第二章 蛋白質與非蛋白含氮 化合物的代謝紊亂,退出,主要內容,一、體液蛋白質及其代謝紊亂,二、氨基酸代謝紊亂,三、嘌呤核苷酸代謝紊亂,四、蛋白質和氨基酸檢測,第一節 體液蛋白質及其代謝紊亂,一、血漿蛋白質的功能和分類,三、血漿蛋白質及其異常,四、其他體液蛋白質,二、血清蛋白質電泳組分的臨床分析,返回章,一、血漿蛋白質的功能和分類,營養作用維持血漿膠體滲透壓作為運載蛋白組成血液pH緩沖系統抑制組織蛋白酶在血漿中起催化作用的酶參與代謝調控作用的蛋白質和肽類激素 參與凝血與纖維蛋白溶解組成體液免疫防御系統（Ig與補體 ）,血漿蛋白質的功能,返回節,血漿蛋白質的分類,最簡單：分為清蛋白和球蛋白較實用：由電泳獲得血漿蛋白質概貌功能分類：比較復雜，但方便研究,返回節,。,醋纖膜電泳或瓊脂糖電泳： 清蛋白 1球蛋白 2球蛋白 球蛋白 球蛋白 分辨率高時： 可有1和2 2中也可有兩條如果采用聚丙烯酰胺凝膠電泳，在適當條件下可以分出30多個區帶。,電泳分類法,返回節,功能分類法,運輸載體類 血漿脂蛋白：包括CM、VLDL、LDL、HDL等 前清蛋白與清蛋白 甲狀腺素結合球蛋白 皮質素結合球蛋白 類固醇激素結合球蛋白 視黃醛結合蛋白 轉鐵蛋白 觸珠蛋白 血色素結合蛋白 銅藍蛋白,返回節,蛋白酶抑制物：包括1-抗胰蛋白酶、1-抗糜蛋 白酶、 2-巨球蛋白等6種以上 血清酶類： 血漿固有酶如LCAT等 組織細胞少量釋放的細胞內酶 細胞破裂而進入血循環的細胞內酶蛋白類激素： 胰島素、胰高血糖素、生長激素等補體蛋白類凝血蛋白類免疫球蛋白類,功能分類法,返回節,影響血漿蛋白質濃度的因素,急性時相反應（APR）： 對炎癥和組織損傷的非特異性反應，血漿蛋白質如1-抗胰蛋白酶、1-酸性糖蛋白、結合珠蛋白、銅藍蛋白、C4、C3、纖維蛋白原和C-反應蛋白等濃度顯著升高或升高，而血漿前清蛋白、清蛋白、轉鐵蛋白濃度則出現相應下降這些血漿蛋白質統稱為急性時相反應蛋白。增加的蛋白質稱為正向APRs下降的蛋白質稱為負向APRs,急性時相反應,返回節,APR的機制是對炎癥的一般反應。損傷部位釋放的細胞因子，包括白介素、腫瘤壞死 因子和、干擾素以及血小板活化因子等，引發 肝細胞中上述蛋白質合成量的改變。正向APPs是機體防御機制的一個部分，尤其是活化 補體、蛋白酶抑制劑對酶活性的控制、觸珠蛋白 對被破壞紅細胞中釋放Hb的保護作用等。作為營養蛋白的負向APRs此時合成減少，可為合成 正向APRs提供更多的氨基酸原料 。,返回節,APR的時相 C-反應蛋白首先升高 12小時內1-酸性糖蛋白也升高 然后1-抗胰蛋白酶、觸珠蛋白、C4和纖 維蛋白原升高 最后是C3和銅藍蛋白升高 通常在25天內這些APRs達到最高值,返回節,APR的臨床應用 幫助監測炎癥發生及過程和觀察治療反應 尤其是那些升高最早和最多的蛋白質,返回節,類固醇激素,疾病時血漿蛋白質的濃度變化被體內類固醇激素的狀態復雜化，包括類固醇激素治療、妊娠和口服避孕藥。,返回節,二、血清蛋白質電泳組分的臨床分析,醋纖膜電泳正常百分含量清蛋白： 57681球蛋白：1.05.72球蛋白：4.911.2 球蛋白： 713球蛋白： 9.818.2,返回節,正常圖譜 腎病綜合征,返回節,肝硬化,肝硬化(-橋) 肝硬化(不典型-橋),多發性骨髓瘤,多發性骨髓瘤IgG型 多發性骨髓瘤IgA型,返回節,其他異常區帶高濃度的甲胎蛋白可表現為清蛋白與1區帶間一條清 晰的新帶。C-反應蛋白異常增高可出現特殊界限的區帶。單核細胞白血病可出現由于溶菌酶異常增多的后區帶 等。,返回節,球蛋白增多與M蛋白,多克隆性增多：區帶呈彌散性升高。 見于反復或慢性感染、自身免疫性疾病、肝細胞 疾病或寄生蟲感染。 單克隆性增多M蛋白 漿細胞病、尤其是惡性漿 細胞病時，異常漿細胞克隆增殖，產生大量單克 隆免疫球蛋白或其輕鏈或重鏈片段，病人血清或 尿液中可出現結構單一的M蛋白，在蛋白電泳時 呈現一個色澤深染的窄區帶。,返回節,各種M蛋白出現頻率,M蛋白較多出現在或區，偶見于區。M蛋白的電泳位置可大致反映出免疫球蛋白的類型， 如IgA位于區帶后部或和區帶之間，IgG位于 r區帶后部 。但確定M蛋白及其類型需采用特異性抗體做免疫固 定電泳或免疫電泳 。,IgG52 、IgA21、IgM12、IgD2、IgE0.01輕鏈（或）11，重鏈（、或）1兩種或多種克隆蛋白，占0.5 。,返回節,三、血漿蛋白質及其異常,1. 前清蛋白2. 清蛋白3. 1-抗胰蛋白酶 4. 1-酸性糖蛋白5. 觸珠蛋白6. 2-巨球蛋白7. 銅藍蛋白8. 轉鐵蛋白9. C-反應蛋白,返回節,生理功能,作為運載蛋白和組織修補材料。RBP是轉運視黃醇的蛋白質。TTR能轉運T4，大約占結合T4的10甲狀腺素結合 球蛋白約占結合甲狀腺激素的75清蛋白結合甲 狀腺激素的其余部分。在血漿中RBP與TTR以1:1比例結合成復合物可避 免小分子RBP從腎小球濾過，減少RBP釋放到非靶 細胞中。,返回節,前清蛋白（PA）,在電泳中顯示在清蛋白前方故而得名主要包括： 視黃醇結合蛋白（RBP） 甲狀腺素轉運蛋白（TTR）,臨床意義,作為營養不良的早期指標。作為肝功能不全的指標，下降早。是負性急性時相反應蛋白：在急性炎癥、惡性 腫瘤、創傷等任何急需合成蛋白質的情況下， 血清PA均迅速下降。,返回節,清蛋白,不含糖，高度溶于水，每分子可以帶有200個 以上負電荷。 ALB是血漿中含量最多的蛋白質，占血漿總蛋 白的5768。也是大部分細胞外液的主要蛋白成分，全身 大約60的ALB存在于細胞外液。,返回節,代謝,肝細胞合成，每天1114.7g肝臟合成儲備能力很大，在腎病綜合征時 合成速率可增高到正常的300以上半壽期約1519天遺傳性變異達80多種,臨床意義,低ALB血癥見于下述許多疾病情況： （1）清蛋白合成不足：急性或慢性肝臟疾病； 蛋白質營養不良或吸收不良 （2）清蛋白丟失： 由尿中丟失；胃腸道丟 失；皮膚丟失（3）清蛋白分解代謝增加 （4）清蛋白的分布異常 （5）無清蛋白血癥,返回節,生理功能,（1）保持血漿膠體滲透壓（2）重要的營養蛋白（3）血漿中主要的載體蛋白（4）具有緩沖酸堿物質的能力,1-抗胰蛋白酶(1-AT或AAT),蛋白酶和抗蛋白酶蛋白酶可清除病原微生物、壞死組織和衰老 的紅細胞蛋白酶含量過高或活性過強可使正常 組織和細胞受到破壞。抗蛋白酶系統：機體為對抗這些蛋白酶的異 常作用而產生抗蛋白酶系統下降可導致某些 疾病。,返回節,AAT的多種遺傳表型 已知的至少有75種，表達的蛋白質有M型和Z型、S型，PiMM型最多，占人群95%以上。 類型：PiMM、PiMS、PiMZ、PiSS、PiSZ、PiZZ 活力：100%、80、60、60、35、15,返回節,生理功能,占血清中抑制蛋白酶活力的90左右多形核白細胞起吞噬作用時釋放溶酶體蛋白水解酶，AAT是這些酶的生理抑制物。,臨床意義,（1）AAT缺陷與肺氣腫：ZZ型、SS型甚至MS表型。 當吸入塵埃和細菌，肺部多形核白細胞吞噬 活躍，溶酶體彈性蛋白酶釋放，作用于肺泡 壁的彈性纖維。低血漿AAT還可發現于胎兒呼 吸窘迫綜合征。（2）AAT缺陷與肝損害：ZZ表型，ZZ蛋白聚集在肝 細胞，可致肝硬化。ZZ表型的新生兒中10 20；ZZ表型的某些成人。（3）急性時相反應時AAT增加。,返回節,1-酸性糖蛋白 (1-AG或AAG) 生理功能,主要的急性時相反應蛋白，在急性炎癥時 增高，與免疫防御功能有關。AAG可以結合利多卡因和心得安等，在急 性心肌梗死時，AAG作為一種急性時相反 應蛋白升高后，使藥物結合狀態增加而游 離狀態減少，因而需要增加藥物劑量。,返回節,臨床意義,（1）主要作為急性時相反應的指標，在風濕病、 惡性腫瘤及心肌梗死等炎癥或組織壞死時一 般增加34倍。（2）隨糖皮質激素而增加，包括內源性的庫欣 綜合征和外源性強的松、地塞米松等藥物 治療時；雌激素使其降低。（3）在營養不良、嚴重肝損害、腎病綜合征以 及胃腸道疾病致蛋白嚴重丟失等情況下AAG 降低。,返回節,觸珠蛋白,22四聚體 鏈有1及2兩種，而1又有1F及1s 兩種遺傳變異體,返回節,觸珠蛋白的幾種遺傳表型,生理意義,Hp的主要功能是能與紅細胞中釋放出的游 離血紅蛋白結合，每分子Hp可結合兩分子 Hb。Hp可防止Hb從腎丟失而為機體有效地 保留鐵，并能避免Hb對腎臟的損傷。Hp不能重新被利用，溶血后其含量急劇降 低，血漿Hp濃度多在一周內由再生而恢復。,返回節,臨床意義,（1）溶血性疾病如溶血性貧血、輸血反應、瘧疾時 Hp含量明顯下降。連續觀察溶血性疾病合適的 組合試驗：包括血漿Hp、乳酸脫氫酶和游離血 紅蛋白。血管外溶血不會使Hp發生變化。（2）燒傷和腎病綜合征引起大量清蛋白丟失，血Hp 常明顯增加，此時屬于急性時相反應時的Hp增 加 。（3）雌激素使Hp減少，多數急慢性肝病包括急性病 毒性肝炎和伴黃疸的肝硬化患者，由于雌激素 分解代謝減少，其血清Hp降低 。,返回節,2巨球蛋白 (2-M 或AMG),是血漿中分子量最大的蛋白質生理功能 蛋白酶抑制劑，能與蛋白水解酶如纖維蛋白溶酶、胃蛋白酶、糜蛋白酶、胰蛋白酶及組織蛋白酶D結合而抑制這些酶的活性。,返回節,臨床意義,低清蛋白血癥，尤其是腎病綜合征時， 2-MG含量可顯著增高，可能系一種代 償機制以保持血漿膠體滲透壓。2-MG不屬于急性時相反應蛋白。,返回節,銅藍蛋白,含銅的2球蛋白，每分子含68個銅原子， 由于含銅而呈藍色。95%的血清銅存在于Cp中，另5%呈可擴散狀 態。血循環中Cp為銅沒有毒性的代謝庫。,返回節,生理功能,與氧化還原反應有關，既能起氧化作用又能 起抗氧化作用。具有鐵氧化酶作用，能將Fe2+氧化為Fe3+， Fe3+再結合到轉鐵蛋白上，使鐵不具毒性。還有抑制膜脂質氧化的作用。,返回節,臨床意義,（1）協助診斷Wilson病 血漿Cp減少，血漿游離銅增加，銅沉積在肝可引起肝硬化，沉積在腦基底節的豆狀核則導致豆狀核變性。 小部分患者Cp水平正常，可能是銅摻入Cp時所需的攜帶蛋白減少。80%肝受損者中血清Cp低于100mg/L，而20%肝受損者Cp 不低于300mg/L。 患者其他指標變化：血清總銅降低、游離銅增加和尿銅排出增加。 （2）為弱和遲發反應的APP；在營養不良、嚴重肝病及腎病綜合征時往往下降。,返回節,轉鐵蛋白,生理功能,從小腸進入血液的Fe2+在血液中被銅蘭蛋 白氧化為Fe3+，再被TRF的載體蛋白結合。每種細胞表面都有TRF受體，此受體對 TRF-Fe3+復合物比對TRF的載體蛋白親和 力高得多，與受體結合后，TRF-Fe3+被攝 入細胞。TRF-Fe3+復合物可將大部分Fe3+運輸到骨 髓，用于Hb合成，小部分則運輸到各組 織細胞，用于形成鐵蛋白，以及合成肌 紅蛋白、細胞色素等。,返回節,臨床意義,（1）用于貧血的鑒別診斷在缺鐵性的低血色素貧血中，TRF代償性合成增加，但血漿鐵含量低，結合鐵的TRF少，所以鐵飽和度很低（正常值在30% 38%）。再生障礙性貧血時，血漿中TRF正常或低下，由于紅細胞對鐵的利用障礙，使鐵飽和度增高。在鐵負荷過量時，TRF水平正常，而飽和度可超過50%，甚至達90%。,返回節,（2）負性急性時相反應蛋白 炎癥、惡性病變時常隨著清蛋白、清蛋白 同時下降。（3）營養狀態指標 在營養不良及慢性肝臟疾病時下降與清蛋 白相比，體內轉鐵蛋白總量較少、生物半壽 期較短，故能及時地反映臟器蛋白的急劇變 化。在高蛋白膳食治療時，血漿中濃度上升 快，是判斷治療效果的良好指標。,返回節,總鐵結合力（TIBC）鐵飽和度,所有TRF上結合的鐵量為TIBC。從TIBC可間接計算 TRF含量及TRF的鐵飽和度： TRF（mg/L）=TIBC(g/L)0.70 鐵飽和度（）血清鐵/TIBC。 由于假設所有血漿鐵都結合到TRF上，所以由上式估計的TRF濃度比真實值高出1620。 而當TRF結合鐵到半飽和時，部分鐵會結合到其他蛋白如清蛋白上。目前TRF的免疫比濁測定法已在許多實驗室使用，因而已在很大程度上代替了TIBC的測定。 TIBC(g/L) = TRF（mg/L）1.43,返回節,生理功能,CRP不僅結合多種細胞、真菌及原蟲等體內的多糖物質，在鈣離子存在下，還可以結合卵磷脂和核酸。CRP可以引發對侵入細胞的免疫調理作用和吞噬作用，結合后的復合體具有對補體系統的激活作用，表現炎癥反應。,返回節,C-反應蛋白,因在急性炎癥病人血清中出現的可以結合肺炎球菌細胞壁C-多糖的蛋白質而命名。 CRP由肝細胞所合成，電泳分布在慢區帶，有時可以延伸到區帶。,臨床意義,CRP是第一個被認識的急性時相反應蛋白，是極 靈敏的指標，血漿中CRP濃度在急性心肌梗死、 創傷、感染、炎癥、外科手術、腫癌浸潤時迅速 顯著地增高，可達正常水平的2000倍。CRP是非特異性指標，主要用于結合臨床病史監測 疾病：如評估炎癥性疾病的活動度；監測系統性紅 斑狼瘡、白血病和外科手術后并發的感染；監測腎 移植后的排斥反應等。,返回節,四、其他體液蛋白質,包括尿液、腦脊液、胸腹水、羊水、唾液和糞便中的蛋白質 。,返回節,尿液蛋白質,正常尿總蛋白僅20150mg, 其中ALB約占30，總量通常小于10mg， 其次是由腎小管分泌的Tamm-Horsfall蛋白約占21。ALB增多是腎小球基底膜通透性增加的信號。大分子蛋白質如IgG、IgM、AMG增多是基底膜選擇性或 篩網功能喪失的表現。小分子蛋白質如2-微球蛋白、1-微球蛋白 RBP增多是腎小管重吸收功能下降的表現。溢出性蛋白尿包括血紅蛋白、肌紅蛋白和Ig輕鏈等。,返回節,（二）腦脊液蛋白質,腦脊液總蛋白濃度為0.150.45g/L。正常成分：分子量較小的蛋白質如ALB、TRF 和TTR，未見到分子量大于IgG的蛋白質。,返回節,腦脊液總蛋白增多 （1）血腦屏障的通透性增加，如腦炎、脊髓灰質炎、 細菌性腦膜炎、隱球菌性腦膜炎、病毒性腦膜炎等。（2）引起腦脊液循環梗阻的疾病如脊髓腫瘤。（3）腦出血。（4）腦軟化、腦退行性疾病、神經性病變等。腦脊髓膜合成免疫球蛋白增多見于神經性梅毒、多發性硬化等。,返回節,CSF普通蛋白電泳特征 PA增高：腦萎縮、腦積水及中樞神經變性病。ALB增加：腦血管病變、椎管阻塞。、球蛋白增加：腦膜炎、腦腫瘤，球蛋白增加 可見于動脈硬化、腦血栓等疾病。球蛋白明顯增高見于腦腫瘤。多發性硬化癥為中樞神經系統脫髓鞘疾病，區可見 稀疏的IgG寡克隆帶。,返回節,第二節 氨基酸代謝紊亂,一、氨基酸代謝紊亂的種類,二、苯丙酮酸尿癥,三、酪氨酸血癥,四、含硫氨基酸代謝紊亂,返回章,由參與氨基酸代謝的酶或其他蛋白因子缺乏引起 ，為相關基因突變所致，至今已發現70余種。,一、氨基酸代謝紊亂的種類,遺傳性氨基酸代謝紊亂,返回節,氨基酸血癥 氨基酸尿癥,氨基酸血癥：當酶缺陷出現在代謝途徑的起點時，其催化的氨基酸將在血循環中增加。氨基酸尿癥：血中增加的氨基酸從尿中排出。中間代謝產物血尿濃度增加：當酶的缺陷出現在 代謝途徑的中間時，則此酶催化反應前的中間代 謝產物便在體內堆積。另外代謝途徑的產物（血尿中）增加：由于正常 降解途徑受阻，氨基酸可通過另外的途徑代謝。,返回節,遺傳性氨基酸代謝紊亂的缺陷酶 及其血中增高的成分,疾病名稱 缺乏的酶 血漿中增高的成分苯丙酮酸尿癥 苯丙氨酸羥化酶 苯丙氨酸、苯丙酮酸I型酪氨酸血癥 延胡索酸乙酰乙酸酶 酪氨酸、甲硫氨酸尿黑酸尿癥 尿黑酸氧化酶 尿黑酸（輕度）同型胱氨酸尿癥 胱硫醚合成酶 甲硫氨酸、同型胱氨酸組氨酸血癥 組氨酸酶 組氨酸、丙氨酸甘氨酸血癥 甘氨酸氧化酶 甘氨酸支鏈酮酸尿癥 支鏈酮酸氧化酶 纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸等胱硫醚尿癥 胱硫醚酶 胱硫醚型高脯氨酸血癥 脯氨酸氧化酶 脯氨酸精氨酸琥珀酸尿癥 精氨酸琥珀酸酶 谷氨酰胺、脯氨酸、甘氨酸等精氨酸血癥 精氨酸酶 精氨酸,二、苯丙酮酸尿癥,主要由苯丙氨酸羥化酶缺乏引起的常染色體隱性遺傳病。 少數PKU二氫蝶呤還原酶缺陷引起。,返回節,三、酪氨酸血癥,延胡索酰乙酰乙酸水解酶活性低對-羥苯丙酮酸氧化酶活性也下降酪氨酸在血尿中增加，甲硫氨酸血濃度也增加。 延胡索酰乙酰乙酸可還原生成琥珀酰乙酰乙酸，后者如再脫羧則成為琥珀酰丙酮。琥珀酰丙酮可損害肝與腎的功能。,酪氨酸分解代謝,I型酪氨酸血癥,返回節,四、含硫氨基酸代謝紊亂,含硫氨基酸包括甲硫氨酸、半胱氨酸和胱氨酸，胱氨酸是兩個半胱氨酸脫氫后以二硫鍵結合形成。同型半胱氨酸比半胱氨酸多一個次甲基（-CH2），是甲硫氨酸代謝的中間產物。,返回節,同型半胱氨酸,同型半胱氨酸不穩定，易氧化成同型胱 氨酸或同型半胱氨酸-半胱氨酸二硫化合 物，僅少量以還原型同型半胱氨酸存在于 血漿。這些含硫化合物在血漿中大部分與蛋白質 結合。我們通常所指的同型半胱氨酸包括 所有這些結合和游離的含同型半胱氨酸的 化合物。,返回節,第三節 嘌呤核苷酸代謝紊亂,一、嘌呤核苷酸代謝,二、高尿酸血癥,三、高尿酸血癥與痛風,返回章,嘌呤核苷酸的合成：從頭合成途徑、補救途徑 嘌呤核苷酸的分解：終產物是尿酸,一、嘌呤核苷酸代謝,返回節,嘌呤核苷酸合成代謝,二、高尿酸血癥,由嘌呤代謝紊亂或尿酸排泄障礙引起。嘌呤的合成、吸收和分解代謝發生紊亂，將出現尿酸生成過多而導致高尿酸血癥。人和猿類體內缺乏尿酸酶，不能將尿酸分解成尿囊素，進一步再分解成NH3、CO2和H2O，人體內尿酸通過腎臟排出體外。若尿酸排泄出現障礙，可導致高尿酸血。,返回節,（一）尿酸排泄障礙,當腎小球濾過率下降，或近端腎小管對尿酸的重吸收增加或（和）分泌功能減退時，便導致高尿酸血癥。 原發性高尿酸血癥，機制不明的多基因性遺傳缺陷、慢性腎疾患等引起。,返回節,（二）尿酸生成過多,1. 嘌呤合成代謝紊亂體內80%尿酸來源于嘌呤的生物合成， 嘌呤合成代謝紊亂可致高尿酸血癥。其中大多數屬多基因遺傳缺陷，機制 不明。由酶缺陷引起者僅占少數 。,返回節,酶缺陷 （1）次黃嘌呤-鳥嘌呤磷酸核糖轉移酶（HGPRT）缺乏 。； （2）PRPP合成酶亢進。 （3）葡萄糖-6-磷酸酶（G6pase）缺乏，引起葡萄糖-6-磷酸增多，并沿磷酸戊糖代謝途徑轉化成較多的PRPP，使嘌呤合成增多。 （4）腺嘌呤磷酸核糖轉移酶（APRT）缺乏，腺嘌呤不能經補救途徑合成腺苷酸而出現堆積，腺嘌呤的代謝產物2，8-二羥腺嘌呤由尿排出增加，可產生腎結石。,返回節,2. 嘌呤吸收增多 體內20%尿酸來源于食物中的嘌呤， 攝入富含嘌呤食物過多可誘發痛風發 作，但不是發生高尿酸血癥的原因。3. 嘌呤分解增加 在骨髓增殖性疾病等，有旺盛的細胞 合成和分解，從而出現核酸分解亢進， 嘌呤和尿酸生成增多。,返回節,高尿酸血癥的原因也可歸納為原發性和繼發性兩方面，原發性包括原發性腎臟排泄尿酸障礙和原發性尿酸產生過多，繼發性包括各種腎臟疾病以及引起嘌呤分解過多的疾病。,返回節,三、高尿酸血癥與痛風,痛風（gout）的概念 由于遺傳性和（或）獲得性的尿酸排泄減 少和（或）嘌呤代謝障礙，導致高尿酸血癥， 當出現尿酸鹽結晶形成和沉積，并引起特征 性急性關節炎、痛風石、間質性腎炎、尿酸 性尿路結石時，即為痛風，嚴重者有關節畸 形及功能障礙。痛風是一組疾病，高尿酸血癥中1020 發生痛風。,返回節,尿酸鈉結晶形成 血漿中尿酸鹽以單鈉尿酸鹽形式存在，其溶解度很低。當血液pH為7.4時，尿酸鈉的溶解度約為0.42mmol/L，0.42mmol/L 時已成過飽和狀態。當濃度0.48mmol/L 持久不降，如遇有下列情況即可使尿酸鈉呈微小結晶析出： 血漿清蛋白及12球蛋白減少。 局部pH降低。 局部溫度降低。,返回節,尿酸鈉沉淀與炎癥反應結晶易沉淀在血管較少、粘多糖含量較豐富的結締組織、軟骨和關節腔內。運動、飲酒、應激、局部損傷等都可誘發這些部位急性 炎癥發作。如運動時這些組織容易發生缺氧，于是出現糖酵解加速和乳酸產生增多，引起pH降低，導致局部尿酸鈉結晶析出。微小的尿酸鈉結晶表面可吸附IgG，并在補體參與下誘發多型核白細胞的吞噬作用。結晶被吞噬后可促使白細胞膜破裂，釋放出各種炎癥介質，如趨化因子，溶酶體和胞漿內的各種酶，導致組織發生炎癥反應。,返回節,第四節 蛋白質和氨基酸檢測,一、 體液總蛋白測定,二、 體液清蛋白測定,三、 蛋白質電泳技術,四、 蛋白質免疫化學法測定,五、 氨基酸檢測,返回章,一、血清總蛋白測定,血清總蛋白包括數量眾多的各種蛋白質，定量測定時作了如下假定：（1）所有血漿蛋白是單純的多肽鏈，糖脂類和金屬有機物等均不計在內，其含氮量平均為16；（2）幾百種血漿蛋白理化性質雖不同，但與化學試劑的反應性（如呈色、沉淀）一致。,返回節,（一）凱氏定氮法,1883年建立，是經典的蛋白質測定方法。根據蛋白質平均含氮量16計算蛋白濃度。該法結果準確性好，精密度高，靈敏度高，是公認的參考方法，目前用于標準蛋白質的定值和校正其他方法等，并可適用于一切形態（固體和液體）樣品。操作復雜、費時，不適合血清總蛋白等常規測定，而且血清等樣品中各種蛋白質含氮量有少許差異，尤其在疾病狀態差異可能更大。,返回節,（二）雙縮脲法,蛋白質中的肽鍵（-CONH-）在堿性溶液中能 與Cu2+作用產生紫紅色絡合物，因至少含 2個-CONH-基團才能與Cu2+絡合，故三肽以 上才能反應，在體液中小分子肽含量極低。該法對各種蛋白質呈色基本相同，特異性和 準確度好，精密度好；顯色穩定性好，試劑 單一，方法簡便；靈敏度雖不高，但對血清 總蛋白定量較為適用。對蛋白質含量很低的 其他體液如腦脊液、胸腹水和尿液等不合適。,返回節,（三）酚試劑法,蛋白質中酪氨酸和色氨酸能還原磷鎢酸磷鉬酸試劑起藍色反應。Lowry酚試劑改良法：先用堿性銅溶液與蛋白質反應，再加入酚試劑，則銅-肽鍵絡合物中的酪氨酸和色氨酸使磷鎢酸和磷鉬酸還原為鎢藍和鉬藍，使呈色靈敏度達到雙縮脲法的100倍左右。 本法靈敏度高。各種蛋白質中酪氨酸和色氨酸的含量不同，如清蛋白含色氨酸0.2%，而球蛋白含色氨酸2%3%。因此，本法測定純單一蛋白質較合適。本法易受還原性化合物的干擾，如帶-SH的化合物、糖類、酚類等 。,返回節,（四）紫外分光光度法,芳香族氨基酸在280nm處有吸收峰。方法的準確性受該種氨基酸的含量影響甚大。尿酸和膽紅素在280nm附近有干擾，所以不適 合血清等。常用于較純的酶、免疫球蛋白等蛋 白質測定。可保留蛋白質制劑的生物活性。核酸最大吸收峰為260nm，在280nm也有較強 的光吸收，因而測定蛋白質可采用兩個波長的 吸光度予以校正，即蛋白質濃度（g/L） 1.45A2800.74A260nm。,返回節,（五）染料結合法,在酸性環境蛋白質分子可解離帶上正電荷-NH3+，與染料陰離子產生顏色反應。常用的染料有氨基黑、麗春紅、考馬斯亮藍、鄰苯三酚紅鉬等。前兩種常作為血清蛋白醋酸纖維素薄膜電泳或瓊脂糖凝膠電泳的染料。,返回節,考馬斯亮藍：常用于需更高呈色靈敏度的 蛋白電泳中，也可用于測定尿液、腦脊液等 的蛋白質，優點是簡便、快速、靈敏，缺點 是不同蛋白質與染料的結合力不一致，且試 劑對比色杯有吸附作用。不實用。鄰苯三酚紅鉬法,返回節,（六）比濁法,基于某些酸如三氯醋酸、磺基水楊酸等能與蛋白 質結合而產生微細沉淀，測定懸浮液的濁度大小 與蛋白質的濃度成正比。該法優點是操作簡便、靈敏度高。缺點是影響濁度大小的因素較多，包括加入試劑 的手法、混勻技術、反應溫度等，故精密度差； 且各種蛋白質形成的濁度亦有較大的差別。一般 用于測定尿液、腦脊液等蛋白質濃度較低的樣品， 其標準品推薦使用含正常白/球蛋白比值的血清標 準品作適當稀釋。,返回節,二、血清清蛋白測定,清蛋白是血清內含量最多的一種蛋白質， 以前用硫酸銨鹽析法沉淀球蛋白，再用 總蛋白測定方法測定上清液中的清蛋白。 目前測定清蛋白的方法有電泳法、免疫 法和染料結合法。,返回節,溴甲酚綠法（BCG） 溴甲酚紫法（BCP）,在酸性環境清蛋白具有與陰離子染料BCG和BCP 結合的特性，而球蛋白基本不結合這些染料。 BCG 法和BCP法靈敏度高、操作簡便、重復性好， 能自動化。BCG法最常用，雖然和球蛋白與BCG也能起 慢反應，但縮短反應時間即能去除此非特異性 反應，自動化分析儀的普遍應用使比色能在反 應1030秒后立即進行，因而使該法變得很實用。 BCP法無球蛋白的非特異性干擾，但與牛、豬 等動物血清清蛋白的反應性比與人的反應性低， 質控血清往往是動物血清，故其應用受限。,返回節,三、蛋白質電泳技術,返回節,電泳技術廣泛應用于臨床實驗室檢測血清、尿液和腦脊液等體液蛋白質，醋酸纖維素薄膜（CAM）和瓊脂糖凝膠等是采用最廣的凝膠介質，其次還有毛細管電泳和一些專門的電泳技術，如蛋白質印跡、免疫固定和雙向電泳等。,（一）血清蛋白電泳,SPE通常采用CAM或瓊脂糖凝膠，在pH8.6的緩沖液中，血清中各種蛋白質都電離成負離子，在電場中向正極移動；因各種蛋白質pI不同，在相同pH下帶電荷量有差異，同時各蛋白質的分子大小與分子形狀也不相同，因此在同一電場中泳動速度不同；帶電荷多，分子量小者，泳動較快，反之則較慢。,返回節,1.尿蛋白普通電泳,采用CAM或瓊脂糖凝膠，常需濃縮尿液和采用高靈敏度的染色方法如金染或銀染。一些自動電泳儀采用反復多次在瓊脂糖凝膠上加樣，也可不需濃縮尿液，電泳后以考馬斯亮藍染色，分離結果可呈現ALB、1、2、1、2和球蛋白六個區帶甚至七個區帶（兩個2區帶）；這種電泳能得到尿蛋白的全貌，對許多尿蛋白能做出初步的分類判斷，但因為