1、eppendorfBioSpectrometer basic / kinetic / fluorescence系列分光光度計及 BioPhotometer D30核酸蛋白測定儀 快速使用指南快速使用指南I第2頁檢測方法的主菜單（Method Selection）分為Main Groups. Sub Groups和Methods三欄，使用 Q Q Q Q 方向犍進 行瀏覽選擇.按3確認。Main GroupsFavorites使用vNew Folder創建新的收菽夾.可將常用的方法曼制到新的收菽夾中， 以便在需要時快連調取Absorbance快速簡單的吸光度測定Routine常用分子生物學栓測方

2、法.預設核験、農白、細苗密度等常規栓測方法Basic通過因子.單個標準品和標準曲線對吸光度測定進行求值的方法. 包含動力學求值的方法（僅限kinetic秋）Advanced （僅限 BioSpectrometer 系列）雙波長測定和動力學栓測（儀限kinetic）Routine （熒光學.（7限 fluorescence 款）基干Invitrogen熒光栓測試刑直的核験和農白定量Basic （熒光學.僅限 fluorescence 款）快連簡單的熒光強零測定，通過標準品和標準曲線對熒光強度值進行濃度換第Main GroupsSub GroupsMethodsFavoritesPersonal

3、folder 1 個性化文件夾dsDNA （雙粧 DNA）dsDNA 1mm （雙笹 DNA. 1 mm 光程） RNAProtein A280 （A280 寅白）Albumin A280 （A280 白蛋白）OD600<New Folder>新建方法AbsorbanceSingle X 單波長栓測Single X （單波長栓測）Single X A260 （A260 單波長栓測）Single入A280 （A280單波長栓測） vNew Method（新建方法）Single X -cont單波長連續栓測 僅限kinetic款Single X -cont （單波長連續栓測） vNew

4、 Method（新建方法）Multi 入 多波長栓測Multi X （多波長栓測） vNew Method（新建方法）Scan 掃描Scan （掃描）vNew Method（新建方法）快速便用指南I第3頁Main GroupsSub GroupsMethodsRoutineNucleic acids 核職栓測dsDNA （雙資 DNA）dsDNAImm （雙犍 DNA. 1 mm 光程） ssDNA （單璉 DNA）RNAOligo （專核昔氈）<New Method> （新建方法）Proteins direct UV 紫外直接栓測農白Protein A280 （A280蛋白直接栓

5、測）Protein A280 1mm （A280 蛋白直接檢測 1 mm光程）Albumin A280 （A280白斎白直接檢測）<New Methods （新建方法）Proteins （reagent） 蛋白檢測（比色法）BradfordBradford micro （Bradford 微量） BCABCA micro （BCA 徹量）LowryLowry micro （Lowry 徴量） vNew Method（新建方法）Dye labels 熒光染料標記檢測ssDNA-Cy 3 （單鉞 DNA-Cy 3 標記） ssDNA-Cy 5 （單槿 DNA-Cy 5 標記） <New

6、 （NA-label）> （新核霞染料標記法） <New （Prot-label）> （新農白塊料棕記法）Bacterial density 細苗密度OD600vNew Method（新建方法）BasicFactor, standard 因子.單個標準品Factor （因干法）Standard （標準品法） vNew Method（新建方法）Calibration curve 標準曲線Calibration curve （標準曲線法） vNew Method（新逮方法）Simple kinetics簡單動力學 （僅限kinetic款）Simple kinetic?:（簡單動力

7、半） vNew Method（綁逐方也）AdvancedDual wavelength 雙波長栓測Division （除法） Substraction （i威法） vNew Method（新建方法）Advanced kinetics高纟及動力學 （僅限 kinetic H）Advanced kinetics （高級動力學） vNew Method（新建方法）FluorimetryfluorescenceRoutineNucleic acids 核醱栓測PicoGreen （雙讎 DNA）PicoGreen short （雙璉 DNA 的兩點法） Qubit dsDNA BR （雙推DNA的寬范

8、曲法） Qubit dsDNA HS （雙鍍DNA的高靈敏度法） OliGreen （單桂DNA或專核W）OliGreen short（單鏈DNA或專核昔取的兩點法） Qubit ssDNA （單鏈DNA或專核昔號） RiboGreen （RNA）RiboGreen short （RNA 的兩點法） vNew Method（新建方法）Proteins 蛋白栓測Nano OrangevNew Method（新建方法）BasicRaw fluoresce nee 原始熒光強度栓測Raw fluorescence （原始熒光強度檜測） <New Method> （新建方法）Stan da

9、rd 單個標準品Standard （標準品法） <New Method> （新建方法）Calibration curve 棕準曲線Calibration curve （棕準曲線法） vNew Method（新*方法）快速使用指南I第4頁eppendorf從檢測方法的主界面（上部藍色邊框）按右下方function-軟 犍或在控制鎮盤上按可以切換到功能菜單（上部綠色邊 框）。與選擇檢測方法相似，功能界面也分為Main Groups, Sub Groups和Functions三程。便用方向鍵瀏覽選擇目標，選 定User后，分別從右邊的各程中選擇所需功能，按確認。User5 Sub Gro

10、upsSub GroupsResults memory 結果存儲器顯示保存的栓測結果根據檢測方法和測定時間排列結果.可以導出.也可以打印General method parameters 普通方法參數可以編輯各類普詡卷數.如茶白氐 核醉.染料和濃度單位相關的參數. 適用于直接UV法蛋白定負和染料標記栓測Absorbance spectra library 吸光度光譜庫幾種直要物質吸光度的光譜田.庫中光譜田可以與樣品結果的光図國進廳比較， 并可導出或打印Device settings 儀器設置設定儀器信息.如語言.日期與時間、自栓間隔. 井記錄最近一次完成自栓的時間和結果Dgvicg calib

11、ration設備校準檜測分光光度卄的光度測定功能，幕棕準漣光片系統 檢測分光光矍計的熒光功能（僅限fluorescence歎） 檢測分光光度計的凰控模塊（僅限kinetic款） 可進行自栓測試Info 值息顯示機器版本和序列號M<rx>d settlorM«n Gro.ip«Sub1° FavotiW®A»5O*barceC> Memuv<2 ssONAp"7 RoutineC P心bx <re»9ont)Q RNAC BacicO X0 OHooC AancodCriemify0Mod、快速便

12、用指南I第5頁1.1.1核酸檢測:在Main Groups下選擇"Routine",然后在Sub Groups下 選擇“Nucleic acids",最后在Methods下選擇"dsDNA”等。常用的 dsDNA檢測如右圖所示。寮白的直接UV法定量：在Main Groups下選擇-Routine",然后在 Sub Groups 下選擇"Proteins direct UV'*,最后在 Methods 下選擇 -Protein A280"等“芙光染料的標記檢測：在Main Groups下選擇"Routine&

13、quot;,然后在Sub Groups 下選擇"Dye labels",最后在 Methods 下選擇"ssDNA-Cy3"等" 菌液濃度栓測：在Main Groups下選擇"Routine",然后在Sub Groups 下選擇"Bacterial density",最后在 Methods 下選擇"OD600"肆。自定文因子檢測：在Main Groups下選擇"Basic"或"Advanced",然 后在 Sub Groups 下選擇"

14、Factor, standard"或"Dual wavelength", 最后在Methods下選擇"Factor"進行單因子檢測或"Subtraction1'等 進行多因子檢測。1.2dsDNA在check parameters菜單下設定各個巻數值屏幕上方的導航欄告知用戶操作步驟整個操作過程中，右下角始終會顯示幫助框Mlnfo提示下一步操作檢査換算因子或林品類型的設定."Cuvette"默認為10 mm （UVette的長光程或標準比色皿），可選2 mm （UVette的短光S）. 1 mm （pCuve

15、tteGI.O）或其他光程長度,"A260/A230"比農 顯示光譜掃描'Show scan"和背最校正-Background" 可選快速使用指南I第6頁按箭頭指示方向放人比色皿.按dsDNA按箭頭指示方向放入比色皿，按 &并進入下一步結果分析。檢測完成后自動保存文件2.2.1核酸的熒光法檢測（僅限fluorescence款）：在Main Groups 下選擇"Routine （Fluorimetry）",然后在 Sub Groups 下選擇 ”Nucleic acids'.最后在 Methods 下選擇&qu

16、ot;PicoGreen*1 等.棗白的茨光法定量（僅限fluorescence款）或比色法定量：在 Main Groups 下選擇"Routine （Fluorimetry） M 或"Routine", 然后在 Sub Groups下選擇"Proteins"或"Proteins （reagent）", 最后在 Methods;下選擇 MNAnnOrAngA,e 或"RrAdfnrd1* 等& 常 用的Bradford法蛋白定量如右3所示。自定義標準品檢測（吸收光法）：在Main Groups下選擇 &qu

17、ot;Basic",然后在 Sub Groups 下選擇"Factor, standard1'或 "Calibration curve*.最后在 Methods 下選擇"Standard"或 'Calibration curveMilr GioupiO Ftworus卜BMWD AHomaneoo PQona rtfdd UVB g«ord 20C Rcx/ircS KAO OyctebcBK BCArakr? AfXAircMQ ftKRrui cxvivty Low«y O 1 ow<y mkro

18、D Ztv 23，上也自定義標準品松測（熒光法）（僅限fluorescence款）：在 Main Groups 下選擇"Basic （Fluorimetry）", 然后在 Sub Groups 下選擇 MStandard* 或 NCalibration curve最后在 Methods 下選擇"Standard"或"Calibration curve"o快速便用指南I第7頁2.2Bradford在check parameters菜單下設定各個參數值屏幕上方的導航欄告知用戶操作步驟整個操作過程中，右下角始終會顯示幫助框"Inf

19、o-, 提示下一步操作設定標準品的數目和重復敖以幾各個標準品的濃度, 由低到高進行排列按箭頭指示方向放入比色皿.按Bradford將單個標準品或系列標準品裝入比色皿（建議便用同一比色皿），按箭頭指示方向放人比色皿，按營便用軟縫"Graph"和“Table-可以在標準品結果衰和圖譜之間切換。若毎個標準品重復測定超過一次，可以便用方向鍵0和O在重復測定結果之間切換.另外，可對同一個標準品進行重復檢測。軟鍵“LastCa可調用最近已儲存的標準曲纟匕 直接用干樣品的檢測；軟鍵“Curve Fit”用干選擇標準曲線的回歸方式, 如線性回歸、二項式回歸等.2.5Bradford檢測完成

20、后自動保存按箭頭指示方向放人比色皿，按 文件名，并進入下一步結果分析。快速使用指南I第8頁3.1原始吸光度的檢測：在Main Groups下選擇"Absorbance1*,然后在Sub Groups下選擇"Single入二 -Multi 入”或 “Scan”.最后在 M ethods 下選擇"Single 入"/Multi 入”或 MScan原始茨光強度的檢測(僅限fluorescence款)：在Main Groups下選擇"Basic (Fluorimetry) ", 然后在 Sub Groups 下選擇"Raw fluo

21、rescence",最后在 Methods 下選擇 MRaw fluorescence”。在check parameters菜單下設定各個參數值屏幕上方的導航欄告知用戶操作步驟整個操作過程中，右下角始終會顯示幫助框"InfL,提示下一步操作檢査檢測波長和波長范圍的設定.無需設定換算因子或標進品濃度按箭頭指示方向放人比色皿，按按箭頭指示方向放入比色皿，按O檢測完成后自動保存文件名，并進入下一步結果分析。4.4.1PicoGreen dsDNAfluoresce nee選擇dsDNA的預設程序進行標準品儲存液的濃度臉圧栓測步驟見“直接因子法檢測”部分。為了測試標準品溶液是否被污

22、秦, 在“check parameters"部分最好激活MscanM功能，同時激活260/230比率和320 nm的背最校正功能。4.2選擇PicoGreen的預設程序（見核酸的熒光法檢測”部分幾如右圖所示。快速使用指南I第9頁4.4MoZd mo*Main Groups3b GroupsMethods FovXoo AbscrtMtrK« Ctsibrat)ofi ajrveB GOT ASTRoutooC &nipte kmebcsQ ftOT AST.25C工3icQ GOT AST.3OCB GOT AST_37C0 GGT_30CQ GGT.37C <

23、;New Mpttx?d>Cut Jj CopyRenameDele<e 丨Function 在check parameters菜單下設定各個參數值設定所用茨光染料的激發和發射波長，設定標準品數和重復數標準品儲存液濃度臉證后.隨之生成各個標準品的濃度值.如果測量結果與期望的濃度值相差較大, 那么標準品的濃度值需要做出相應的調整.并輸入到各個標準品濃度的相應位置見j標準品和標準曲線法檢測.kinetic動力學程序分為 Single X - continuous. Simple kinetics 和 Advanced kinetics 三 種."Single 入 contin

24、uous"首先在 Main Gruupb 下選擇"Abburbanue-,然后在 Sub Groups 下選"Single X- continuousMv 最后在 Methods 下選擇"Single 入-continuous"。 垓程序是指在待定波長、限定時間間隔以及限定一段時間內簡單 測定吸光度值隨時間的變化，并可作線性回歸分析，不能做酶活性 或底物濃度的換算=i亥方法特別適用干初步實驗，即之前沒育進行 過測定或者是需要重新進行酶活性檢測。"Simple kinetics-首先在 Main Groups 下選擇 “Basic”.然

25、后在 Sub Groups 下選擇"Simple kinetics",最后在 Methods 下選ft "Simple kinetics如右3所示。垓程序在Single入-continuous的基礎上可以定乂將吸光度值(A或 AA/min)換算為酶活性結果的因子，還可以選擇終點法、兩點法 以及線性回歸進行吸光度的檢測/Advanced kinetics"首先在Main Groups 下選擇"Advanced",然后在 Sub Groups 下選擇"Advanced kinetics",最后在 Methods 下選擇

26、 wAdvanced kinetics”。i亥程序在 Simple kinetics的基礎上可提供T氏劑空白對照” (Reayent blank)編 程和標準品編程。前者可校正城劑對檢測結杲的干擾，后者可代替因 子進行酶活性或底物濃度的換算。快速便用指南I第10頁5.2進人"check parameters",如果需要溫控設定所需溫度(溫控范 圍20至42 °C),當比色皿槽溫度達到設定溫度時,"Tempering" 變為"Ready",然后可以開始檢測."Measuring Procedure-可 選"

27、Endpoint*, "Two point"和"Linear regression* (Single X - continuous除外)，設定測量時間和測量間隔以及"Delay"(程序 開始到第一點測量的時間，用于將城劑的溫度平衡到設定溫度)。 Simple kinetics 設定換算因子 Factor,而 Advanced kinetics 可選 擇"Factor"或"Standard"進行結果換算。Simple kinetics的泰數 設置頁面如右國所示。5.3僅Advanced kinetics可進

28、行空白對照(Reagent blank)和標準 品的檢測,類似待測樣品的檢測。先進行空白對照或標準品的檢測, 然后進行待測樣品的檢測。“Delay”時間結束后，開始記錄吸光度 值，然后等一小段時間(如1 min)后加人酶或其他限速成分開 始酶反應，這時吸光度值會迅速增加，逐慚進人平臺蝴。另外，在進行Linear regression檢測時，如果測定系教小于0.95, 即回歸曲線和測量曲線擬臺較差.結果會顯示為紅色。這樣的情 況下，可激活“處理結果"(process results)區里的“線性回歸”(Linear regression)功能,然后可以便用軟fit “第一點” (Fir

29、st Pt)和“最后一點"(Last Pt)對回歸曲線的起點和終點進行重新 設定.可便用光標鍵移動。當回歸曲線與曲線的線性范圍充分匹 配時，就可以保存結果(右圖)。快速使用指南I第門頁樣品檢測完后按Next（下一步）即進人process result進行結果分析.具體選項如下表Zoom修改光譜圖的軸范團，以放大顯示圖譜所有具孑Scan （掃描）功能的栓測方法均可用> Multi入多波長入栓測> Scan掃描> Nucleic acids 核酸栓測> Proteins direct UV紫外直接栓測罷白> Dye labels塊料標記檢測> Bact

30、erial density細菌密度檢測> Dual wavelength 雙波長檢河.More calculations將濃矍結果轉換為摩爾濃度和總量> Nucleic acids 核酸栓鴻9> Dye labels染料標記（將核酸作為生物分子）栓測Peak detection識別光譜國的波峰> Scan掃描Linear regression修改時間窗，便線性回歸擬臺曲線更接近測 量曲線所有便用“線性回歸”方法的動力學程序中均可用> Single X -continuous單波長連續檢測（僅限kinetic款）> Simple kinetics簡單動力學（僅限kinetic款）> Advanced kinetics 高圾動力學（僅限 kinetic 款）1）選擇Zoom （放大）功能可以放大顯示圖譜。可選3種放大形式, 通過方向鎮。和O移動圖譜左右方向，通過方向縫O和。 將田譜放大縮小。其中-spectra"可自由選擇X軸的放大中心， 圖譜放大縮小過程中丫軸自動調整* "spectra-O"與"spectra" 的唯一不