1、維生素維生素c c注射劑的含量分析注射劑的含量分析錢鶯錢鶯 沈紅霞沈紅霞 楊優楊優 郎旭東郎旭東 王勇王勇 實驗目的實驗目的 根據含量分析，從自主設計的處方中，選出最佳處根據含量分析，從自主設計的處方中，選出最佳處方。方。 維生素維生素c c注射液注射液檢查檢查 phph值值: :應為應為5.0-7.0 5.0-7.0 顏色顏色: :取本品取本品, ,加水稀釋成每加水稀釋成每1ml1ml中含維生素中含維生素c50mgc50mg的溶的溶液液, ,照紫外可見分光光度法照紫外可見分光光度法, ,在在420nm420nm的波的波 長初測定吸長初測定吸光度光度, ,不得過不得過0.06. 0.06. 細

2、菌內毒素細菌內毒素: :取本品取本品, ,依法檢查依法檢查, ,每每1ml1ml中含內毒素應小中含內毒素應小于于2.5eu. 2.5eu. 裝量裝量 裝量差異裝量差異 可見異物可見異物 不溶性微粒不溶性微粒 無菌無菌 含量分析方法簡介含量分析方法簡介 碘量法碘量法 2 2，6-6-二氯靛酚滴定法二氯靛酚滴定法 菲林菲林b b近紅外分光光度法近紅外分光光度法 紫外分光光度法紫外分光光度法 旋光法旋光法 雙波長薄層掃描法雙波長薄層掃描法 * *hplchplc法法*實驗采用方法 碘量法碘量法 實驗方法實驗方法 精密稱取注射劑適量，加水精密稱取注射劑適量，加水50ml50ml稀釋至稀釋至4mg/ml

3、4mg/ml與丙與丙酮酮2ml,2ml,搖勻搖勻, ,放置放置5min,5min,加稀醋酸加稀醋酸4ml4ml與與 淀粉指示液淀粉指示液1ml,1ml,用碘滴定液用碘滴定液(0.05mol/l)(0.05mol/l)滴定滴定, ,至溶液顯藍色并至溶液顯藍色并持續持續3030秒不褪色秒不褪色. .每每1ml1ml碘滴定碘滴定(0.05mol/l)(0.05mol/l)相當于相當于8.806mg8.806mg的維生素的維生素c c。 2，6-二氯靛酚滴定法二氯靛酚滴定法 實驗方法實驗方法 精密量取注射液適量（約相當于維生素精密量取注射液適量（約相當于維生素c50mgc50mg），），置于置于100

4、ml100ml容量瓶中，加偏磷酸容量瓶中，加偏磷酸- -醋酸試液醋酸試液20ml20ml，用水，用水稀釋至刻度，搖勻；精密量取稀釋液適量（約相當于稀釋至刻度，搖勻；精密量取稀釋液適量（約相當于維生素維生素c2mgc2mg）置）置50ml50ml錐形瓶中，加加偏磷酸錐形瓶中，加加偏磷酸- -醋酸試醋酸試液液5ml5ml，用，用2 2，6-6-二氯靛酚滴定液滴定，至溶液現玫瑰二氯靛酚滴定液滴定，至溶液現玫瑰紅色，并持續紅色，并持續5s5s不褪；另取偏磷酸不褪；另取偏磷酸- -醋酸試液醋酸試液5.5ml5.5ml，加水加水15ml15ml，用，用2 2，6-6-二氯靛酚滴定液滴定，作空白試二氯靛酚滴

5、定液滴定，作空白試驗校正。以驗校正。以2 2，6-6-二氯靛酚滴定液濃度體積以及相應二氯靛酚滴定液濃度體積以及相應維生素維生素c c滴定度計算。滴定度計算。 實驗方法實驗方法 取兩支取兩支10 ml10 ml具塞比色管，其中一支加入適量的維生具塞比色管，其中一支加入適量的維生素素c c注射劑注射劑( (在稀釋后濃度小于在稀釋后濃度小于50 mg50 mgl)l)，另一支不另一支不加；然后分別依次加入加；然后分別依次加入2 ml2 ml的的folin bfolin b試劑，用試劑，用ph3ph3三三氯乙酸溶液稀釋至刻度，搖勻，反應氯乙酸溶液稀釋至刻度，搖勻，反應5 min5 min后，以試后，以

6、試劑空白為參比，使用劑空白為參比，使用l cml cm玻璃吸收池在玻璃吸收池在920 nm920 nm波長處波長處測定吸光度測定吸光度a a值。平行測量值。平行測量3 3次，取平均值。次，取平均值。 菲林菲林b b近紅外分光光度法近紅外分光光度法 菲林菲林b b近紅外分光光度法近紅外分光光度法 標準曲線制備標準曲線制備 分別準確配制濃度為分別準確配制濃度為0-50.0 mg/l0-50.0 mg/l的維生素的維生素c c系列標準工系列標準工作液，按上述實驗方法測定吸光度作液，按上述實驗方法測定吸光度 。 線性回歸做標準曲線。線性回歸做標準曲線。 根據標準曲線求出維生素根據標準曲線求出維生素c

7、c含量。含量。 紫外分光光度法紫外分光光度法 實驗方法實驗方法 在在10ml10ml比色管中依次加入比色管中依次加入ph=9.5ph=9.5醋酸一醋酸鈉緩沖溶醋酸一醋酸鈉緩沖溶液液2ml2ml，1 106g/ml06g/ml甲基紫甲基紫2ml2ml；在其中一個比色管；在其中一個比色管中加人一定量的維生素中加人一定量的維生素c c注射液注射液( (在稀釋后濃度小于在稀釋后濃度小于50 50 mgmgl l) )，在另一個比色管中不加維生素，在另一個比色管中不加維生素c c注射液；用注射液；用二次蒸餾水定容，搖勻。用水作空白，二次蒸餾水定容，搖勻。用水作空白，1cm 1cm 比色皿于比色皿于265

8、nm 265nm 處，測定吸光度處，測定吸光度 。 紫外分光光度法紫外分光光度法 標準曲線制備標準曲線制備 分別準確配制濃度為分別準確配制濃度為0-50.0 mg/l0-50.0 mg/l的維生素的維生素c c系列標準系列標準工作液，按上述實驗方法測定吸光度工作液，按上述實驗方法測定吸光度 。 線性回歸做標準曲線。線性回歸做標準曲線。 根據標準曲線求出維生素根據標準曲線求出維生素c c含量。含量。 旋光法旋光法 旋光度與濃度的關系旋光度與濃度的關系 精密稱取精密稱取105 105 干燥恒重的維生素干燥恒重的維生素c c對照品對照品0.4931g0.4931g，0.7995g0.7995g，1.

9、0184g1.0184g，1.2503g1.2503g，1.5551g1.5551g，2.0261 g2.0261 g，分別置分別置50ml50ml容量瓶中，用容量瓶中，用5 5碳酸氫鈉溶液稀釋至刻碳酸氫鈉溶液稀釋至刻度，度， 以以5 5 碳酸氫鈉溶液為空白，依法測定它們的碳酸氫鈉溶液為空白，依法測定它們的旋光度，旋光度， 以旋光度對濃度作線性回歸。以旋光度對濃度作線性回歸。 旋光法旋光法 實驗方法實驗方法 量取維生素量取維生素c c注射液適量，用注射液適量，用5 5碳酸氫鈉溶液將樣品碳酸氫鈉溶液將樣品稀釋成濃度為稀釋成濃度為25 mg/ml25 mg/ml，按上述方法進行測定，按上述方法進行

10、測定， 每每個樣品測定個樣品測定3 3次，代入直線回歸方程。計算出含量。次，代入直線回歸方程。計算出含量。 雙波長薄層掃描法雙波長薄層掃描法 實驗方法實驗方法 對照品溶液的制備：取維生素對照品溶液的制備：取維生素c c對照品對照品30mg30mg置置10ml10ml容容量瓶中，加入量瓶中，加入9595 乙醇溶液適量，溶解后用乙醇溶液適量，溶解后用9595乙乙醇稀釋至刻度。醇稀釋至刻度。 掃描條件的確定：雙波長反射法鋸齒掃描：掃描條件的確定：雙波長反射法鋸齒掃描：s s254nm254nm， r r320nm320nm，sx=3sx=3。 線性關系考察線性關系考察: :用微量進樣器吸取對照品溶液

11、用微量進樣器吸取對照品溶液2.02.0，3.03.0，4.04.0，5.05.0，6.0 l6.0 l點樣，展開缸中暗處飽和點樣，展開缸中暗處飽和1515分鐘，再將點樣品的一端浸入展開劑分鐘，再將點樣品的一端浸入展開劑( (氯仿一乙醇一氯仿一乙醇一冰醋酸一水冰醋酸一水=54=54：2727：1010：5)5)中展開，展開約中展開，展開約10cm10cm，取出薄層板，掃描。以對照品質量為橫坐標，峰面積取出薄層板，掃描。以對照品質量為橫坐標，峰面積積分值為縱坐標，進行直線回歸。積分值為縱坐標，進行直線回歸。 雙波長薄層掃描法雙波長薄層掃描法 樣品的含量測定樣品的含量測定 量取維生素量取維生素c c

12、注射液加入注射液加入9595乙醇稀釋至乙醇稀釋至3mg/ml3mg/ml至刻度，至刻度，振搖，取續濾液作為供試品溶液。精密吸取供試品溶振搖，取續濾液作為供試品溶液。精密吸取供試品溶液液4.0 l 4.0 l ，維生素，維生素c c對照品溶液對照品溶液3.0 l 3.0 l ，5.0 l 5.0 l ，分別點于同一薄層板上，依法展開，掃描，用外標二分別點于同一薄層板上，依法展開，掃描，用外標二點法測定樣品中維生素點法測定樣品中維生素c c的含量。的含量。 hplchplc法法 色譜條件色譜條件 色譜柱：色譜柱：6-mm 6-mm 150-mm 150-mm ； 流動相：溶解流動相：溶解15.6g

13、15.6g磷酸氫二鈉和磷酸氫二鈉和12.2 g 12.2 g 磷酸氫二鉀磷酸氫二鉀于于 2000 ml 2000 ml 水中水中, , 用磷酸調用磷酸調 到到 2.5 2.5 0.05 0.05； 檢測波長：檢測波長：245-nm 245-nm ； 流速：流速：1 ml1 mlminmin-1-1; ; 進樣量：進樣量：20l;20l; hplchplc法法 保留時間確定：用流動相配制維生素保留時間確定：用流動相配制維生素c c標準品濃度為標準品濃度為0.5mg/ml0.5mg/ml定位；定位； 有關物質檢測：用流動相配制空白輔料溶液，檢測有關物質檢測：用流動相配制空白輔料溶液，檢測輔料是否有

14、干擾；輔料是否有干擾； 處方樣品測定：用流動相稀釋處方注射液到處方樣品測定：用流動相稀釋處方注射液到0.5mg/ml0.5mg/ml，每次進樣，每次進樣20l20l，每個處方取樣，每個處方取樣3 3份，每份，每份進份進6 6針。針。 根據回歸方程計算含量根據回歸方程計算含量 hplchplc法法 標準曲線制備標準曲線制備 取維生素取維生素c c標準品約標準品約221mg221mg，精密稱定，置，精密稱定，置50ml50ml量瓶中，量瓶中，加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為儲備液。分加流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為儲備液。分別精密量取儲備液適量，用流動相稀釋成每別精密量取儲備液適量，用流動

15、相稀釋成每1ml1ml含含0.260.260.70 m g0.70 m g的遞度標準液，用上述的色譜條件測的遞度標準液，用上述的色譜條件測定。以濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，得回歸方定。以濃度為橫坐標，以峰面積為縱坐標，得回歸方程。程。(n=6)(n=6)參考文獻參考文獻李 艷等，旋光法測定維生素c注射液的含量，遼 寧 藥 物 與臨 床，1999，2(2);11楊婷等.菲林b近紅外分光光度法測定維生素c.分析化學研究簡報.2005.11(33).1593-1595陸 茜 等，紫外分光光度法測定維生素c含量，江漢大學學報(自然科學版)，2005，33(2),仉玲等，紫外分光光度法測定維生素c注射劑的含量，安徽醫藥，2001 ,s(4)肖本富等,高效液相色譜法測定血漿中維生素c的含量蘇州大學學報(醫學版)2004；24(6)楊輝等,雙波長薄層掃描法測定維生素c的含量錦州l矗學院學報，2006，27(3)胡曉艷. hplc測定力度申泡騰片中維生素c的含量.廣東藥學.2005.15(1);8-10譚甜有,鐘世順 ,李麗明. hplc測定健元片中維生素c含量的方法研究.國際醫藥衛生導報.2006 .12(12):107-109賈湘曼等.分光光度法測定抗壞血酸中草酸鹽含量.河北醫藥.2005.27(9):703-704張元廣.維生素c片劑的紫外分光光度法測定.2002.