1、 液相色譜檢測1 儀器的基本常識及術語1.1 儀器結構：液相色譜儀主要包括泵、進樣器、色譜柱、檢測器；1.2 儀器分類：液相色譜儀屬于精密儀器中的色譜儀器；按照分為離機制，吸附、分配、離子交換、親和色譜，體積排阻色譜；按照流動相與固定相的極性，分為正相色譜法和反相色譜法；1.2.2 高效液相色譜法的應用范圍：高效液相色譜法適用于高沸點不易揮發、受熱不穩定易分解、分子量大的，不同極性的有機化合物，生物活性物質和多種天然產物，合成的和天然的高分子化合物等。1.3 儀器檢定：液相色譜儀檢定周期為1年，在兩次檢定間期內進行一次期間核查，也可以根據情況增加核查次數；1.4 維護保養：對于液相維護方式主要

2、是周維護和日維護，其中周維護包括聯機系統及中工作站軟件維護、數據庫整理備份、檢測器自檢、維護單向閥、溶劑砂芯濾頭、進樣器、電機泵檢查維護、溶劑瓶清洗等；日維護包括環境溫度、環境濕度、色譜柱溫度、壓力流速、進樣口是否潔凈、進液處的砂芯過濾頭是否潔凈、流動相交換時是否有沉淀；1.5色譜法的常用基本術語基線：在色譜操作條件下,沒有被測組分通過鑒定器時,記錄器所記錄的檢測器噪聲隨時間變化圖線稱為基線.死時間,保留時間及校正保留時間:從進樣到惰性氣體峰出現極大值的時間稱為死時間,以td表示.從進樣到出現色譜峰最高值所需的時間稱保留時間,以tr表示.保留時間與死時間之差稱校正保留時間.以Vd表示.死體積,

3、保留體積與校正保留體積:死時間與載氣平均流速的乘積稱為死體積,以Vd表示,載氣平均流速以Fc表示,Vd=tdxFc.保留時間與載氣平均流速的乘積稱保留體積,以Vr表示,Vr=trxFc峰面積：流出曲線(色譜峰)與基線構成之面積稱峰面積,用A表示.拖尾因子：是反映峰對稱性的指標，計算公式：拖尾因子 TW0.05h/2d1（其中W0.05h為5%峰高處的峰寬，d1為峰頂點至峰前沿之間的距離）。峰高與半峰寬:由色譜峰的濃度極大點向時間座標引垂線與基線相交點間的高度稱為峰高,一般以h表示.色譜峰高一半處的寬為半峰寬,一般以 x1/2表示； 1.7 色譜檢測的特性（1）靈敏度高；（2）線性范圍寬；（3）

4、分離度與柱效、選擇因子、容量因子、分析時間的關系：（4）分離度與柱效的平方根成正比，選擇因子一定時，增加柱效；（5）分配系數與分配比都是與組分及固定相的熱力學性質有關的常數，隨分離柱溫度、柱壓的改變而變化：一般通過改變固定相和流動相的性質和組成或降低柱溫，可增大選擇因子；（6）增大選擇因子的最有效方法是選擇合適的固定液。對于液相色譜，改變流動相的組成，可以有效控制k；2 儀器的操作規程2.1 日立液相設備 L-2000/2400操作規程2.1.1 使用環境環境溫度：455；相對濕度：小于95%RH。2.1.2 使用前準備檢查所用溶液(如流動相，乙腈等)是否足夠。檢查線路是否連接正常。2.1.3

5、 設備操作方法具體操作如下：(1)依次開啟泵開關，檢測器開關，自動進樣器開關，柱溫箱開關；(2)打開軟件，點擊“i”按鈕，出現聯機界面，點擊“Iinitialize” i'ni.laiz按鈕，當文本框出現文字時，表示聯機成功；(3)檢查所用方法是否符合要求。如不符合，進行設置；(4)開泵。檢測具體操作如下：(1)建立所需樣品盒；(2)點擊檢測按鈕，選擇剛建立的樣品盒；(3)首先進行走基線；(4)當基線走平時，點擊系列樣品檢測按鈕，進行標樣，樣品檢測；(5)當標樣檢測結果出來時，打開結果窗口，選擇所需標樣結果，點擊“Recalculate'ri:'kælkjul

6、eit進行重新計算，然后點擊“Calibration” kæli'brein進行定標；(6)當樣品結果出來時，打開結果窗口，選擇所需樣品結果，點擊“Recalculate” 'ri:'kælkjuleit進行重新計算，然后點擊“ModifyReport” 'mdifai,  ri'p:t,此單詞屬于使用最頻繁的3000個英文單詞，是海詞推薦用戶應該學會的4星核心詞匯。,出現結果報告，即可查看樣品具體結果。2.1.4 更換流動相具體操作如下：(1)當流動相快不夠時或異常時，及時更換流動相；(2)先把泵關閉，將流動相入口放入新流

7、動相中；(3)將泵閥逆時針旋轉，進行排氣。大約3分鐘后，關閉排氣功能；(4)排氣完畢后，將泵閥順時針旋轉擰緊，開泵； (5)走基線，當基線走平時，開始做標樣，做樣。2.1.5 關機具體操作如下：(1)先把泵關閉，將流動相入口更換為超純水；(2)將泵閥逆時針旋轉，進行排氣。大約3分鐘后，關閉排氣功能；(3)排氣完畢后，將泵閥順時針旋轉擰緊，開泵；(4)用超純水沖洗管路大約20分鐘；(5)把泵關閉，將超純水更換為100%甲醇或100%乙腈；(6)將泵閥逆時針旋轉，進行排氣。大約3分鐘后，關閉排氣功能；(7)排氣完畢后，將泵閥順時針旋轉擰緊，開泵；(8)用100%甲醇或100%乙腈沖洗管路大約30分

8、鐘；(9)關泵，關液相軟件，關泵開關，檢測器開關，自動進樣器開關，柱溫箱開關。2.1.6 維護保養、注意事項(1)進行旬維護檢查工作，主要檢查事項：軟件是否正常、溫度、清洗、進樣器、泵單元；(2)每次測量前進行標樣檢測，斜率達到99.99%要求才能檢測樣品，測完樣品及時清理。(3)按要求進行每天2個小時以上的清洗。2.2 Waters高效液相色譜-2695/24892.2.1開機自檢具體操作如下：(1)打開Alliance'lains 2695和2489 的電源開關至 ON (1) 的位置，儀器開始進行自檢；(2)儀器將進行大約5分鐘的自檢過程，待儀器自我測試完畢后，出現以下畫面，畫面

9、上方的狀態顯示區會出現“Idle” 'aidl狀態，表示開機測試正常。2.2.2 流動相有機溶劑要求用色譜純(進口名牌最好)，水或緩沖鹽溶液要用超純水(電阻率：18.2M)，每48小時制備新鮮的水相流動相,尤其是100% 含水流動相使用時間不超過兩天。6根管子都在液面以下。溶劑的位置必須高于溶劑混合閥(Gradient Proportioning Valve)。'greidint pr'p:ni vælv清洗柱塞密封墊(Seal Wash) si:l w 的溶液：含5%10%甲醇的超純水。洗針液(Needle Wash) 'ni:dl w：50%甲醇：

10、50%水(該比例僅適用于反相試驗)。注: 以上溶劑或溶液均需用0.45m的膜過濾并超聲脫氣1分鐘，用潔凈的玻璃容器盛放,避免污染，同時玻璃容器應用超純水來清洗而不能用自來水。2.2.3灌注柱塞密封清洗清洗操作步驟：(1)回到Menu'menju: 畫面，選擇Diag；(2)確定Seal Washsi:l w的管路放在正確的位置；(3)按Prime Seal Wash praim si:l w，再按Start，直到清洗溶劑流出泵桿密封圈沖洗廢液管，按Halt；h:lt(4)按Close。注意：密封圈清洗(Seal wash) si:l w溶劑，在反相液相色譜中可使用Water/ MeOH

11、methyl alcohol 甲醇 =90/10或Water/Acetonitrile æsitu'naitril乙腈 =95/5(根據實際需要使用不同溶劑)。2.2.4 灌注針頭清洗操作步驟：回到Mainmein的畫面，選擇Diag，選擇Primepraim Ndl Wash。設定值為30 秒，若想要多清洗幾次時，請按Start Again。清洗溶劑：50%的甲醇溶液注意：若上述清洗溶劑無法避免進樣時的交叉污染，使用較強的溶劑系統來進行清洗操作。2.2.5 打開真空脫氣機如液相儀管路干，可進行使用，如管路不干則按照以下步驟進行操作：按“Menu/Status” 's

12、teits鍵，進入Status (1)畫面；利用方向鍵將光標移至“Degasser” di:gæs位置，按Enter；利用上下鍵選擇模式為ON。注意：在開啟除氣裝置時，要確認所有溶劑管路都充滿溶劑；若沒有溶劑時請執行溶劑的Dry Primedrai praim操作。2.2.6 執行干灌注確定流動相溶劑的管子放在正確的位置，檢測器(Detector di'tekt)廢液管及定量環(Sample Loop lu:p)的廢液管是否放置于適當的廢液容器中。搖動溶劑瓶內的過濾器(Solvent Filter) 'slvnt 'filt，防止氣泡附著在過濾器的外表面。將空

13、的針筒插入抽液閥(Prime/Vent value)中，以逆時針的方向旋轉3圈。按“Menu/Status” 'steits鍵，進入Status(1)畫面，按“Direct Function” di'rekt 'fkn功能鍵，選擇Dry Prime，按Enter。按下面使用的溶劑開啟閥門(例如:Open A)，然后將針筒向外拉，抽出510mL溶劑并完全抽出溶劑管子內的氣泡，完成后關閉Prime/Vent閥門。在“Enter a duration” dju'rein中輸入3分鐘，按“Continue” 鍵，泵即以3.0mL/min的流速進行清洗(Purge)。可重

14、復上兩個步驟，將所要使用的流動相溶劑Dry Prime。2.2.7 執行濕灌注按“Menu/Status”鍵，進入Status(1)畫面，利用方向鍵將光標移至“Composition” kmp'zin字段，將欲Wet Prime 的溶劑輸入100%。按“Direct Function” di'rekt 'fkn 功能鍵，選擇Wet Prime，按Enter。Wet Prime的原設定值，一般為Flow Rate:7.5mL/min，Time: 3.0min，然后按下“OK”鍵，泵即開始進行Wet Prime操作。重復上述的步驟直到所有溶劑Wet Prime進行完畢。2.

15、2.8 設定流動相平衡色譜柱按“Menu/Status” 鍵，進入Status (1)畫面，利用方向鍵將光標移至“Composition” kmp'zin字段，利用儀器面板右側的數字鍵設置試驗要求的溶劑組成比例，此時會在原溶劑比例表的下方出現新編輯溶劑比例表(New Composition)。設定好新的溶劑組成比例后，按“Change Comp” teind kmp功能鍵(改變溶劑組成比例change composition)，此設定的溶劑組成比例即為當前的比例。利用方向鍵將光標移至“Flow” flu字段，利用儀器面板右側的數字鍵設定流速，此時儀器即設定的溶劑組成比例和流速來平衡色譜

16、柱。特別提示:對于常規的反相色譜試驗至少要用30倍柱體積來平衡，而對于離子對色譜的平衡可能需要多達500柱體積的流動相來平衡。2.2.9 沖洗進樣器溶劑管理系統的前處理( Prime the solvent management system)要求如下：(1)改變溶劑;(2)發現注射針頭內有氣泡;(3)每天開機的時候。沖洗進樣器執行步驟：(1)按“Menu/Status”鍵，進入Status(1)畫面，在設定溶劑的畫面中設定適當的流速與溶劑比例；(2)按“Direct Function” di'rekt 'fkn鍵，選擇Purge Injectorp:d in'dekt

17、，按Enter；(3)輸入Sample Loop體積清洗的倍數(原定值為6 倍)，按Enter；(4)壓縮測試(Compression Check)請先不需要測試，設定完成后按OK。2.2.10 放入樣品盤打開計算機，運行Empowerim'pau軟件，選擇存放數據文件的Project，運行Run Samples；按Develop Methodsdi'velp 'med按鈕，建立方法；按Monitor'mnit按鈕，觀察基線，待基線平穩，可準備進樣。2.2.11 關機首先關閉檢測器電源；在2695溶劑槽中換上適當的清洗溶劑，清洗系統約60分鐘(針對離子對試驗，建

18、議50%乙腈：50%水1mL/min流速沖洗色譜柱2小時以上)；按2695面板Diag鍵，選擇Prime SealWash，清洗泵頭約1分鐘；再選擇Prime NdlWash，清洗進樣針12次；按Menu/Status鍵進入手動控制模式，按Direct Function di'rekt 'fkn鍵，選擇Purge Injectorp:d in'dekt，沖洗進樣器(針對離子對試驗，建議設定50%乙腈：50%水的溶劑來沖洗進樣器)；降低流速至0，待系統壓力回零后，關閉2695電源，關閉計算機及顯示器電源。2.3島津LC-20AT液相色譜儀操作規程2.3.1準備工作在開機之

19、前，根據所做樣品的方法要求，準備好所用流動相，標樣及樣品。流動相抽濾后超聲脫氣15分鐘，標樣和樣品0.45um膜過濾。打開LC-20A×2SETS,CTO-10ASvp，SPD-M20A(或RF-10AXL)電源，待自檢通過。打開SCL-10Avp電源，檢查開機屏幕應顯示各單元，如果某單元沒有顯示，則不能控制該單元，需按f2鍵取消屏幕Fixed標志即可顯示并控制該單元。否則檢查通訊設置。打開計算機電源或重新啟動計算機，待正常進入WINXP操作系統。 排空操作：打開LC-20AT泵排空閥(逆時針180度以上)，按Purge鍵，泵開始排空運行。檢查流動相入口Teflon管路沒有氣泡后，再

20、按Purge鍵停止排空。 壓力調零：如果purge時，壓力不為零，需要進行壓力調零,按LC-20ATvp泵Func鍵選擇CONTROL 項，按FUNC鍵直至屏幕顯示 *ml ZERO ADJ項，按Enter鍵，再按CE鍵，即完成調零。然后關緊排空閥(順時針旋緊)。在計算機中雙擊LC SOLUTION圖標，進入工作站。 再雙擊OperationAnalysis 14進入實時分析窗口(根據不同的檢測器選擇)。在開機畫面中，User ID選中Admin，不需輸入Password，點擊OK(可聽到峰鳴一聲)，在下面操作中AB表示在A菜單下選擇B，以此類推。選中表示在中打號。在左側助手欄給出了引導順序操

21、作的圖標，自上而下順序執行即可(可以跳過執行)：(1)System configuration系統配置(第一次安裝或更換檢測器時配置，通常跳過不操作)；(2)System Check編輯儀器檢查參數：并且RUN運行檢查。通常不操作(跳過)；(3)點擊Data acquisition進入采集數據編輯方法界面點擊Instrument Parameter進入儀器參數設置界面：選中Normal(通用簡單)或Advanced(高級詳細)項，分別設定Pumps泵參數，Oven柱箱參數，Detecter檢測器參數，Controller系統控制器參數，Time Program時間程序參數等。儀器配置不同，控制

22、單元項的數目多少不同;Pumps泵參數：Mode控制方式，Flow流速，B，C，DConc各項濃度，P Max最大壓力；Oven柱箱參數：Oven設定溫度，T Max最大保護溫度；Detecter檢測器參數：Cell設定池溫。Wavelength設定波長；Controller系統控制器參數；Data acquisition選中Acquisition Time后，設置分析時間，等等；LC Time Prog時間程序參數：編輯泵梯度洗脫程序，也可以控制柱箱，檢測器等等；(4)點擊MethodData Analysis Parameter編輯積分參數：設置 Width峰寬，Slope斜率，Min A

23、rea最小峰面積等等。新建方法推薦使缺省值，待分析完樣品后再設置此項參數，得到優化的色譜數據結果后，將參數保存在當前方法中；(5)保存方法：點擊FileSave Method as如圖：起文件名*保存后，該方法即作為當前運行的方法;(6)下載方法：點擊Down Load 鍵，向儀器傳送參數。2.3.2運行方法點擊如圖圖標(Instrument On/Off 系統 開/關)系統開始運行，檢查各單元參數應與方法設定一致。等待系統平衡。一般情況下，由于流動相不同，交換平衡時間不定。可以觀察Detecter檢測器吸收變化,如果吸收值穩定不變，即認為接近平衡，可以調零等待，確認不變后，準備進樣分析。可以

24、通過改變衰減或予覽基線觀察基線變化，待基線平穩(初始化顯示時與橫軸平行)，準備進樣操作。2.3.4進樣分析如下：(1)單針進樣分析：如圖點擊Single Start圖標：出現如下采樣對話框；(2)編輯樣品參數：Sample ID樣品信息，Method Name 方法文件名，Data Path 數據存儲路徑，Data Name 數據文件名，Vial樣品瓶號(無)，Tray#架號(無)，Injection進樣量等；(3)點擊OK后，開始進樣操作(重復單針進樣，重復執行第7步驟即可)；(4)每個樣到時間分析結束，根據方法中的積分參數，所有色譜數據會自動進行積分處理。2.3.5報告予覽和打印點擊Top

25、 返回上級引導操作欄。點擊Post Run Analysis 進入數據后處理界面：點擊report 進入報告界面：點擊report format 進入格式界面：調入報告格式文件也可以自己編輯報告格式，然后點擊Data打開數據文件，將左側數據文件拖入右側報告欄即可。關于報告格式，可以通過內容選擇圖標，在報告中確定位置后，添加即可。右鍵功能很強大，用戶可以參考說明書靈活使用。選擇快捷圖標的預覽或打印圖標執行報告預覽或打印。2.3.6關機步驟如下：(1)更換洗液清洗流路系統(如用緩沖液，先用水清洗1小時，再用有機溶劑清洗30分鐘以上)，最后用有機溶劑封存；(2)清洗結束后，停止系統運行，在LC SO

26、LUTION工作站中，按Instrument on/off鍵即停止所有單元工作；(3)退出LC SOLUTION(可聽到峰鳴一聲)，再完全退出；(4)關系統控制器SCL-10Avp電源開關；(5)關主機SPD-M20A(或RF-10AXL)檢測器，LC-20AT泵，CTO-10ASvp柱箱電源開關。2.3.7清洗流路系統要求如果使用緩沖液，先用水更換緩沖液，清洗1小時，然后更換甲醇清洗40分鐘；如果使用有機溶劑(水)，直接更換甲醇清洗40分鐘即可。2.4安捷倫高效液相色譜操作規程2.4.1開機打開計算機,進入Windows XP(或Windows 2000)畫面,并運行Bootp Server

27、程序。打開1100 /1200LC各模塊電源。待各模塊自檢完成后，雙擊Instrument 1 Online圖標，化學工作站自動與1100LC/1200LC。從“View”菜單中選擇“Method and Run control”畫面, 單擊”View”菜單中的“Show Top Toolbar”，“Show status toolbar”，“System diagram”,”Sampling diagram”，使其命令前有“”標志，來調用所需的界面。把流動相放入溶劑瓶中。打開Purge閥。單擊Pump圖標，出現參數設定菜單，單擊Setup pump選項，進入泵編輯畫面。設Flow：5ml/m

28、in，單擊OK。單擊Pump圖標，出現參數設定菜單，單擊Pump control選項，選中On，單擊OK，則系統開始Purge，直到管線內(由溶劑瓶到泵入口)無氣泡為止,切換通道繼續Purge，直到所有要用通道無氣泡為止。單擊Pump圖標，出現參數設定菜單，單擊Pump Control選項，選中Off，單擊Ok關泵，關閉Purge valve。單擊Pump圖標，出現參數設定菜單，單擊Setup pump選項，進入Pump編輯畫面，設Flow：1.0mL/min。單擊泵下面的瓶圖標，輸入溶劑的實際體積和瓶體積，也可輸入停泵的體積，單擊Ok。2.4.2關機關機前，用100%的水沖洗系統20分鐘，然

29、后用有機溶劑沖洗系統10分鐘(如ACN)，然后關泵(適于反相色譜柱，正相色譜柱用適當的溶劑沖洗)。退出化學工作站，及其它窗口，關閉計算機(用shut down關)。關掉Agilent 1100/1200電源開關2.5 C8柱修復操作規程2.5.1目的 為節約檢測成本，同時統一操作方法，特制定本作業指導書。 2.5.2適用范圍 本標準適用于愛杰爾、天津蘭博生產的C8柱修復方法（其它廠家可以嘗試使用）。C8柱使用一段時間后，會出現柱壓高、峰變形問題，大部分的原因為C8柱污染，通過對污染C8柱柱頭過濾網進行超聲清洗，然后再生，解決問題。2.5.3工具、試劑 2個扳手，1把鈍剪刀。乙腈（色譜純）、異丙

30、醇（色譜純）。 2.5.4修復過程 （1）將故障C8柱柱頭處擰開 用2個扳手將C8柱兩柱頭擰開，取下兩端柱頭。用鈍的剪刀夾住塑料封口，取下塑料封口，過濾網就在封口處。觀察C8柱內填料是否有污染，如有污染，用干凈的濾紙輕輕擦掉污染物。注意：只能擦去表面一層填料，不能太多，否則會損壞柱子。兩端端口兩端端口圖1：C8柱內有過濾網圖2：C8柱內部塑料封口，內有過濾網（2）對兩端柱頭進行超聲清洗（或者對另一支舊C8柱的后端柱頭進行清洗，并代替此C8柱前端柱頭）準備小燒杯，倒入10%乙腈，然后將第一步取出的兩端柱頭（包括過濾網）放入燒杯，超聲半小時；然后將10%乙腈更換為100%乙腈超聲半小時；最后將10

31、0%乙腈更換為超純水，超聲半小時。或者將以前用過的舊C8柱的后端柱頭卸下，進行清洗，并代替此C8柱的前端柱頭。圖3：對端口，塑料封口，過濾網進行超聲清洗（3）安裝柱子將過濾網放入塑料封口處，安裝塑料封口，用扳手擰緊柱子。（4）連接柱子，進行再生 然后將C8柱裝到液相色譜儀，等基線走平后，進標品。觀察峰形、柱壓等是否正常，如果正常則可以不進行此步驟，否則進行再生：（1）用10%乙腈沖洗30分鐘，流速為0.6ml/min。（2）用100%乙腈沖洗2小時。流速為1.0mlmin。（3）用100%異丙醇沖洗2小時。流速為0.5mlmin。（4）用100%乙腈沖洗2小時。流速為1.0mlmin。（5）用

32、10%乙腈沖洗30分鐘，流速為0.6ml/min，然后換上流動相，然后走流動相，等基線走平后，進標品。（5）驗證修復效果 驗證方法（1）觀察柱壓，柱壓正常。（2）觀察標品出峰情況，峰形良好。（3）進行回收率驗證，回收率達到85%-105%。 通過以上方面，說明修復成功，此C8柱可以繼續進行使用。（6）注意事項 拆裝C8柱注意事項清洗手，防止污染柱子內部。拆裝柱子時，防止柱頭部螺紋變形。2.5.5連接C8柱與液相色譜儀注意事項連接C8柱入口與液相色譜儀，打開泵，使C8柱出口流出液體，沖5分鐘，連接C8柱與液相色譜儀檢測器端。防止有異物流入檢測池。3 色譜檢測的項目和關鍵控制點3.1樣品檢驗流程圖

33、核實檢驗計劃輸入unliab樣品接收儀器聯機樣品確認儀器檢查平衡檢測器再次核實檢驗計劃核實出具結果上機檢測樣品記錄檢驗結果核實出具結果記錄樣品信（1）核實檢驗計劃認真核實檢驗計劃，明確檢驗項目和批次，核實可以開展的項目。（2）樣品接收經相關檢驗人員對送檢信息及樣品的符合性確認后在送檢單上簽字，檢驗人員即可進行樣品的檢驗。（3）樣品確認注意檢查樣品規格、型號、商標、批次等級內容是否清楚，狀態是否完好、變質、污染等。如發現有任何問題，要詢問送檢單位。（4）記錄樣品信息將樣品名稱、批次、送樣日期等信息完整的記錄到帶有編碼的原始記錄上，要盡可能的保證信息的完整性，和可追溯性。（4）樣品前處理按照相應的

34、檢驗方法進行處理，并做好記錄。（5）上機檢測樣品待儀器平衡完畢后，裝滿洗瓶內的清洗溶劑（清洗溶劑要當天用當天配置），根據作業指導書或者國標，走標準曲線或者單點，上機即可。（6）記錄檢驗結果儀器走完樣品后，根據峰的保留時間定性，峰面積定量，如實記錄檢驗結果于原始記錄中，原始記錄按方法要求進行實際記錄檢測值。（7）核實出具結果對于外部樣品的檢測，記錄好檢驗結果后，核實無誤后即可出具檢驗結果。（8）核實檢驗計劃對于內部樣品的檢測，輸入結果前需再次核實檢驗計劃，保證沒有漏檢后方可輸入檢驗結果。（9）輸入unliab打開unliab系統，選擇正確的樣品類型和業務類型，創建樣品，創建完畢后如實填寫unli

35、ab系統中的信息卡，正確分配檢測項目，輸入結果。結果報出時，檢測結果在檢出限以下時，均報未檢出；檢測結果在檢出限以上時，報實測值。如檢驗處均使用程序輸單，則要求各崗位的輸單密碼不能外漏；結果輸入后不允許隨意改動，如需修改則上報直屬領導同意后則進行修改，其他人員無權修改；所有過程檢驗結果均在出具結果的當班下班前提交系統或輸入固定文件夾中；按照規定的程序進入預定的表格，不允許輸入的內容和文件名稱不對應、存在相同或能引起誤解的名稱，不能保證儲存的唯一性。檢驗報告儲存要求：如使用Unilab系統出具結果，由于起系統有自動保存功能，故不需要對其進行下載保存，其他電子版檢驗報告要求每半年進行備份刻盤一次。

36、3.2三聚氰胺檢測原理：試樣用三氯乙酸溶液-乙酸鉛提取，經陽離子固相萃取柱凈化后，用高效液相色譜法測定，外標法定量。三聚氰胺檢驗方法流程圖：接樣稱量樣品加0.1%三氯乙酸50ml加0%乙酸鉛2ml超聲20min離心10min（8000r/min）過混合型陽離子交換柱凈化氮吹20%甲醇溶液定容1ml0.45um過濾上機。3.1.1 稱量樣品：嚴格按照天平的使用規程操作即可。具體如下：天平使用前檢查：(1)準備使用天平時觀察周圍是否存在震動的情況，如果存在應在震動結束后再稱取樣品。(2)檢查天平的使用環境是否符合溫度1030、濕度2585的要求，水平泡是否處于中央位置。 (3)打開天平，待天平完成

37、自檢顯示“0.0000”時，可以使用。(4)對于過冷、過熱和含有揮發性及腐蝕性的物體，不可放入天平內稱量，被測物不得超過天平最大的負載。 3.2.2 稱量(1)將被測物放在稱盤中央，待顯示器左側邊的“”標志熄滅后，該數字即為被稱物的質量； (2)如稱量需盛放物質，先稱量容器，按TAR鍵，顯示為零即去皮，再置被稱物質于容器中，這時顯示的是被稱物的凈重； (3)每次稱量時都應將天平門關閉，稱量樣品過程中，避免出現抽拉抽屜、人員走動、倚靠實驗臺等對結果有影響的動作；(4)稱量完畢后關閉天平開關，但不必斷掉電源；(5)稱樣時所使用的離心管等要編號與樣品一一對應，并且記錄下樣品的質量；3.2.3 加藥品

38、3.2.3.1 加入藥品時注意要邊加邊搖，讓藥品與樣品充分接觸，使粉末狀樣品充分的溶解在藥品中。3.2.4超聲處理：超聲樣品時執行超聲波操作規程即可。具體如下：3.2.4.1 工作前準備： (1)檢查電源連接線是否有破損，電源插頭是否插入220V的三芯電源插座并連接牢固；(2)檢查清洗槽是否有異物； (3)檢查排水閥門是否關閉；3.2.4.2超聲處理：(1)樣品在超聲時要求超聲波清洗機中的液面一定要高于樣品的液面;(2)時間控制符合要求;(3)樣品超聲處理完成后，關閉電源開關，將槽內水放凈，并將機體擦洗干凈；斷開電源，讓機體自然散熱;3.2.5 離心樣品:樣品離心時執行離心機的操作規程即可。如

39、下：(1)檢查電源及數據線連接是否牢固，打開儀器電源，設定所需溫度;(2)待溫度達到設定溫度時，打開儀器上蓋，將需離心的樣品對稱放入離心機內，關閉儀器上蓋，設定轉速，設定運轉時間，點擊開始離心;(3)離心結束后將樣品取出，如暫時不使用，需將儀器上蓋蓋好，如長時間不使用，需將腔體內冷凝水清理后，關閉儀器電源;3.2.6 過混合型陽離子交換柱樣品離心時準備好所需要的陽離子小柱和試管并一一編號。離心結束后活化陽離子小柱、上樣、淋洗等。整個萃取過程要求銜接緊密不可以使小柱干燥，并且每一種液體按要求控制流速在1ml/min左右;3.2.7 氮吹:執行氮吹儀操作規程即可，具體如下：3.2.7.1用前檢查(

40、1)檢查電源線路是否正常；(2)檢查氮氣連接管路是否正常；(3)檢測氮吹針是否清潔，并進行必要的清潔工作;3.2.7.2使用(1)連接電源，打開氮吹儀開關，調節溫度，準備升溫；(2)將針頭放置好，調節氮氣流路暢通。將氮氣開關打開，使用調壓閥調節氮氣流速適合；(3)待溫度和壓力達到檢驗要求，則放置樣品；(4)調節針頭位置(距離液面1-2cm)，使氮氣開始吹干樣品；(5)樣品吹干后，關閉氮氣。關閉氮吹儀開關，取下電源插頭；(6)取出樣品;3.2.7.3注意事項(1)注意保持氮吹儀清潔,氮氣管路一定要連接緊密;(2)三聚氰胺要求氮吹的溫度是50±5（），并且吹針要用甲醇擦拭干凈，防止樣品間

41、交叉污染，氮氣流量以液面有輕微的波動即可，不可以吹的液面飛濺。并且所使用的試管是玻璃的，在氮吹時小心不要發生強烈得磕碰，以免碰碎試管;3.2.8 濃縮完全的吹干后用所需的溶液1毫升定容，漩渦1分鐘，過相應的0.22um或0.45um針頭過濾器(針頭過濾器分水系和有機系)緩慢地過濾樣品到已經一一編號的進樣瓶中準備上機。3.2.9 上機 儀器參考條件：流動相：離子對緩沖鹽：乙腈=90:10流速：1.0ml/min柱溫：40檢測器：紫外檢測器。波長;240nm進樣量：20ul備注：以上儀器條件是參考條件，在實際操作過程中可以根據樣品特性和儀器狀態做適當調整;3.2.10 此方法的檢出限2mg/kg3

42、.3 山梨酸、苯甲酸3.3.1山梨酸、苯甲酸檢測原理：去除試樣中脂肪和蛋白質，甲醇稀釋，過濾后，采用反相液相色譜法奮力測定。3.3.2方法檢測流程圖：稱量樣品加入0.1M氫氧化鈉溶液25ml超聲水浴15min調節PH到8分別先后加入2ml亞鐵氰化鉀溶液和乙酸鋅溶液劇烈振搖，靜止15min用甲醇定容，靜止15min過0.45um濾膜過濾取清液上機3.3.3色譜參考條件：色譜柱：C18,250mm*4.6mm，5um流動相：甲醇：磷酸鹽緩沖溶液=1：9流速：1.2ml/min檢測波長：227nm柱溫：室溫進樣量：10ul3.3.4山梨酸、苯甲酸檢出限1mg/kg3.4 安賽蜜、糖精鈉3.4.1安賽

43、蜜、糖精鈉檢測原理：樣品中安賽蜜、糖精鈉經高效液相反相柱C18分離后，以保留時間定性，峰高或峰面積定量。3.4.2方法流程圖：稱量樣品加入氫氧化鈉溶液25ml超聲15min調節PH到8（用0.5mol/l的硫酸）分別先后加入2ml亞鐵氰化鉀和乙酸鋅溶液振搖靜止15min加入40ml甲醇定容到100ml靜止15min0.45um有機濾膜取清液過濾上機檢測。3.4.3儀器參考條件：柱溫箱：30-40紫外檢測器：230nm進樣量：20ul和10ul色譜柱：C18或C8（250*4.6mm,5um）流速：1.0ml/min備注：以上儀器條件是參考條件，在實際操作過程中可以根據樣品特性和儀器狀態做適當調

44、整。3.4.4安賽蜜、糖精鈉的檢出限3mg/kg3.5對羥基苯甲酸乙丙酯3.5.1對羥基苯甲酸酯類檢測原理：試樣用甲醇超聲波提取，取上清液過濾，以高效液相色譜分離，二極管陣列檢測器檢測，外標法定量。3.5.2依據DB37/T1100-20083.5.2方法檢測流程圖：稱取樣品于25ml比色管加入15ml甲醇漩渦2min超聲10min用甲醇定容至25ml靜止分層，取上清液經0.2um有機濾膜過濾上機檢測。3.5.3儀器條件：色譜柱：C18柱，250*4.6nm流動相：甲醇：0.02mol/l乙酸銨溶液=60:40流速：1.0ml/min柱溫：35進樣體積：10ul檢測波長掃描范圍：210nm-400nm，定量波長256nm。3.5.4本方法檢出限為1mg/kg3.6山梨酸、苯甲酸、安賽蜜、糖精鈉、對羥基苯甲酸乙丙酯的前處理很相似，注意事項統一為：3.6.1超聲時液面應高于樣品的液面。3.6.2亞鐵氰化鉀和乙酸鋅的位置不能調換。3.6.3用力振搖。3.7食品中合成著色劑的測定3.7.1食品中合成著色劑的測定原理：食品中人工合成著色劑用聚酰胺吸附法或液-液分配法提取，制成水溶液，注入高效液相色譜儀，經反相色譜分離，根據保留時間定性和與峰面積比較進行定量。3.7.2檢測方法流程圖：樣品稱取20.0g-40.0g于100ml燒杯