1、生物藥物分析生物藥物分析 第三章第三章 免疫分析法免疫分析法 一、一、概述概述 二、二、抗原抗原 三、三、抗體與免疫反應(yīng)抗體與免疫反應(yīng) 四、四、免疫分析方法及應(yīng)用免疫分析方法及應(yīng)用 主要內(nèi)容主要內(nèi)容 一、一、概述概述 二、抗原二、抗原 三、抗體與免疫反應(yīng)三、抗體與免疫反應(yīng) 四、免疫分析方法及應(yīng)用四、免疫分析方法及應(yīng)用 主要內(nèi)容主要內(nèi)容 免疫學(xué)是研究免疫系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)與功能免疫系統(tǒng)的結(jié)構(gòu)與功能，了 解其在免疫應(yīng)答反應(yīng)中對(duì)機(jī)體有益的防衛(wèi)功能 和有害的病理?yè)p傷的機(jī)制，研究有效的免疫措 施，實(shí)現(xiàn)以防病，治病為目的的一門(mén)現(xiàn)代醫(yī)學(xué) 學(xué)科。 一、概述一、概述 什么叫免疫分析？什么叫免疫分析？ 基于抗原和抗體的特

2、異性反應(yīng)基于抗原和抗體的特異性反應(yīng)進(jìn)行檢測(cè)的一種技 術(shù)手段?？乖贵w反應(yīng)是指抗原與相應(yīng)的抗體之 間發(fā)生的特異性結(jié)合反應(yīng)。它既可以發(fā)生在體內(nèi)， 也可以發(fā)生在體外。 在體內(nèi)發(fā)生的抗原抗體反應(yīng)為體液免疫應(yīng)答的效 應(yīng)作用。體外的抗原抗體結(jié)合反應(yīng)主要用于抗原 或抗體的檢測(cè)，用于免疫學(xué)診斷。 (1) 在實(shí)驗(yàn)藥物動(dòng)力學(xué)和臨床藥物學(xué)中在實(shí)驗(yàn)藥物動(dòng)力學(xué)和臨床藥物學(xué)中，測(cè)定生物利用度 和藥物代謝動(dòng)力學(xué)參數(shù)等生物藥劑學(xué)中的重要數(shù)據(jù)，以 便了解藥物在體內(nèi)的吸收、分解、代謝和排泄情況； (2) 在藥物的臨床檢測(cè)中在藥物的臨床檢測(cè)中，對(duì)治療指數(shù)小、超過(guò)安全劑量 易發(fā)生嚴(yán)重不良反應(yīng)或最佳治療濃度和毒性反應(yīng)濃度有 交叉的藥物

3、血液濃度進(jìn)行監(jiān)測(cè)； (3) 在藥物生產(chǎn)中在藥物生產(chǎn)中，從發(fā)酵液或細(xì)胞培養(yǎng)液中快速測(cè)定有 效組分的含量，以實(shí)現(xiàn)對(duì)生產(chǎn)過(guò)程的在線(xiàn)監(jiān)測(cè)； (4) 對(duì)藥品中是否存在特定的微量有害雜質(zhì)進(jìn)行評(píng)價(jià)。 在藥物分析中，免疫分析法的在藥物分析中，免疫分析法的 應(yīng)用主要集中在以下幾方面：應(yīng)用主要集中在以下幾方面： 第三章 免疫分析法 免疫分析免疫分析： 利用抗原與抗體的特異性結(jié)合作用，來(lái)選擇性識(shí)別和測(cè)定， 可以作為抗體或抗原的待測(cè)物. 免疫分析方法免疫分析方法 非標(biāo)記免疫分析（抗原抗體結(jié)合理化性質(zhì)發(fā)生變化非標(biāo)記免疫分析（抗原抗體結(jié)合理化性質(zhì)發(fā)生變化） 標(biāo)記免疫分析標(biāo)記免疫分析 標(biāo)記物標(biāo)記物 有無(wú)有無(wú) 非放射免疫分析

4、非放射免疫分析 放射免疫分析（放射污染）放射免疫分析（放射污染） 酶聯(lián)免疫分析酶聯(lián)免疫分析 熒光免疫分析熒光免疫分析 電化學(xué)免疫分析電化學(xué)免疫分析 化學(xué)發(fā)光免疫分析化學(xué)發(fā)光免疫分析 免疫分析免疫分析 第三章 免疫分析法 免疫分析檢測(cè)的發(fā)展免疫分析檢測(cè)的發(fā)展 放射免疫檢測(cè)放射免疫檢測(cè)（興起于（興起于2020世紀(jì)世紀(jì)7070年代年代) ) 酶聯(lián)免疫檢測(cè)酶聯(lián)免疫檢測(cè)（興起于（興起于2020世紀(jì)世紀(jì)8080年代，年代， 各臨床機(jī)構(gòu)普遍使用）；各臨床機(jī)構(gòu)普遍使用）； 以化學(xué)發(fā)光為代表的光生物學(xué)標(biāo)記及免以化學(xué)發(fā)光為代表的光生物學(xué)標(biāo)記及免 疫檢測(cè)技術(shù)疫檢測(cè)技術(shù)（2020世紀(jì)世紀(jì)9090年代開(kāi)始推廣使年代開(kāi)始

5、推廣使 用，產(chǎn)品步入成長(zhǎng)期）三個(gè)階段。用，產(chǎn)品步入成長(zhǎng)期）三個(gè)階段。 特點(diǎn)特點(diǎn) 可逆性可逆性 比例性比例性 反應(yīng)階段性反應(yīng)階段性 特異性特異性 免疫分析法的特點(diǎn)免疫分析法的特點(diǎn) 特異性特異性 特異性特異性：抗原與抗體結(jié)合反應(yīng)的專(zhuān)一性：抗原與抗體結(jié)合反應(yīng)的專(zhuān)一性 分子基礎(chǔ)分子基礎(chǔ): :抗原表位與抗體分子高變區(qū)之間抗原表位與抗體分子高變區(qū)之間 空間構(gòu)型的互補(bǔ)性空間構(gòu)型的互補(bǔ)性 可逆性可逆性 可逆性：可逆性：抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合成復(fù)合物后，在一定條抗原與相應(yīng)抗體結(jié)合成復(fù)合物后，在一定條 件下又可解離為游離抗原與抗體，件下又可解離為游離抗原與抗體，解離后的抗原或抗解離后的抗原或抗 體均能保持原有的結(jié)構(gòu)和

6、活性。體均能保持原有的結(jié)構(gòu)和活性。 影響因素：影響因素： 抗體對(duì)相應(yīng)抗原的親合力親合力越高，結(jié)合越抗體對(duì)相應(yīng)抗原的親合力親合力越高，結(jié)合越 牢固，越不易解離牢固，越不易解離 環(huán)境因素對(duì)復(fù)合物的影響環(huán)境因素對(duì)復(fù)合物的影響pH、離子強(qiáng)度、離子強(qiáng)度 比例性和比例性和 反應(yīng)階段性反應(yīng)階段性 比例性：比例性：抗原與抗體發(fā)生可見(jiàn)反應(yīng)需遵循一定的抗原與抗體發(fā)生可見(jiàn)反應(yīng)需遵循一定的 量比關(guān)系量比關(guān)系 前帶前帶(prezone)：抗體過(guò)量：抗體過(guò)量 后帶后帶(postzone)：抗原過(guò)量：抗原過(guò)量 等價(jià)帶等價(jià)帶(equivalence zone)：抗原抗體比例合適：抗原抗體比例合適 一、概述一、概述 二、二、抗

7、原抗原 三、抗體與免疫反應(yīng)三、抗體與免疫反應(yīng) 四、免疫分析方法及應(yīng)用四、免疫分析方法及應(yīng)用 主要內(nèi)容主要內(nèi)容 第三章 免疫分析法 2.1 2.1 定義定義 抗原（抗原（antigen）：）：指在機(jī)體中引起特異性免疫應(yīng)答 反應(yīng)的物質(zhì)。 免疫原性（immunogenicity）：被注射入動(dòng)物體內(nèi)后 ，使其產(chǎn)生循環(huán)抗體或改變免疫細(xì)胞產(chǎn)生循環(huán)抗體或改變免疫細(xì)胞的反應(yīng)性 抗原特異性（antigenic specificity）：具有能與特異與特異 抗體作用抗體作用的性質(zhì) 全抗原（complete antigen） 半抗原（hapten）：只能與特異抗體作用，但不引起 機(jī)體免疫應(yīng)答的分子 第三章 免疫分析

8、法 2.2 2.2 藥物分子的抗原性藥物分子的抗原性 1、藥物分子的免疫原性、藥物分子的免疫原性 大多數(shù)的藥物分子通常都是半抗原； 一些蛋白類(lèi)藥物、多肽類(lèi)藥物、激素類(lèi)藥物 也是完全抗原。 2、藥物分子的抗原特異性、藥物分子的抗原特異性 藥物分子和蛋白質(zhì)載體結(jié)合后，抗原特異性 可能會(huì)發(fā)生改變。 第三章 免疫分析法 3、藥物分析中，為了得到高效價(jià)的抗血 清，通常會(huì)與蛋白質(zhì)載體合成人工抗原與蛋白質(zhì)載體合成人工抗原進(jìn) 行試驗(yàn)。 常用載體：牛血清白蛋白（BSA）、卵清 白蛋白（OA）、破傷風(fēng)類(lèi)毒素（TT）、 鑰孔蛋白（KLH）等。 第三章 免疫分析法 （1）半抗原和載體結(jié)合的化學(xué)反應(yīng)）半抗原和載體結(jié)合的

9、化學(xué)反應(yīng) 多肽類(lèi)激素多肽類(lèi)激素：活化蛋白質(zhì)或多肽的游離羧基形成肽鍵 ；與蛋白質(zhì)或多肽的游離羧基縮合形成肽鍵 甾體甾體：通過(guò)含游離羧基的甾體衍生物與載體蛋白相連 抗生素抗生素：-內(nèi)酰胺環(huán)在偏堿性條件下可以與蛋白質(zhì)的 自由氨基以酰胺鍵的形式共價(jià)結(jié)合；氨基糖苷類(lèi)抗生 素用碳化二亞胺為連接劑實(shí)現(xiàn)藥物和載體蛋白的連接 第三章 免疫分析法 （2 2）半抗原和載體的選擇原則）半抗原和載體的選擇原則 半抗原半抗原：最好含有芳香結(jié)構(gòu)；應(yīng)考慮抗原 抗體反應(yīng)的微環(huán)境；合理利用分子類(lèi)似物 之間的交叉反應(yīng)。 載體載體：載體對(duì)監(jiān)測(cè)系統(tǒng)的影響；載體效應(yīng) 在免疫過(guò)程中的影響。 第三章 免疫分析法 （3）合成抗原的測(cè)定 定性測(cè)

10、定方法定性測(cè)定方法：光譜分析、熱力學(xué)分析 定量測(cè)定方法定量測(cè)定方法：相對(duì)含量測(cè)定；絕對(duì)含量 測(cè)定。 一、概述一、概述 二、抗原二、抗原 三、三、抗體與免疫反應(yīng)抗體與免疫反應(yīng) 四、免疫分析方法及應(yīng)用四、免疫分析方法及應(yīng)用 主要內(nèi)容主要內(nèi)容 第三章 免疫分析法 免疫分析實(shí)際上是一種特殊的試劑分析， 特點(diǎn)是抗體成為分析試劑抗體成為分析試劑。 第三章 免疫分析法 1、抗體的結(jié)構(gòu)與功能 抗體泛指與待測(cè)分子特異性結(jié)合的蛋泛指與待測(cè)分子特異性結(jié)合的蛋 白質(zhì)分子白質(zhì)分子，包括免疫球蛋白（ immunoglobulin）, 受體（receptor ）和其他結(jié)合蛋白質(zhì)，主要是免疫球 蛋白，常用的是IgG分子 .

11、第三章 免疫分析法 免疫球蛋白的基本結(jié)構(gòu) IgG分子基本結(jié)構(gòu)是由四個(gè)肽鏈組成的，二條 較小的輕鏈和二條較大的重鏈，輕鏈與重鏈?zhǔn)?由二硫鍵連接形成，分為氨基端（N端），羧 基端（C端）。 第三章 免疫分析法 抗體的基本結(jié)構(gòu) 第三章 免疫分析法 IgG分子由四條多肽鏈四條多肽鏈構(gòu)成，以二硫鍵相連以二硫鍵相連，有三個(gè)功能區(qū)。 抗體在Fab區(qū)結(jié)合抗原分子，同時(shí)通過(guò)hi區(qū)的轉(zhuǎn)動(dòng)以適應(yīng)不同距離的 抗原決定簇。 與抗原結(jié)合后，IgG分子構(gòu)象改變，暴露出Fc上的活性位點(diǎn)，從而表 現(xiàn)出固定和激活補(bǔ)體以及粘結(jié)單核細(xì)胞等親細(xì)胞反應(yīng)的功能。 Fab：抗原結(jié)合片段：抗原結(jié)合片段 Fc：可結(jié)晶片段：可結(jié)晶片段 第三章 免

12、疫分析法 第三章 免疫分析法 胃蛋白酶（pepsin）水解片段 裂解部位，鉸鏈區(qū)H鏈間二硫鍵（C端） 裂解片段，F(xiàn)（ab）2，無(wú)Fc片段 與抗原結(jié)合可發(fā)生凝集反應(yīng) 第三章 免疫分析法 木瓜蛋白酶（papain）水解片段 裂解部位，鉸鏈區(qū)H鏈間二硫鍵（N端） 裂解片段，2個(gè)Fab（54KD），一個(gè)Fc（50KD） ,Fab與抗原結(jié)合，不發(fā)生凝集反應(yīng)。 第三章 免疫分析法 2抗體作為分析試劑的評(píng)價(jià)抗體作為分析試劑的評(píng)價(jià) 抗體的特異性抗體的特異性是無(wú)與倫比的，不需或只需 要簡(jiǎn)單的預(yù)處理。有較高的穩(wěn)定性較高的穩(wěn)定性。 這兩點(diǎn)奠定了分析免疫高度靈敏和高度專(zhuān) 一的基礎(chǔ)。 此外，抗體還有一個(gè)獨(dú)特的性質(zhì)：每個(gè)

13、抗 體分子有兩個(gè)抗原的結(jié)合點(diǎn)，即多價(jià)性。 然而抗體缺乏高靈敏試劑應(yīng)具備的分析信 號(hào)反差。 第三章 免疫分析法 3、抗體的制備、抗體的制備 （1）常規(guī)抗血清（多克隆抗體多克隆抗體）：指人 工被動(dòng)免疫后制成的多克隆抗體，是免疫 分析中的重要工具。 免疫原的制備、動(dòng)物免疫、放血、抗血清 分離及抗血清的分析鑒定。 第三章 免疫分析法 免疫原的制備免疫原的制備 免疫原由質(zhì)量好的抗原與佐劑制成。通常 有免疫原水劑、福氏完全佐劑和福氏不完 全佐劑。 水劑由無(wú)菌生理鹽水將抗原制成一定濃度 的免疫原。 弗氏佐劑是由一定量的羊毛脂和石蠟油， 以及一定濃度的分支桿菌混合而成，經(jīng)研 磨達(dá)到油包水的程度。 不完全福氏佐

14、劑即不含有分支桿菌。 第三章 免疫分析法 動(dòng)物免疫動(dòng)物免疫 通常的免疫動(dòng)物為家兔和羊。 免疫的部位多采用腳掌、腹股溝淋巴結(jié)、 大腿肌肉、皮下多點(diǎn)、靜脈。 免疫抗原量通常為110mg或50100mg。 第三章 免疫分析法 試血及效價(jià)測(cè)定試血及效價(jià)測(cè)定 家兔的試血通?？捎啥夓o脈取血，取血 量0.5ml。 不同稀釋度的抗血清和1%的血細(xì)胞懸液按 1:1混合，37保溫2h后觀(guān)測(cè)血細(xì)胞的凝 聚情況，即可測(cè)得免疫血清的效價(jià)。 第三章 免疫分析法 （2）單克隆抗體 單克隆抗體單克隆抗體是建立在經(jīng)細(xì)胞融合而獲得的 雜交瘤細(xì)胞基礎(chǔ)上的。所獲得的抗體具有 均一的特異性。 高度均質(zhì)性的特異性抗體，由一個(gè)識(shí)別單 一

15、抗原表位的B細(xì)胞克隆所分泌。一般來(lái) 自雜交瘤細(xì)胞 細(xì)胞培養(yǎng)法 & 接種動(dòng)物體內(nèi)生產(chǎn)法 第三章 免疫分析法 制備步驟制備步驟 第三章 免疫分析法 2、抗體的純化 利用化學(xué)方法提純或濃縮某一類(lèi)的免疫球 蛋白。 利用免疫吸附劑和親和色譜得到免疫學(xué)上 專(zhuān)一性的抗體。 第三章 免疫分析法 3 3、特異性抗體的篩選與效價(jià)測(cè)定、特異性抗體的篩選與效價(jià)測(cè)定 抗體的效價(jià)抗體的效價(jià)又稱(chēng)滴度，指某一物質(zhì)與一定 容量的另一物質(zhì)產(chǎn)生反應(yīng)所需要的量。 免疫分析中，免疫血清中抗體的效價(jià)指將 血清稀釋?zhuān)瑴y(cè)定與一定的抗原能發(fā)生反應(yīng) 的最大稀釋度，此最大稀釋度即為血清的 效價(jià)。 常用的效價(jià)測(cè)定方法有免疫擴(kuò)散法、間接 血凝法和EL

16、ISA法等。 一、概述一、概述 二、抗原二、抗原 三、抗體與免疫反應(yīng)三、抗體與免疫反應(yīng) 四、四、免疫分析方法及應(yīng)用免疫分析方法及應(yīng)用 主要內(nèi)容主要內(nèi)容 四、免疫分析方法及其應(yīng)用四、免疫分析方法及其應(yīng)用 放射免疫分析法（放射免疫分析法（RIA） 熒光免疫分析法（熒光免疫分析法（FIA） 克隆酶給予體免疫分析法（克隆酶給予體免疫分析法（CEDIA） 酶聯(lián)免疫吸附分析法（酶聯(lián)免疫吸附分析法（ELISA） 放射免疫分析法（放射免疫分析法（radioimmunoassay, RIA） 1968年年Miles和和Hales建立了免疫放射分析方法，利用標(biāo)記抗體作建立了免疫放射分析方法，利用標(biāo)記抗體作 示蹤劑

17、，在反應(yīng)系統(tǒng)中加入過(guò)量的抗體，故其靈敏度比放射免疫示蹤劑，在反應(yīng)系統(tǒng)中加入過(guò)量的抗體，故其靈敏度比放射免疫 分析法明顯提高，而且標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的測(cè)量范圍也明顯擴(kuò)大。分析法明顯提高，而且標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的測(cè)量范圍也明顯擴(kuò)大。 由于特異性單克隆抗體用于免疫放射分析，使本法得到了更快的由于特異性單克隆抗體用于免疫放射分析，使本法得到了更快的 發(fā)展。近年來(lái)，基因工程抗體和抗原應(yīng)用于本技術(shù)，使得免疫放發(fā)展。近年來(lái)，基因工程抗體和抗原應(yīng)用于本技術(shù)，使得免疫放 射分析法更加完善。射分析法更加完善。 放射免疫分析（放射免疫分析（radioimmunoassay，RIA）是體外放射分析技術(shù)）是體外放射分析技術(shù) 中建立最早、應(yīng)

18、用最廣的一類(lèi)中建立最早、應(yīng)用最廣的一類(lèi)競(jìng)爭(zhēng)性體外放射分析技術(shù)競(jìng)爭(zhēng)性體外放射分析技術(shù). 基本原理基本原理 基本原理：放射性標(biāo)記抗原與非標(biāo)記抗原（包括標(biāo)準(zhǔn)抗基本原理：放射性標(biāo)記抗原與非標(biāo)記抗原（包括標(biāo)準(zhǔn)抗 原或待測(cè)抗原）與有限量的特異性抗體發(fā)生可逆性競(jìng)爭(zhēng)原或待測(cè)抗原）與有限量的特異性抗體發(fā)生可逆性競(jìng)爭(zhēng) 結(jié)合結(jié)合 , ,這種競(jìng)爭(zhēng)可用以下反應(yīng)式來(lái)表示：這種競(jìng)爭(zhēng)可用以下反應(yīng)式來(lái)表示： Ag + Ab AgAb + Ag + * Ag *Ag + *AgAb 抗原抗原 抗體抗體 常用的標(biāo)記物：常用的標(biāo)記物：125 I和氚標(biāo)記物和氚標(biāo)記物 放射性活度（貝克，放射性活度（貝克，Bp） 1Bp：每秒一次核衰變：

19、每秒一次核衰變 比活度（比活度（Bp/g）：）： 每單位質(zhì)量所含的放射性比活度每單位質(zhì)量所含的放射性比活度 游離狀態(tài)游離狀態(tài) 結(jié)合狀態(tài)結(jié)合狀態(tài) 具體步驟具體步驟 抗原抗體反應(yīng) 結(jié)合的和游離的 放射性物質(zhì)的分離 放射性活度的測(cè)定 柱色譜法柱色譜法 吸附法吸附法 沉淀法沉淀法 抗抗體發(fā)抗抗體發(fā) 微孔濾膜法微孔濾膜法 固相法固相法 求出結(jié)合率，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)（劑量反應(yīng)曲線(xiàn)）求出結(jié)合率，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)（劑量反應(yīng)曲線(xiàn)） 熒光免疫分析法（熒光免疫分析法（Fluorescence immunoassay, FIA） 免疫熒光技術(shù)是將抗原抗體反應(yīng)的特異性和 敏感性與顯微示蹤的精確性相結(jié)合的一項(xiàng)技術(shù) 以熒光素作為標(biāo)

20、記物，與已知的抗體或抗原結(jié)合 、但不影響其免疫學(xué)特性。然后將熒光素標(biāo)記的 抗體作為標(biāo)準(zhǔn)試劑，用于檢測(cè)和鑒定未知的抗原 熒光免疫分析法（熒光免疫分析法（Fluorescence immunoassay, FIA） 在熒光顯微鏡下，可以直接觀(guān)察呈現(xiàn)特異性熒光 的抗原抗體復(fù)合物及其存在的部位 在實(shí)際工作中，由于熒光素標(biāo)記抗體檢查抗原的 方法較為常用，所以一般通稱(chēng)為熒光抗體技術(shù) 根據(jù)實(shí)驗(yàn)方法分類(lèi) 直接法 間接法 補(bǔ)體法 其他 直接法直接法 將熒光標(biāo)記的特異性 抗體（抗原）直接加 在抗原（抗體）上， 經(jīng)一定的溫度和時(shí)間 染色，水洗-干燥-封 片-鏡檢 操作簡(jiǎn)便、特異性高 、非特異性染色少 敏感性低 抗原

21、 標(biāo)記抗體 熒光 間接法間接法 先用已知未標(biāo)記的 特異抗體（一抗） 與抗原反應(yīng)，再用 標(biāo)記的抗體（二抗 ）與其反應(yīng)，形成 抗原-抗體-抗體復(fù) 合物，水洗-干燥- 封鏡-鏡檢 未知抗原未知抗原 未標(biāo)記未標(biāo)記 抗體抗體 標(biāo)記抗標(biāo)記抗 體體 熒光熒光 補(bǔ)體法 利用補(bǔ)體反應(yīng)，通過(guò) 形成抗原-抗體-補(bǔ)體 復(fù)合物發(fā)射熒光 補(bǔ)體補(bǔ)體 標(biāo)記抗標(biāo)記抗 補(bǔ)體抗補(bǔ)體抗 體體 時(shí)間分辨熒光免疫測(cè)定 利用具有雙功能基團(tuán)結(jié)構(gòu)的螯合 劑，將鑭系元素標(biāo)記到抗體（或抗原 ）上，經(jīng)免疫反應(yīng)形成復(fù)合物，由于 鑭系元素能發(fā)出熒光，故分離除去未 結(jié)合的成分后，利用時(shí)間分辨熒光儀 即可測(cè)定熒光強(qiáng)度，從而推測(cè)待測(cè)物 含量。 基本原理基本原

22、理 它采用抗原與抗體的特異反應(yīng)將它采用抗原與抗體的特異反應(yīng)將待測(cè)物待測(cè)物 與酶連接與酶連接，然后通過(guò)，然后通過(guò)酶與底物產(chǎn)生顏色反應(yīng)酶與底物產(chǎn)生顏色反應(yīng)， 用于定量測(cè)定。用于定量測(cè)定。 測(cè)定的對(duì)象可以是抗體也可以是抗原。測(cè)定的對(duì)象可以是抗體也可以是抗原。 在這種測(cè)定方法中有在這種測(cè)定方法中有3 3種必要的試劑：種必要的試劑： 固相的抗原或抗體（免疫吸附劑固相的抗原或抗體（免疫吸附劑） 酶標(biāo)記的抗原或抗體（標(biāo)記物酶標(biāo)記的抗原或抗體（標(biāo)記物） 酶作用的底物（顯色劑酶作用的底物（顯色劑） 酶聯(lián)免疫吸附分析法（酶聯(lián)免疫吸附分析法（ELISA） 雙抗體夾心法，屬于非競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合測(cè)定非競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合測(cè)定。 它是檢測(cè)抗原最常用ELISA，適用于檢測(cè)分子中具有 至少兩個(gè)抗原決定簇的多價(jià)抗原。 其基本工作原理是：利用連接于固相載體上的抗體 和酶標(biāo)抗體分別與樣品中被檢測(cè)抗原分子上兩個(gè)抗 原決定簇結(jié)合，形成固相抗體固相抗體-抗原抗原-酶標(biāo)抗體免疫復(fù)酶標(biāo)抗體免疫復(fù) 合物合物。復(fù)合物的形成量與待測(cè)抗原的含