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文檔簡介

1、會計學1酶切回收連接酶切回收連接第1頁/共21頁限制性核酸內切酶第2頁/共21頁第3頁/共21頁產生3粘性末端第4頁/共21頁GTCCAGGTCGACCAGCTGGACCTG第5頁/共21頁第一個字母取自產生該酶的細菌屬名，用大寫；第二、第三個字母是該細菌的種名，用小寫；第四個字母代表株；用羅馬數字表示發現的先后次序。3、命名：Hind Haemophilus influenzae d株 流感嗜血桿菌d株的第三種酶 屬 系 株 序v書寫方法：前3個字母斜體第6頁/共21頁第7頁/共21頁第8頁/共21頁DNA的量酶的用量（U/C）酶在50甘油中，甘油在總體積的濃度要小于5反應的總體積Buffe

2、r的體積水的體積第9頁/共21頁Hind III (20U/l) 1.5 l 10 緩沖液 E 3l 三蒸水 9l _總體積 30l XbaI（20U/l 1.5 l 加樣順序加樣后混勻，短暫離心，使之至管底。第10頁/共21頁第11頁/共21頁第12頁/共21頁載體 DNA目的基因第13頁/共21頁 bp1534 994 695 515 377 237 A B C M 第14頁/共21頁酚抽提法1.切下含目的DNA的膠塊。2.加入酚，將膠塊沒過即可。3.振蕩后低溫凍結，視溫度而定時間。4.30水浴融化，若體積小，可補加TE。5.振蕩器上振蕩。6.12,000 rpm離心5 min。7.取上清

3、200l。第15頁/共21頁8.用200l的氯仿：異戊醇抽提（振蕩，離心12000 rpm，5 min，取上清）。9.加20 l NaAc，400 l無水乙醇沉淀DNA，冰凍約30 min甚至過夜。10.12,000 rpm離心10 min，棄上清。11.將DNA溶于約30l TE中。第16頁/共21頁DNA片段的連接反應第17頁/共21頁 催化DNA 5 磷酸基與 3 羥基之間形成磷酸二酯鍵(ATP)5533OH POHPDNA連接酶DNA連接酶第18頁/共21頁總體積20 l 載體 0.10.2g目的基因：載體mol數= 15：1H2O10buffer載體目的基因ligase總體積20l l l l l l 第19頁/共21頁連接應注意的事項：1.目的基因與載體的mol數

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