1、1 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配制與滅菌 方月琴2一、復習二、實驗：配培養(yǎng)基與滅菌三、斜面的劃線培養(yǎng)四、倒平板的操作五、平板劃線培養(yǎng)3一、復習一、復習45微生物培養(yǎng)與檢驗主要課程內容微生物培養(yǎng)與檢驗主要課程內容1.微生物營養(yǎng)需求2.微生物形態(tài)3.微生物純化、分離4.微生物培養(yǎng)、篩選與保存5.微生物檢驗LOGO6課程內容課程內容微生物吃什么？微生物吃什么？1微生物長的什么樣？微生物長的什么樣？2如何得到微生物？如何得到微生物？3如何保存微生物？如何保存微生物？4我很愛吃熟食（豬頭肉），但是聽我很愛吃熟食（豬頭肉），但是聽說熟食微生物超標，這是怎么檢測說熟食微生物超標，這是怎么檢測的？的？57規(guī)則：規(guī)則

2、：1.上課不遲到：第1、5節(jié)課，提前10min到教室 2.下課前，自己的實驗物品歸類，該清洗的清洗，該收拾的收拾 3.值日生負責擦黑板、掃地、擦桌；為大家做好服務工作 4.上課時間請不要玩手機 8安全操作與標準操作安全操作與標準操作9（一）微生物培養(yǎng)基的制備（二）微生物的消毒滅菌（三）認識微生物培養(yǎng)所需的儀器設備微生物吃什么？微生物吃什么？110（一）微生物培養(yǎng)基的制備（一）微生物培養(yǎng)基的制備培養(yǎng)基：是人工配制的、適合微生物生長繁殖或產生代謝產物的營養(yǎng)物質。滿足微生物生長發(fā)育的水分、C，N，生長因子，P，S，Na，Ca等適宜的酸堿度、一定的緩沖能力、一定的氧化還原電位，合適的滲透壓11根據(jù)物理

3、狀態(tài)劃分根據(jù)物理狀態(tài)劃分培養(yǎng)基分 液體、半固體和固體 3種液體液體培養(yǎng)基有各種肉湯培養(yǎng)基，主要用于細菌細菌擴大培養(yǎng)擴大培養(yǎng)；半固體半固體培養(yǎng)基含0.4%瓊脂，主要用于保存細菌固體固體培養(yǎng)基含15%20%瓊脂，主要用于分離細分離細菌菌12培養(yǎng)基的配制原則培養(yǎng)基的配制原則1.選擇適宜的營養(yǎng)物質實驗室中常用：132.營養(yǎng)物質的濃度及配比合適3.控制pH條件 細菌和放線菌：pH7.07.5 酵母菌和霉菌：pH4.56.04.控制氧化還原電位5.原料來源的選擇盡量利用廉價且易獲得的原料作為培養(yǎng)基成分146.滅菌處理避免雜菌污染，要對所用器械及工作場所進行消毒與滅菌培養(yǎng)基一般采取高壓蒸汽滅菌，一般培養(yǎng)基0

4、.1MPa，121.3 1530min15（二）微生物的消毒滅菌（二）微生物的消毒滅菌16消毒滅菌方法：消毒滅菌方法：（一）干熱滅菌法（二）濕熱滅菌法（三）過濾除菌（四）紫外線殺菌（五）藥物殺菌17（一）干熱滅菌法（一）干熱滅菌法1.火焰滅菌法2.熱空氣滅菌法14016023h18（二）濕熱滅菌法（二）濕熱滅菌法1.高壓蒸汽滅菌法高壓蒸汽滅菌法121 2030min2.常壓蒸汽滅菌法3.常壓間歇滅菌法19（三）過濾除菌（三）過濾除菌薄膜濾菌器0.22m和0.45m20（四）紫外線殺菌（四）紫外線殺菌240280nm波段紫外線殺菌力較強多以253.7nm作為紫外線殺菌波長特點：穿透力弱穿透力弱超

5、凈工作臺：超凈工作臺：21（五）藥物殺菌（五）藥物殺菌1.酒精2.新潔爾滅22（三）認識微生物培養(yǎng)所需的儀器設備（三）認識微生物培養(yǎng)所需的儀器設備1.培養(yǎng)平板232.試管與棉塞243.接種環(huán)，涂布棒254.高溫高壓蒸汽滅菌鍋26p42 高壓蒸汽滅菌高壓蒸汽滅菌請回顧滅菌鍋的操作方法271）用之前檢查水位及水質。若水質不好，需換水2）放置滅菌物品，勿過滿；瓶子滅菌，瓶蓋擰松3）蓋上鍋蓋，相對的兩個螺帽一起擰4）啟動加熱，同時打開放氣閥；檢查安全閥是否關上。調整溫度時間121 15min。5）待排氣閥冒出大量熱氣并持續(xù)約25min后排盡冷空氣后，再將其關閉；6）滅菌結束，待壓力下降至0，可打開放氣

6、閥，之后開蓋。注意防止燙傷7）固體物品可進行干燥；液體物品冷卻后擰緊。盡量避免二次污染。285.鼓風干燥箱296.超凈工作臺30每次使用前，先用75%酒精（或新潔爾滅）擦洗臺面，并提前用紫外線滅菌燈照射1530min處理凈化工作區(qū)內積存的微生物；關閉滅菌燈后應啟動風機使之運轉2min后再進行培養(yǎng)操作；工作區(qū)內不應存放不必要的物品，以保持潔凈氣流流型不受干擾；使用完畢應及時清理工作臺面上的物品并用酒精擦拭臺面使之始終保持潔凈。317.7.微量移液器的使用微量移液器的使用32今天的工作：今天的工作：1.固體物品的滅菌固體物品的滅菌2.配制培養(yǎng)基并進行滅菌配制培養(yǎng)基并進行滅菌3.學習倒平板學習倒平板

7、4.學習斜面培養(yǎng)基制作學習斜面培養(yǎng)基制作5.超凈臺的準備超凈臺的準備6.劃線接種劃線接種7.滅菌效果檢查滅菌效果檢查33開始實驗開始實驗1.固體物品：固體物品：1）平皿（6只/組）2）試管與棉塞/塑料封口（6只/組）的包扎3）滅菌藍色、黃色和白色槍頭將以上物品放入滅菌鍋中進行滅菌121 20min342.培養(yǎng)基：培養(yǎng)基分 液體、半固體和固體 3種液體液體培養(yǎng)基有各種肉湯培養(yǎng)基，主要用于細菌細菌擴大培養(yǎng)擴大培養(yǎng)；半固體半固體培養(yǎng)基含0.4%瓊脂，主要用于保存細菌固體固體培養(yǎng)基含15%20%瓊脂，主要用于分離細分離細菌菌35牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基 牛肉膏 3g 蛋白胨 10g NaC

8、l 5g 瓊脂 15-20gpH 7.4-7.6，加水至1 000mL；若需分裝，需先融化，搖若需分裝，需先融化，搖勻后分勻后分于121高壓滅菌1520min備用用途：普通細菌常用的培養(yǎng)基（1）固體培養(yǎng)基配置36請大家配制：請大家配制：請大家查看“營養(yǎng)瓊脂”的成分與配制說明，每組配置牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基150mL于錐形瓶中請大家先寫出1L的配方，然后再寫出150mL的配方37配制完畢，將配制好的培養(yǎng)基裝入錐形瓶內，瓶口塞上棉塞，用牛皮紙/報紙包扎瓶口，標注好組別，進行高溫高壓蒸汽滅菌38（2）液體培養(yǎng)基）液體培養(yǎng)基為固體培養(yǎng)基中不含瓊脂牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)液牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)液 牛肉膏 3g 蛋白

9、胨 10g NaCl 5gpH 7.4-7.6，加水至1 000mL于121高壓滅菌1520min備用用途：普通細菌常用的培養(yǎng)基39請大家查詢LB培養(yǎng)基配方每組配置LB液體培養(yǎng)基50mL于錐形瓶中，包扎好瓶口（紗布+牛皮紙/報紙）后滅菌請大家先寫出1L的配方，然后再寫出50mL的配方401.固體物品的滅菌固體物品的滅菌 2.配制培養(yǎng)基并進行滅菌配制培養(yǎng)基并進行滅菌 3.學習斜面培養(yǎng)基制作學習斜面培養(yǎng)基制作4.學習倒平板學習倒平板5.超凈臺的準備超凈臺的準備6.劃線接種劃線接種7.滅菌效果檢查滅菌效果檢查413.如何倒平板如何倒平板（1）超凈工作臺的準備）超凈工作臺的準備將超凈工作臺臺面用酒精棉

10、球擦干凈；關上門后，紫外燈打開，滅菌15-30min滅菌結束，打開風機422.加熱融化培養(yǎng)基加熱融化培養(yǎng)基（若為剛滅菌結束未凝固的培養(yǎng)基，則略）將培養(yǎng)基放入微波爐內加熱融化，注意觀察，不要加熱時間過長或溫度過高，以免液體濺出。434.倒平板倒平板超凈工作臺滅菌完畢，關紫外燈，打開風機；超凈工作臺門不能開太高，約約20cm即可即可；用新潔爾滅棉球擦拭工作臺和手；將酒精燈瓶外擦干凈，轉移入工作臺；將已融化的培養(yǎng)基瓶身擦干凈，轉移入工作臺；待培養(yǎng)基冷卻至50C左右（不燙手為原則，但是不可冷卻過度不可冷卻過度），倒平板。44平板要求：平板平整，無凸起；平板無“掛壁”；培養(yǎng)基布滿整個平皿倒平板操作視頻4

11、5平板倒制結束，靜置，待凝固使用464.學習斜面培養(yǎng)基制作取無菌試管，倒入1/3高度的培養(yǎng)基，塞上蓋子，斜靠，使得斜面長度34cm，待凝固后使用47請大家先制備4個試管的斜面培養(yǎng)基，然后將剩余培養(yǎng)基用于制備平板481.固體物品的滅菌固體物品的滅菌 2.配制培養(yǎng)基并進行滅菌配制培養(yǎng)基并進行滅菌 3.學習斜面培養(yǎng)基制作學習斜面培養(yǎng)基制作 4.學習倒平板學習倒平板 5.超凈臺的準備超凈臺的準備 6.滅菌效果檢查滅菌效果檢查7.劃線接種劃線接種496.滅菌效果檢查50生化培養(yǎng)箱生化培養(yǎng)箱為微生物培養(yǎng)提供恒溫設備（固體培養(yǎng)基）517.平板劃線法：平板劃線法：取一接種環(huán)細菌，左手持平皿將蓋口微開，用沾有細菌的接種環(huán)在瓊脂平板上劃直線；接種環(huán)火焰滅菌，待冷卻，再用接種環(huán)在頂端邊緣劃線處沾取標本繼續(xù)劃線，如此劃45次，劃畢加蓋。并用蠟筆在皿底玻璃上寫明接種菌名。于37培養(yǎng)1824h觀察，注意平皿表面生長各菌落的大小、形態(tài)、邊沿、表面結構、透明度和顏色等特征。52四區(qū)劃線53 圓形、突起、邊緣整齊、表面光滑、濕潤、有光澤，不透明菌落，直徑12mm54請大家劃線接種大腸桿菌、金黃色