1、第2講酶的應用1 下列是有關固定化酶及細菌培養與分離的問題。請回答下列問題。(1) 固定化酶是將水溶性的酶用物理或 的方法固定在某種介質上，使之成為而又有酶活性的制劑。可用 法將a -淀粉酶固定在石英砂上形成固定化酶柱。(2) 為獲取土壤中的芽孢桿菌，某同學進行了相關實驗，操作流程如下。井單 觀挑闔4上圖中步驟A為，步驟B為。要判斷培養基滅菌是否徹底，可采用的方法是。(3) 下列消毒滅菌方法中，常用于接種環滅菌的是 。A. 70%酉精浸泡B .紫外線照射C.灼燒D.高壓蒸汽滅菌(4) 請分析劃線分離法能得到單菌落的原因： 。解析 (1)固定化酶技術常用化學結合法和物理吸附法將水溶性的酶固定在某

2、種介質上，使之成為不溶于水而又有酶活性的制劑。可用物理吸附法將a -淀粉酶固定在石英砂上形成固定化酶柱。(2)配制的固體培養基經滅菌后就可以倒平板，制成固體平面培養基，劃線分離后，把培養皿放在合適的溫度條件下進行培養。(3)接種環常用灼燒法滅菌，微生物的培養基則用高壓蒸汽法滅菌。劃線分離法之所以能夠獲得單菌落的原因 就是在不斷地劃線過程中，接種環上的菌液越來越少，到劃線最后部分細菌間距離加大，經培養后能得到單菌落。答案(1)化學不溶于水吸附(2)制平板培養將火菌后的培養基培養一段時間后觀察是否出現菌落C(4)劃線過程中接種環上的菌液逐漸減少，到劃線最后部分細菌間距離加大，經培養后 能得到單菌落

3、2. (1)在工業生產中，為提高酶的使用效率和產品純度，一般需要將酶進行固定化處理。利用石英砂固定 a淀粉酶的方法屬于 。A.吸附法B.偶聯法C.交聯法D.包埋法,遇碘顯(2) 一定濃度的淀粉溶液流過a淀粉酶固化柱后，被水解成色。（3） a 淀粉酶可以通過枯草桿菌發酵生產，以下是利用誘變育種方法培育獲得產生較 多淀粉酶的菌株的主要實驗步驟。（原理：菌株生長過程可釋放淀粉酶分解培養基中的淀粉，在菌落周圍形成透明圈。）第一步：將枯草桿菌株接種到 培養基上進行擴大培養。第二步：將枯草桿菌株分成兩組，A組用處理，B組不處理（作對照）。第三步：制備多個含淀粉的固體培養基。第四步：將 A、B組分別稀釋后，

4、分別在含淀粉的固體培養基上利用 法分離，適宜條件下培養得到單菌落。第五步：觀察 A、B組各菌落周圍的 。實驗結果預期：根據誘發突變率低的特點，預期 。根據誘發突變不定向性的特點，預期 。解析 石英砂固定 a 淀粉酶的方法屬吸附法；淀粉流經a 淀粉酶固化柱后，被水解為糊精，遇碘呈紅色；獲得誘變菌株需進行誘變劑處理，通過實驗組與對照組培養基 中菌落周圍透明圈大小可確認淀粉分解程度。答案 A糊精紅色液體誘變劑涂布 透明圈大小 A組多數菌落周圍的透明圈與B組差異不顯著 A組有少數菌落周圍的透明圈比B組明顯小，有少數比 B組明顯大（或A組透明圈大小不一， B組較一致）3. （1）酶是生物體中生化反應的催

5、化劑，在工業生產和食品加工中的應用日益廣泛。為提高酶的利用率以及提高產品的純度，一般需要對酶進行固定化處理，即將酶用物理或化學方法固定在的介質上，具體方法有吸附法、共價偶聯法、法和法。如圖為裝有固定化酶 a的實驗裝置。其中 b是反應柱，c是催 化底物。若裝置中的固定化酶為a-淀粉酶，則通常是利用法進行固定的，介質一般為石英砂。利用裝置進行淀粉 水解實驗時，在漏斗中加入反應液后的操作是 ，以保證反應充分。對流出的液體用 檢測，若呈現色反應，說明淀粉被水解成糊精。 若a是固定化酵母，要想得到較多的乙醇，加入反應液后的操作是 的長導管起的作用是。解析（1）固定化酶主要是讓水溶性的酶固定在相應的介質上

6、，使之成為非水溶性的酶,達到重復使用、反應物和產物容易分離等目的。常用的方法有吸附法、共價偶聯法、交聯法和包埋法。（2）固定a -淀粉酶通常用吸附法， 開始實驗后只需打開圖示活塞 1和2, 并使淀粉溶液以0.3 mL/min的流速過柱，不能過快，以保證反應充分。在流出 5 mL淀粉溶液后接收0.5 mL流出液，加KI-I 2溶液檢測，若溶液呈現紅色，說明有糊精的生成。要利用固定化酵母產生較多乙醇，需要創造無氧環境，所以要把活塞1和2關閉，而產生的CO又可以通過長導管排放出去，并且這樣形狀的長導管還可以起到防止雜菌進入 的作用。答案（1）不溶于水交聯包埋（2）吸附 打開活塞1和2,并控制流速 K

7、II2溶液 紅 關閉活塞1和2排出 反應產生的CO氣體，防止雜菌進入反應柱4 在果汁生產中用到果膠酶，某課題研究小組為了探究果膠酶的某些特性，進行了如下實驗：abmt杲（1）實驗方法：請將上圖中所示的操作進行排序 。（2）實驗結果：對照組與實驗組進行了相同時間的實驗，結果如下圖中曲線甲所示:1520 25 30 35 4U 45 iUJ麼吧; 圖中自變量是溫度，除此之外還可用 表示。A.酶的濃度B.蘋果泥的量C.水的加入量D. pH 圖中的縱坐標還可用 來表示。 實驗步驟中，在果膠酶和蘋果泥混合前，將二者分裝在不同試管中并進行恒溫的目的 實驗小組改變了實驗條件后重復做實驗，得到曲線乙，蘋果汁的

8、澄清度最高點對應的橫坐標是同一位置的原因是 。引起曲線乙下移的原因是 （至少答出兩條）。3下表是某實驗小組的詳細實驗結果：溫度/C1020304050607080果汁量/mL813152515121110根據上述結果，說明當溫度為 時果汁量最多，能不能確定該溫度就是果膠酶的最適溫度？ ；如果不能，請設計出進一步探究果膠酶的最適溫度的實驗方案。解析 本題以探究果膠酶的某些特性的實驗為載體，綜合考查了影響酶活性的因素、探究溫度對酶活性的影響的實驗。（1）實驗順序是：準備水果泥和配置果膠酶、水果泥和果膠酶分別水浴保溫、水果泥和果膠酶混合保溫、過濾果汁后用量筒計量。（2）果膠酶的活性受溫度、 pH 等條件的影響，而與底物的量、酶的濃度和水的加入量沒有關系；每 一種酶都有一個最適溫度和最適 pH 且該值恒定。衡量實驗結果的指標有兩個：一個是 蘋果汁的體積，另一個是蘋果汁的澄清度。為了保證實驗在相應溫度下進行，必須使酶 和底物分別保溫達到要求后再混合。在相同溫度條件下，pH、酶的濃度和底物濃度也會改變反應速率。（3）根據表中數據可看出，在 40 C時產生的果汁量最多，該溫度比較接 近酶的最適溫度。但要將溫度確定得更加精確，以40 C為中心，以更小的溫差（如0.5 C）設置自變量。答案（1）acdb （2）D 蘋果汁的體積保證底物和