1、n 家兔腸缺血家兔腸缺血/ /再灌注損傷再灌注損傷 n Ischemia-reperfusion Injury in Rabbit (I/R) 組員：張景幀組員：張景幀 孫藝孫藝 王燕王燕 李蓉蓉李蓉蓉 宋天冬宋天冬 宋子夜宋子夜p掌握缺血再灌注損傷模型的復制，比較掌握缺血再灌注損傷模型的復制，比較缺血損傷和缺血再灌注損傷的區別缺血損傷和缺血再灌注損傷的區別p觀察缺血再灌注損傷的表現，理解缺血觀察缺血再灌注損傷的表現，理解缺血再灌注損傷發生的機制再灌注損傷發生的機制 【目的要求【目的要求】n【實驗動物】【實驗動物】n 家兔家兔n 【實驗器材】【實驗器材】n兔手術臺、BL-420生物信息采集系統

2、、Y型氣管插管、動脈夾、動脈插管、靜脈插管、注射器、紗布、棉線、實驗動物常用手術器械一套、橡皮管、三通管、1%肝素、25%烏拉坦、生理鹽水【實驗設計原理【實驗設計原理】n通 過 腸 系 膜 上 動 脈 結 扎 ， 即通 過 腸 系 膜 上 動 脈 結 扎 ， 即SMAO(Superior Mesentery Artery Occlusion)來阻斷部分腸的血液供應一段時來阻斷部分腸的血液供應一段時間后再恢復血流灌注，以復制腸缺血間后再恢復血流灌注，以復制腸缺血/再灌再灌注損傷的動物模型，探討缺血注損傷的動物模型，探討缺血/再灌注損傷再灌注損傷的發生機制的發生機制p組：持續缺血組組：持續缺血組

3、夾閉腸系膜上動脈夾閉腸系膜上動脈1hp組：再灌損傷組組：再灌損傷組 夾閉腸系膜上動脈夾閉腸系膜上動脈30min，再恢復血，再恢復血流流30min 【實驗分組【實驗分組】【實驗方法與步驟【實驗方法與步驟】n1. 稱重稱重n2. 全麻（耳緣靜脈注射全麻（耳緣靜脈注射25%烏拉坦烏拉坦4ml/kg） n 注意：從耳緣靜脈的遠心端開始注射，注意：從耳緣靜脈的遠心端開始注射，n排盡氣泡，速度不宜太快排盡氣泡，速度不宜太快n 麻醉效果：角膜反射麻醉效果：角膜反射n 基本消失，鉗夾家兔基本消失，鉗夾家兔n 舌頭無回收，四肢松軟舌頭無回收，四肢松軟n3. 仰臥固定（背部交叉）、備皮仰臥固定（背部交叉）、備皮n

4、 頸部正中（甲狀軟骨下緣頸部正中（甲狀軟骨下緣胸骨上切跡）胸骨上切跡）n 腹部正中（劍突下腹部正中（劍突下1.5cm起向下起向下5cm）n 注意：平貼皮膚剪毛，勿拎起皮膚！注意：平貼皮膚剪毛，勿拎起皮膚！n4.頸部正中切口行動脈插管頸部正中切口行動脈插管p切口范圍：頸部正中，甲狀軟骨下緣切口范圍：頸部正中，甲狀軟骨下緣胸骨胸骨上切跡，長約上切跡，長約5cmp分離左側頸總動脈：胸分離左側頸總動脈：胸骨舌骨肌與胸鎖乳突肌之骨舌骨肌與胸鎖乳突肌之間深面的頸動脈鞘內，與間深面的頸動脈鞘內，與 氣管平行，顏色鮮紅、氣管平行，顏色鮮紅、 較細、觸之有搏動感，較細、觸之有搏動感， 長約長約2-3cm，穿線備

5、用，穿線備用注意：（注意：（1）鈍性分離鈍性分離 （2）辨清頸）辨清頸A鞘內的血管神經鞘內的血管神經血管插管血管插管先結扎遠心端，后夾閉近心先結扎遠心端，后夾閉近心端，剪口部位盡量靠近遠心端，剪口部位盡量靠近遠心端，成端，成45度角朝向近心端度角朝向近心端剪一小口，約為管徑的剪一小口，約為管徑的1/3-1/2，插管方向朝向近，插管方向朝向近心端，插入心端，插入1-1.5cm【插管的注意事項【插管的注意事項】p插管內事先應加入少量肝素以防凝血；排凈氣插管內事先應加入少量肝素以防凝血；排凈氣泡，記錄前應關閉三通管泡，記錄前應關閉三通管p插管易滑脫，應雙線固定，結扎牢靠插管易滑脫，應雙線固定，結扎牢

6、靠p勿使插管尖端與血管壁形成角度，避免刺破血勿使插管尖端與血管壁形成角度，避免刺破血管管n 5. 5.腹部正中切口：腹部正中切口：n 腹正中線自劍突下腹正中線自劍突下1.5cm1.5cm起向下做起向下做5cm5cm切口切口 n6.6.尋找腸系膜上動脈：尋找腸系膜上動脈：n 將家兔腹腔內臟左移，找到齊右腎門對側垂直向腹主將家兔腹腔內臟左移，找到齊右腎門對側垂直向腹主動脈分出的腸系膜上動脈，穿雙線備用，注意避免損傷其動脈分出的腸系膜上動脈，穿雙線備用，注意避免損傷其他血管（缺血再灌注夾閉時注意墊橡皮管）他血管（缺血再灌注夾閉時注意墊橡皮管）n 7. 7.記錄一段正常血壓曲線記錄一段正常血壓曲線n

7、8. 8.復制腸缺血復制腸缺血- -再灌注模型，輕輕提起腸系膜上動脈的穿再灌注模型，輕輕提起腸系膜上動脈的穿線，用動脈夾夾閉，同時觀察各項生理指標變化。線，用動脈夾夾閉，同時觀察各項生理指標變化。p 9.9.分組進行實驗并記錄各項指標。（分組進行實驗并記錄各項指標。（組：夾閉腸系膜組：夾閉腸系膜上動脈上動脈1h 1h 組：夾閉腸系膜上動脈組：夾閉腸系膜上動脈30min30min，再恢復血流，再恢復血流30min30min）腸系膜上動脈示意圖腸系膜上動脈示意圖n1. 移動內臟時，動作要輕柔移動內臟時，動作要輕柔n2. 分離腸系膜上分離腸系膜上A時需小心細致，不要使用銳利時需小心細致，不要使用銳利

8、器械，以免損傷血管造成大出血器械，以免損傷血管造成大出血n3. 腸系膜上腸系膜上A夾閉要徹底，缺血再灌注組結扎時夾閉要徹底，缺血再灌注組結扎時注意墊橡皮管，恢復血流灌流（復流）要完全注意墊橡皮管，恢復血流灌流（復流）要完全【注意事項【注意事項】【結果分析【結果分析】 峰表示：結扎腸系膜上峰表示：結扎腸系膜上A A 血管床容量血管床容量 有效循環血量有效循環血量相對相對BPBP 壓力感受器壓力感受器 (+) (+) 減壓反射減壓反射BPBP 峰表示：松開腸系膜上峰表示：松開腸系膜上A A 血管床容量血管床容量有效循環血量有效循環血量相對相對 BP BP升壓反射（再灌注升壓反射（再灌注損傷還未來得

9、及發生）有時損傷還未來得及發生）有時峰不出現，峰不出現，BPBP直到死亡直到死亡 血壓持續下降，有再灌注損血壓持續下降，有再灌注損傷傷n組：結扎BP BP趨于平穩（相似于結 扎前），腸壁粉紅暗紅（淤血）腫脹（水腫），無出血點n組：結扎 BPBP趨于平穩（機體自身調節） 再灌BP，腸壁暗紅、水腫、出血點BP低于正常1/2時休克n 、組比較說明：缺血損傷與 是不同的 損傷過程， 損傷過程，后者損傷更嚴重【典型結果】【典型結果】【結果不明顯可能存在的問題】【結果不明顯可能存在的問題】n（1）實驗過程中是否發生了大血？n（2）缺血是否完全？n（3）再灌注是否通暢？n（4）記錄結果時基線是否改變？n（5）個體差異 【I/R的發生機制】的發生機制】n（1）活性氧的作用 ） n（2）鈣超載 ） n（3）白細胞的作用 ）n（4）高能磷酸化合物生成障礙 ）（1）盡早恢復血流灌流，縮短缺血時間）盡早恢復血流灌流，縮短缺血時間（2）再灌注時遵循低溫、低壓、低鈣的原則）再灌注