1、高效液相色譜法測定消炎片中黃芩苷的含量 摘要 目的:建立測定消炎片中黃芩苷含量的高效液相色譜法。方法:采用diamonsil c18色譜柱(200 mm4.6 mm,5 m),流動相為乙腈-水-磷酸溶液(32680.2),檢測波長為280 nm,流速為1.0 ml/min,柱溫為室溫。結果:得回歸方程為y=114 166.67x+462 893.57,r=0.999 8(n=6), 表明進樣量在0.402.40 g范圍內有良好的線性關系,平均回收率為(99.510.67)%,rsd為0.67%。結論:本方法簡便、準確、重現性好,可用于消炎片的質量控制。 關鍵詞 高效液相色譜法;消炎片;黃芩苷;

2、含量測定 中圖分類號r927.2 文獻標識碼a 文章編號1673-7210(2009)07(a)-084-02 content determination of baicalin in xiaoyan tablets by hplc zhao zhigang, liu xiaoli (institute for drug control of chaoyang city, liaoning province, chaoyang 122000, china) abstract objective: an hplc method for the content determination of b

3、aicalin in xiaoyan tablets was established. methods: a diamonsil c18 column(200 mm4.6 mm, 5 m) was used with acetonitrile-water-phosphate acid(32680.2) as the mobile phase. the flow rate was 1.0 ml/min, the detection wavelength was 280 nm, the column temperature was room temperature. results: the li

4、ner range was 0.40-2.40 g(r=0.999 8, n=6), and the regression equation was y=114 166.67x+462 893.57, the average recovery was (99.510.67)% with a rsd of 0.67%. conclusion: the method is simple, accurate and repeatable, and it can be used in the quality control of xiaoyan tablets. key words hplc; xia

5、oyan tablets; baicalin; content determination 消炎片主要由蒲公英、紫花地丁、野菊花、黃芩四味中藥組成,具有抗菌消炎、清熱解毒的作用,用于治療呼吸道感染、發熱、肺炎、支氣管炎、咳嗽有痰、癤腫等?，F質量標準收載于衛生部藥品標準中藥成方制劑第四冊1,標準中僅有定性鑒別,無處方藥味特征成分的含量測定項目。本文通過參考有關資料,建立了高效液相色譜法測定黃芩中黃芩苷含量的方法,獲得了很好的分離效果,本方法簡單、準確、靈敏度高、重現性好,能夠較原標準更好地控制藥品質量。 1 儀器與試藥 1.1 儀器 高效液相色譜儀(美國sp-8810,sp-100檢測器,n20

6、10色譜工作站)。 1.2 試藥 消炎片(廣西千珍制藥有限公司,批號為080526、080714、081025);黃芩苷對照品(中國藥品生物制品檢定所,含量測定用,批號為110715-200514);乙腈為色譜純,水為重蒸餾水,磷酸為分析純。 2 方法與結果 2.1 色譜條件與系統適應性試驗 色譜柱為diamonsil c18柱(200 mm4.6 mm,5 m);流動相為乙腈-水-磷酸(32680.2);檢測波長為280 nm;流速為1.0 ml/min;柱溫為室溫;進樣量為20 l。靈敏度為0.1 aufs,理論板數不低于3 000,此色譜條件下,峰形良好。 2.2 溶液的制備 2.2.1

7、 對照品溶液的制備精密稱取105恒溫干燥3 h的黃芩苷對照品10 mg,置于50 ml容量瓶中,用甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,制成對照品儲備液。精取2.0 ml,置10 ml容量瓶中,用甲醇溶解并稀釋至刻度,搖勻,作為對照品溶液。 2.2.2 供試品溶液的制備取本品20片,除衣精稱研細,精密稱定2.5 g片粉,置于100 ml具塞錐形瓶中,精密加入甲醇溶液50 ml,密塞,稱定重量,加熱1 h,放冷,再稱定重量,用甲醇補足減失重量,搖勻,濾過,取續濾液進樣20 l,記錄色譜峰峰面積。 2.2.3 陰性樣品溶液的制備按處方組分比例及制備工藝,制備缺黃芩的陰性樣品,同“2.2.2”項下方法操作,即

8、得。 2.3 陰性干擾試驗 照上述色譜條件,分別取對照品溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液各20 l,注入色譜儀,測定,樣品色譜圖中,黃芩苷與其他峰分離較好,而陰性樣品在黃芩苷出峰處無干擾峰出現,證明本方法可行,結果見圖1。 2.4 線性關系考察 精密移取上述對照品儲備液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 ml,分別置于10 ml容量瓶中,用甲醇溶液稀釋至刻度,搖勻,將上述溶液和黃芩苷對照品儲備液各進樣量20 l,按上述色譜條件測定峰面積,以峰面積y為縱坐標,進樣量x(g)為橫坐標進行線性回歸,得回歸方程為y=114 166.67x+462 893.57,r=0.999 8(n=6),

9、表明進樣量在0.402.40 g范圍內有良好的線性關系。 2.5 精密度試驗 取同一供試品溶液(批號為080526)20 l,重復進樣6次,平均峰面積為273 958,rsd為0.52%。 2.6 穩定性試驗 取對照品溶液和供試品溶液(批號為080526)分別于0、3、6、12、24 h分別進行測定,平均峰面積為370 630和269 847,rsd分別為0.65%、0.86%,表明溶液在24 h內穩定性良好。 2.7 重復性試驗 取同一批號樣品(批號為080526)6份,按含量測定方法分別進行測定,計算每片含黃芩苷0.696 mg,rsd為1.2%(n=6),表明本方法重復性良好。 2.8

10、回收率試驗 精密稱取6份已知含量的同一批號樣品(批號為080526,含量為0.696 mg/片,平均片重為0.500 2 g)2.0 g,每兩份為一組,分別精密加入黃芩苷對照品適量配成低、中、高3個濃度,按“2.2.2”項下制備溶液,按樣品測定方法進行測定,計算回收率,結果平均回收率為99.51%,rsd為0.67%(n=9)。見表1。 2.9 樣品測定 精密吸取對照品溶液和供試品溶液各20 l,按上述色譜條件測定,按外標法計算含量。結果3批樣品(批號為080526、080714、081025),黃芩苷的含量分別為0.696 mg/片、0.412 mg/片、0.340 mg/片,rsd分別為0

11、.84%、0.68%、0.62%。 3 討論 3.1 檢測波長的選擇 黃芩苷在280 nm和315 nm處有最大吸收,而在315 nm處吸收強度較小,因此選擇280 nm作為檢測波長。 3.2 溶劑的選擇 本試驗對提取條件進行了選擇,結果發現,用70%乙醇作為提取溶劑時,提取黃芩苷含量偏低;用甲醇作為提取溶劑,樣品中的成分提取較完全,因此選用甲醇作為提取溶劑。 3.3 提取方法的選擇 本試驗分別超聲15、30、45 min及加熱回流30、60、90 min后測定黃芩苷的含量,結果表明,超聲提取含量低于加熱回流提取,而回流60、90 min含量無明顯差別,因此確定加熱回流60 min。 3.4

12、流動相的選擇 通過參考文獻2-7,選擇甲醇-水-磷酸,乙腈-水-磷酸,乙腈-0.05 mol/l磷酸二氫鈉溶液(磷酸調ph至3.0)分別進行試驗,調整流動相比例,確定乙腈-水-磷酸(32680.2)為流動相,可獲得較高柱效、良好的峰形和分離效果。 本文建立的hplc法測定消炎片中黃芩苷的方法處理簡單、回收率好、重現性、穩定性好,能夠準確地控制藥品質量。 參考文獻 1中華人民共和國衛生部.中藥成方制劑(第4冊)s.ws3-b-0809-91,1991:152. 2國家藥典委員會.中國藥典s.一部.北京:化學工業出版社,2005:211-212. 3謝東,路玫.反相高效液相色譜法同時測定雙黃消炎片中黃芩苷和鹽酸小檗堿的含量j.藥物分析雜志,2008,28(5):782-784. 4王曉彤,才謙.高效液相色譜法測定消炎片中黃芩苷的含量j.遼寧中醫藥大學學報,2008,10(6):186-187. 5付艷敏,李伯軍