，8 500 r/min 離心 5 min，棄酚相，保留上清， 上清中加入 3 mol/L 醋酸鈉和冷乙醇，-20C沉淀過夜。-10C12 000 r/min 離心 10 min，將沉淀溶于 20 卩 l TE 緩沖液，加入 1 卩 l RNA 酶，37C保溫 1 h。加 4 卩 l 樣本緩沖液到含有 0.4 卩 g/ml 溴化乙錠的 1%2%勺瓊脂糖凝膠 的樣品孔中，室溫、恒流 75 mA 于1XTAE 緩沖液中電泳 12 h，紫外燈下觀 察實驗結果。1.5統計 學處理 數據 應用 SPSS11.5

10、 統計 軟件 進行統計學處 理，組間比較采用 t 檢驗。2 結果2.1TUNEL 法染色檢測前列腺細胞凋亡 對照組僅見少數散在的凋 亡細胞，經 90Sr/90YB射線輻射后細胞凋亡增多，并隨時間而逐漸增加。與間 質細胞比較，腺上皮細胞凋亡更加明顯，見圖 1。2.2FCM 檢測凋亡細胞 DNAt量經流式細胞儀分析凋亡細胞的 DNA含量，可見對照組凋亡細胞百分率為(1.74 0.35) %B射線輻射可使前列腺組織細胞周期時相發生改變，在二倍體峰前出現亞二倍體峰即凋亡峰。隨時 間延長凋亡細胞逐漸增多，輻射1、4、7 d 凋亡細胞百分率分別為(3.83 0.74)%，(5.66 1.72)%，(13.15 3.03)%，與對照組比較差異顯著( Pv0.01 )。2.3DNA 瓊脂糖凝膠電泳檢測細胞凋亡對照組基因組 DNA 呆持完整，