1、人堿性成纖維細胞生長因子酶聯免疫分析試劑盒使用說明書使用目的：本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關液體樣本中堿性成纖維細胞生長因子（bFGF）含量。實驗原理本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人堿性成纖維細胞生長因子（bFGF）水平。用純化的人堿性成纖維細胞生長因子（bFGF）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入堿性成纖維細胞生長因子（bFGF），再與HRP 標記的堿性成纖維細胞生長因子（bFGF）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過徹底洗滌后加底物TMB顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的堿性成纖維細胞生

2、長因子（bFGF）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中人堿性成纖維細胞生長因子（bFGF）濃度。試劑盒組成1 30 倍濃縮洗滌液20ml×1 瓶7 終止液6ml×1 瓶2 酶標試劑6ml×1 瓶8 標準品（40ng/L） 0.5ml×1 瓶3 酶標包被板12 孔×8 條9 標準品稀釋液1.5ml×1 瓶4 樣品稀釋液6ml×1 瓶10 說明書1 份5 顯色劑A 液6ml×1 瓶11 封板膜2 張6 顯色劑B 液6ml×1/瓶12 密封袋1 個標本要求1標本采

3、集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20保存，但應避免反復凍融2不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。操作步驟1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。20 ng/L 5 號標準品150l 的原倍標準品加入150l 標準品稀釋液10 ng/L 4 號標準品150l 的5 號標準品加入150l 標準品稀釋液5 ng/L 3 號標準品150l 的4 號標準品加入150l 標準品稀釋液2.5 ng/L 2 號標準品150l 的3 號標準品加入150l 標準品稀釋

4、液1.25 ng/L 1 號標準品150l 的2 號標準品加入150l 標準品稀釋液2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50l，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40l，然后再加待測樣品10l（樣品最終稀釋度為5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡2 / 3量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。3. 溫育：用封板膜封板后置37溫育30 分鐘。4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此重復5 次，拍干。6. 加酶：每孔加入酶標試劑50l，空白孔除外。7. 溫育：操作同3。8. 洗滌：操作同5。9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50l，再加入顯色劑B50l，輕輕震蕩混勻，37避光顯色15 分鐘.10. 終止：每孔加終止液50l，終止反應（此時藍色立轉黃色）。11. 測定：以空白空調零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應在加終止液后15 分鐘以內進行。操作程序總結：計算以標準物的濃度為橫坐標，OD 值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據樣品的OD 值由標準曲線查出相應的濃度；再乘