益腎活血法治療骨質(zhì)疏松性骨折的臨床觀察及作用機(jī)制研究,河南省正骨研究院河南省洛陽(yáng)正骨醫(yī)院河南省骨科醫(yī)院孔西建,主要內(nèi)容,研 究 目 標(biāo),一.,研 究 內(nèi) 容,實(shí) 施 方 案,關(guān) 鍵 技 術(shù),實(shí) 施 計(jì) 劃,分階段考核指標(biāo),經(jīng) 費(fèi) 預(yù) 算,二.,三.,四.,五.,六.,七.,一. 研究目標(biāo),一. 研究目標(biāo),以益腎活血法為綱，分方分型辨證治療骨質(zhì)疏松癥、骨質(zhì)疏松性骨折。通過(guò)臨床觀察、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)研究該治法的臨床有效性及作用機(jī)制。,二. 研究?jī)?nèi)容,二.研究?jī)?nèi)容,根據(jù)中醫(yī)辨證分型理論，參照中藥新藥臨床 研究 指導(dǎo)原則，結(jié)合臨床癥狀，以益腎活血法為綱， 針對(duì)腎陽(yáng)虛血瘀證、肝腎陰虛血瘀證、脾腎氣虛血 瘀證，擬定骨松強(qiáng)骨方、骨松健骨方、骨松益骨方 進(jìn)行辨證治療。通過(guò)客觀的臨床觀察證實(shí)骨松強(qiáng)骨方、骨松健骨方 、骨松益骨方治療骨質(zhì)疏松癥、防治脆性 骨折的 有效性和安全性；通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)客觀闡述骨松強(qiáng)骨、骨松 健骨方、骨松益骨方的作用機(jī)制。,三. 實(shí)施方案,實(shí)施方案,1.臨床試驗(yàn),2.動(dòng)物實(shí)驗(yàn),3.細(xì)胞實(shí)驗(yàn),納入腎陽(yáng)虛血瘀證、肝腎陰虛血瘀證、脾腎氣虛血瘀證試驗(yàn)病例240例,服藥觀察48周，隨訪1年,試驗(yàn)組150例（碳酸鈣D3片）腎陽(yáng)虛血瘀證50例，服用骨松強(qiáng)骨方肝腎陰虛血瘀證50例，服用骨松健骨方脾腎氣虛血瘀證50例，服用骨松益骨方,觀察治療后兩組病例疼痛評(píng)分、中醫(yī)臨床癥狀評(píng)分、平衡能力評(píng)分 、 骨代謝生化指標(biāo)PINP、BALP、-CTX、骨密度、脆性骨折發(fā)生率及安全性指標(biāo)的變化情況。,對(duì)照組90例，腎陽(yáng)虛血瘀證30例，肝腎陰虛血瘀證30例，均服用阿侖膦酸鈉 脾腎氣虛血瘀證30例， 碳酸鈣D3片,1. 臨床試驗(yàn),隨機(jī)平行對(duì)照研究,sham組灌服生理鹽水,去卵巢+假手術(shù) SD大鼠,OVX組灌服生理鹽水,E2組灌服雌二醇,低、中、高GSQGF、 GSJGF 、GSYGF組,灌服不同劑量GSQGF、 GSJGF 、 GSYGF,檢測(cè)各組血尿骨代謝生化指標(biāo) DEXA檢測(cè)大鼠股骨的骨密度和骨礦含量 三點(diǎn)彎曲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)大鼠股骨的生物力學(xué)性能 Micro CT檢測(cè)股骨遠(yuǎn)端的骨小梁數(shù)目及形態(tài)等變化情況,給 藥 3 月,2. 動(dòng)物實(shí)驗(yàn),體外培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,加入低、中、高劑量骨松強(qiáng)骨方、骨松健骨方、骨松益骨方水煎液+PBS,檢測(cè)細(xì)胞的增殖活性檢測(cè)ALP活性并進(jìn)行克隆染色 茜素紅和油紅O分別對(duì)形成的鈣化結(jié)節(jié)和脂肪滴進(jìn)行染色 實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)成骨基因Runx-2和Osterix的mRNA表達(dá)情況,評(píng)價(jià)骨松強(qiáng)骨方、骨松健骨方、骨松益骨方對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨、成脂分化能力的影響,3. 細(xì)胞實(shí)驗(yàn),MSCs分化,四. 關(guān)鍵技術(shù),四. 關(guān)鍵技術(shù),臨床試驗(yàn)： 骨代謝生化指標(biāo)PINP、BALP、-CTX的檢測(cè)； 骨密度的檢測(cè)； 脆性骨折的觀察。,四. 關(guān)鍵技術(shù),動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：檢測(cè)各組血尿骨代謝生化指標(biāo)； DEXA檢測(cè)大鼠股骨的骨密度和骨礦含量； 三點(diǎn)彎曲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)大鼠股骨的生物力學(xué)性能； Micro CT檢測(cè)股骨遠(yuǎn)端的骨小梁數(shù)目及形態(tài)等變化情況。,細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：體外培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞； 檢測(cè)細(xì)胞的增殖活性；檢測(cè)ALP活性并進(jìn)行克隆染色； 茜素紅和油紅O分別對(duì)形成的鈣化結(jié)節(jié)和脂肪滴進(jìn)行染色； 實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)成骨基因Runx-2和Osterix的mRNA表達(dá)情況。,四. 關(guān)鍵技術(shù),四. 關(guān)鍵技術(shù),擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題：通過(guò)客觀嚴(yán)謹(jǐn)?shù)呐R床觀察證實(shí)益腎活血法治療骨質(zhì)疏松癥、防治脆性骨折有效性、安全性，通過(guò)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)闡述益腎活血法治療骨質(zhì)疏松癥的客觀理論基礎(chǔ)。,五.實(shí)施計(jì)劃,五.實(shí)施計(jì)劃,2016.6-2016.12 制定研究方案； 購(gòu)置、制備試驗(yàn)藥物、實(shí)驗(yàn)試劑等,2017.1-2017.6 納入臨床觀察病例240例，進(jìn)行臨床觀察 購(gòu)置飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物；,2017.7-2017.12 240例病例臨床觀察，數(shù)據(jù)記錄； 實(shí)施并完成動(dòng)物實(shí)驗(yàn),五.實(shí)施計(jì)劃,2018.1-2018.6 240例病例臨床觀察，數(shù)據(jù)記錄； 實(shí)施并完成細(xì)胞實(shí)驗(yàn)；,2018.7-2018.12 240例病例臨床觀察、隨訪，數(shù)據(jù)記錄； 分析統(tǒng)計(jì)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)； 撰寫(xiě)、發(fā)表論文 ；,2019.1-2019.6 臨床觀察數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析； 撰寫(xiě)、發(fā)表論文； 結(jié)題。,六.分階段考核指標(biāo),六.分階段考核指標(biāo),2016.12制定詳細(xì)完善的研究方案；完成臨床觀察CRF表、受試者知情同意書(shū)等文件制作；完成骨松強(qiáng)骨丸、骨松健骨丸、骨松益骨丸的制備；完成臨床觀察檢驗(yàn)試劑購(gòu)置。,六.分階段考核指標(biāo),2017.6完成納入臨床觀察病例240例，進(jìn)行臨床觀察、記錄相關(guān)數(shù)據(jù)；完成SD大鼠、飼料及相關(guān)用品的購(gòu)置，飼養(yǎng)大鼠做好動(dòng)物實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備工作。,六.分階段考核指標(biāo),2017.12完成動(dòng)物實(shí)驗(yàn)；發(fā)表學(xué)術(shù)論文1篇；申報(bào)專利1項(xiàng)。,六.分階段考核指標(biāo),2018.6完成細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。2018.12發(fā)表學(xué)術(shù)論文2篇。申報(bào)專利1項(xiàng)。申報(bào)科研成果1項(xiàng)。,六.分階段考核指標(biāo),2019.6完成臨床觀察，進(jìn)行數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析；發(fā)表論文1篇；結(jié)題；申報(bào)專利1項(xiàng)；申報(bào)科研成果1項(xiàng)。,七.經(jīng)費(fèi)預(yù)算,七.經(jīng)費(fèi)預(yù)算,1.材料費(fèi)：合計(jì)151100元中藥費(fèi)：87400元。西藥費(fèi)：54000元SD大鼠費(fèi)用：9700元,七.經(jīng)費(fèi)預(yù)算,2.測(cè)試化驗(yàn)加工費(fèi)：合計(jì)88980元臨床試驗(yàn)：骨代謝檢測(cè)費(fèi)72000元 骨密度檢測(cè)費(fèi)79200元（院內(nèi)協(xié)商免費(fèi)） X線檢測(cè)費(fèi)84000元（院內(nèi)協(xié)商免費(fèi)）動(dòng)物實(shí)驗(yàn)：Micro-CT檢測(cè)費(fèi)6480元細(xì)胞實(shí)驗(yàn)：PCR檢測(cè)費(fèi)10500元,七.經(jīng)費(fèi)預(yù)算,3.差旅費(fèi)：約5000元 外出學(xué)習(xí)交流、運(yùn)送動(dòng)物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)標(biāo)本進(jìn)行Micro-CT檢測(cè)差旅費(fèi)用。4.會(huì)議費(fèi)：約5000元 召開(kāi)會(huì)議探討課題研究方案、總結(jié)研究成果等。5.國(guó)際合作與交流費(fèi)：約3000元 課題組成員出國(guó)學(xué)習(xí)交流、邀請(qǐng)國(guó)外專家等費(fèi)用。,七.經(jīng)費(fèi)預(yù)算,6.出版/文獻(xiàn)/信息傳播/知識(shí)產(chǎn)權(quán)事務(wù)費(fèi)：合計(jì)12000元發(fā)表論文4篇約10000元，查新費(fèi)約500元，申報(bào)專利3項(xiàng)約1500元。7.勞務(wù)費(fèi)： 32000元