惡性腫瘤實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),侯治富 吉林大學(xué) 中日聯(lián)誼醫(yī)院 實(shí)驗(yàn)診斷學(xué)教研室,/sc8,2013級(jí)專業(yè)碩士理論課臨床檢驗(yàn)理論與應(yīng)用,學(xué)習(xí)目標(biāo),學(xué)位必修課程，授予學(xué)分。 學(xué)習(xí)腫瘤的研究方法。,學(xué)習(xí)方法,獲得學(xué)分 參與網(wǎng)絡(luò)旁修，完成網(wǎng)絡(luò)作業(yè) 學(xué)習(xí)研究方法 聽講座，參與網(wǎng)上討論、交流,對(duì)腫瘤的認(rèn)識(shí),什么是腫瘤？ 為什么研究腫瘤？ 如何研究腫瘤？ 腫瘤標(biāo)志物？,什么是腫瘤？,腫瘤（Tumor） 是機(jī)體在各種致癌因素作用下，局部組織的某一個(gè)細(xì)胞在基因水平上失去對(duì)其生長(zhǎng)的正常調(diào)控，導(dǎo)致其克隆性異常增生而形成的新生物。學(xué)界一般將腫瘤分為良性和惡性兩大類。,2012年世界癌癥日共同參與，成就奇跡,世衛(wèi)組織和國(guó)際癌癥研究機(jī)構(gòu)鼓勵(lì)篩查和疫苗接種,為什么研究腫瘤？,1997年-2008年 大腸腫瘤與乳腺癌基因調(diào)控比較研究,研究趨勢(shì)和方向,免疫監(jiān)視功能？ 疫苗接種？,免疫監(jiān)視功能,腫瘤篩查早期診斷？,Screening Screening refers to the use of simple tests across a healthy population in order to identify individuals who have disease, but do not yet have symptoms. Examples include breast cancer screening using mammography and cervical cancer screening using cytology screening methods, including Pap smears. Screening programmes should be undertaken only when their effectiveness has been demonstrated, when resources (personnel, equipment, etc.) are sufficient to cover nearly all of the target group, when facilities exist for confirming diagnoses and for treatment and follow-up of those with abnormal results, and when prevalence of the disease is high enough to justify the effort and costs of screening.,鉬靶,細(xì)胞學(xué),腫瘤篩查早期診斷？,Screening for colorectal cancer Evidence to suggest that sigmoidoscopy may be effective for colorectal cancer screening, with benefits lasting for up to ten years, has come from two case-controlled studies (Selby et al., 1992; Newcomb et al., 1992). As such studies cannot eliminate the effect of selection bias, however, this benefit may have been overestimated. Trials are now under way to evaluate flexible sigmoidoscopy and colonoscopy for screening. Several trials have evaluated the effect of the faecal occult blood test (FOBT).,腫瘤診斷流程,癥狀+體征 影像學(xué) 實(shí)驗(yàn)診斷學(xué),腫瘤診斷金標(biāo)準(zhǔn),病理學(xué)細(xì)胞形態(tài)學(xué),腫瘤標(biāo)志物檢查,是以細(xì)胞形態(tài)學(xué)為基礎(chǔ) 大樣本篩查 統(tǒng)計(jì)推斷 詢證分析,什么是腫瘤標(biāo)志物？,腫瘤標(biāo)志物概念： 腫瘤標(biāo)志物(tumor markers ，TM)亦稱為腫瘤標(biāo)志，是指腫瘤組織和腫瘤細(xì)胞由于癌基因或抗癌基因和其他腫瘤相關(guān)基因及其產(chǎn)物異常表達(dá)所產(chǎn)生的抗原和生物活性物質(zhì)。 腫瘤標(biāo)志物可存在于腫瘤細(xì)胞表面、胞漿、細(xì)胞核內(nèi)或細(xì)胞外的體液中，能夠反映腫瘤存在和生長(zhǎng)并能區(qū)分腫瘤和非腫瘤的生化物質(zhì)。,檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物的意義,檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物的存在或量變可以提示腫瘤的性質(zhì)，還可以了解腫瘤的組織發(fā)生、細(xì)胞分化、細(xì)胞功能，以幫助腫瘤的診斷、分類、預(yù)后判斷以及治療指導(dǎo)。,本章主要學(xué)習(xí)內(nèi)容和要求,主要學(xué)習(xí)內(nèi)容,要求,基本概念 腫瘤標(biāo)志物的分類 常用的腫瘤標(biāo)志物,掌握,第六章 惡性腫瘤的實(shí)驗(yàn)診斷進(jìn)展,常見腫瘤的實(shí)驗(yàn)診斷,熟悉,了解,腫瘤標(biāo)志的發(fā)展概況 腫瘤的分子診斷,腫瘤標(biāo)志物檢測(cè),第一節(jié) 腫瘤標(biāo)志的發(fā)展概況,一、腫瘤標(biāo)志的發(fā)展史 腫瘤標(biāo)志的發(fā)展主要分為五個(gè)階段,我國(guó)腫瘤標(biāo)志發(fā)展的起步相對(duì)較晚，為了促進(jìn)我國(guó)腫瘤標(biāo)志研究和應(yīng)用的發(fā)展，20世紀(jì)80年代末，國(guó)內(nèi)從事腫瘤標(biāo)志研究和應(yīng)用的科技工作者積極開展這一領(lǐng)域的科研工作。 經(jīng)過國(guó)內(nèi)從事腫瘤標(biāo)志研究、開發(fā)、應(yīng)用的科學(xué)工作者的不懈努力，國(guó)內(nèi)腫瘤標(biāo)志的研究和應(yīng)用方面取得了巨大進(jìn)步。,二、腫瘤標(biāo)志物概念,腫瘤標(biāo)志物(tumor markers ，TM)亦稱為腫瘤標(biāo)志，是指腫瘤組織和腫瘤細(xì)胞由于癌基因或抗癌基因和其他腫瘤相關(guān)基因及其產(chǎn)物異常表達(dá)所產(chǎn)生的抗原和生物活性物質(zhì)。腫瘤標(biāo)志物可存在于腫瘤細(xì)胞表面、胞漿、細(xì)胞核內(nèi)或細(xì)胞外的體液中，能夠反映腫瘤存在和生長(zhǎng)并能區(qū)分腫瘤和非腫瘤的生化物質(zhì)。 檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物的存在或量變可以提示腫瘤的性質(zhì)，還可以了解腫瘤的組織發(fā)生、細(xì)胞分化、細(xì)胞功能，以幫助腫瘤的診斷、分類、預(yù)后判斷以及治療指導(dǎo)。,三、腫瘤標(biāo)志物分類,（一）一般分類 腫瘤標(biāo)志物的一般分類分為細(xì)胞標(biāo)志和體液標(biāo)志,這種將腫瘤標(biāo)志簡(jiǎn)單分為細(xì)胞和體液標(biāo)志不夠全面，目前也不是常用的分類方法。 （二）腫瘤抗原與腫瘤標(biāo)志的分類 目前用免疫生物學(xué)分析方法，從體液或細(xì)胞組織中鑒定出各種腫瘤標(biāo)志，目前臨床上應(yīng)用的多為這類標(biāo)志，通常分為免疫細(xì)胞檢測(cè)的人類腫瘤抗原、抗體檢測(cè)的腫瘤相關(guān)抗原和用重組cDNA表達(dá)克隆技術(shù)檢測(cè)的人類腫瘤抗原。,四、腫瘤標(biāo)志生物學(xué)意義,基于單克隆抗體技術(shù)的快速發(fā)展，通過用抗體篩選腫瘤cDNA表達(dá)文庫、酵母雙雜交、免疫共沉淀、雙向電泳、質(zhì)譜技術(shù)等方法，陸續(xù)發(fā)現(xiàn)了一批有癌癥診斷價(jià)值的標(biāo)志物。 1.可用來限止、追蹤、控制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)。 2.有助于更深入地研究腫瘤生長(zhǎng)、分化和發(fā)生的機(jī)制。 3.一些腫瘤標(biāo)志與人胚胎組織和細(xì)胞發(fā)生和生長(zhǎng)有關(guān)。,五、腫瘤標(biāo)志物測(cè)定的評(píng)估標(biāo)準(zhǔn),從方法學(xué)來看，腫瘤標(biāo)志物測(cè)定方法很多，以放射免疫測(cè)定法、酶聯(lián)免疫測(cè)定法、化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定發(fā)為主。 每種方法都有自己的精密度和重復(fù)性，可是從臨床免疫測(cè)定的全國(guó)室間質(zhì)量評(píng)價(jià)結(jié)果來看，腫瘤標(biāo)志定量測(cè)定表現(xiàn)出較大的離散度，這使得試劑和儀器的標(biāo)準(zhǔn)化問題成為了一個(gè)很重要的方面。 試劑和儀器的標(biāo)準(zhǔn)化對(duì)保證腫瘤標(biāo)志臨床免疫測(cè)定的準(zhǔn)確性是必不可少的。,六、腫瘤標(biāo)志物測(cè)定方法,1免疫學(xué)技術(shù) 將免疫學(xué)抗原抗體反應(yīng)的特異性和標(biāo)記物的敏感性相結(jié)合，主要包括酶聯(lián)免疫分析技術(shù)（ELASA）、放射免疫測(cè)定（RIA）等。已廣泛應(yīng)用于臨床檢測(cè)腫瘤標(biāo)志物。 2免疫組化技術(shù) 將免疫化學(xué)技術(shù)、組織病理學(xué)技術(shù)和分子生物學(xué)技術(shù)結(jié)合在一起的新興檢測(cè)技術(shù)，可從形態(tài)學(xué)上闡明細(xì)胞分化、增殖和功能變化的情況，對(duì)判斷腫瘤組織類型及評(píng)估預(yù)后有重要價(jià)值。,3流式細(xì)胞術(shù) 可用于分析腫瘤細(xì)胞的免疫表型、測(cè)定DNA含量及分析細(xì)胞周期、分析細(xì)胞功能等。但價(jià)格昂貴，難以全面推廣。 4基因診斷技術(shù) 利用DNA重組技術(shù)，通過分析基因的結(jié)構(gòu)以及功能的改變來對(duì)相關(guān)疾病進(jìn)行診斷和研究。可通過PCR法、基因芯片技術(shù)等檢測(cè)腫瘤基因，靈敏度較高。目前正由實(shí)驗(yàn)室研究向臨床應(yīng)用發(fā)展。,第二節(jié) 腫瘤標(biāo)志物的臨床檢測(cè)項(xiàng)目,一、胚胎抗原類腫瘤標(biāo)志物 胚胎抗原類物質(zhì)是在胚胎發(fā)育階段由胚胎組織產(chǎn)生的正常成分，在胚胎后期減少，出生后逐漸消失或僅存極微量。在癌腫患者中這些胚胎抗原重新出現(xiàn)。在20世紀(jì)60年代發(fā)現(xiàn)的AFP和CEA至今仍是常用的胚胎抗原類腫瘤標(biāo)志物。,1甲胎蛋白（-fetoprotein，AFP） AFP是一種胚原蛋白，它是胎兒發(fā)育早期主要由胚胎卵黃囊和肝細(xì)胞合成的一種糖蛋白（-球蛋白)，在人出生兩年后基本處于關(guān)閉狀態(tài)。在原發(fā)性肝癌早期階段就有所升高，故被當(dāng)作診斷肝癌的金標(biāo)準(zhǔn)。 在排除活動(dòng)性肝病、生殖腺胚胎瘤和妊娠等情況下，若AFP定量500(或400)g/L持續(xù)4周，或200g/L持續(xù)8周，而谷丙轉(zhuǎn)氨酶（SGPT）正常結(jié)合臨床表現(xiàn)則可診斷原發(fā)性肝癌。,2癌胚抗原（carcino-embryonic antigen，CEA） CEA是一種糖蛋白，在結(jié)腸癌、直腸癌、肺癌、胰腺癌病人的血清、血漿及各種體液中，都可檢測(cè)出CEA的增高，但它是結(jié)直腸癌的首選腫瘤標(biāo)志物。 然而吸煙、糖尿病、非特異性結(jié)腸炎等疾病病人血清中CEA也會(huì)升高，故不是惡性腫瘤的特異性標(biāo)志。CEA測(cè)定有助于輔助診斷、判斷預(yù)后和療效檢測(cè)，但其假陽性和假陰性都較高。,二、糖類抗原腫瘤標(biāo)志物,正常細(xì)胞表面存在大量糖蛋白，但當(dāng)細(xì)胞惡變后，糖基化酶被激活，細(xì)胞表面的糖蛋白也發(fā)生變異，成為一種腫瘤標(biāo)志物，根據(jù)其化學(xué)組分被稱為糖類抗原腫瘤標(biāo)志物。 1高分子粘蛋白類腫瘤標(biāo)志物： CA125 、CA15-3 、CA549 、CA27-29 、DU-PAN-2等，主要由哺乳動(dòng)物上皮細(xì)胞分泌。是乳腺癌的重要生物學(xué)指標(biāo)。 2血型抗原腫瘤標(biāo)志物： CA19-9、CA19-5 、CA50、CA72-4 、CA242 等，此類抗原標(biāo)志物的命名沒有規(guī)律，常用檢測(cè)方法是單克隆抗體法，是唾液酸巖藻糖的衍生物，常為消化道腫瘤的標(biāo)志。,三、酶類腫瘤標(biāo)志物,酶及同工酶是最早出現(xiàn)和使用的腫瘤標(biāo)志物之一。酶類標(biāo)志物有如下特點(diǎn)： 1.特異性不高； 2.腫瘤的發(fā)生、發(fā)展涉及全身多種酶類； 3.同功酶的分析的應(yīng)用提高了酶標(biāo)志的敏感性和臟器特異性； 4.酶類標(biāo)志物的敏感性較高，但其特異性較低 5.酶的活性測(cè)定受多種因素影響和干擾，穩(wěn)定性較差。,1.前列腺特異性抗原（PSA） PSA是一種由前列腺上皮細(xì)胞分泌的單鏈糖蛋白，具有糜蛋白酶活性，在血清中主要有兩種存在形式：一種是游離型的PSA（F-PSA），另一種是與1-抗糜蛋白酶（ACT）結(jié)合的PSA（PSA-ACT）。 PSA作為前列腺癌的特異性標(biāo)志物，對(duì)前腺癌的診斷特異性達(dá)9097。被認(rèn)為是最有價(jià)值的前列癌的腫瘤標(biāo)志物，被廣泛應(yīng)用于前列腺癌的篩選、診斷及治療后的監(jiān)測(cè)。,2前列腺特異性酸性磷酸酶（PAP） PAP是前列腺分泌的一種含兩條肽鏈的糖蛋白酶，測(cè)定前列腺癌的特異性比PSA高，但靈敏度較低，PAP和PSA聯(lián)合使用可提高診斷的陽性率。 1987年，美國(guó)國(guó)立癌癥研究所（NCI）協(xié)調(diào)會(huì)議認(rèn)為，PAP有助于鑒定有轉(zhuǎn)移的病人，而對(duì)非轉(zhuǎn)移的效果遠(yuǎn)不及前列腺特異性抗原。,3神經(jīng)元特異性稀醇化酶（NSE） 神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）是神經(jīng)母細(xì)胞瘤的腫瘤標(biāo)志物，由于SCLC是最常表現(xiàn)由神經(jīng)內(nèi)分泌性質(zhì)的腫瘤，目前NSE也是SCLC最敏感最特異的腫瘤標(biāo)志物。 NSE作為神經(jīng)母細(xì)胞瘤的標(biāo)志物，對(duì)該病的早期診斷具有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值。神經(jīng)母細(xì)胞瘤患者的尿中NSE水平也有一定升高，治療后血清NSE水平降至正常。血清NSE水平的測(cè)定對(duì)于監(jiān)測(cè)療效和預(yù)報(bào)復(fù)發(fā)均具有重要參考價(jià)值，比測(cè)定尿液中兒茶酚胺的代謝物更有意義。,小細(xì)胞肺癌(SCLC) 患者血清NSE檢出的陽性率可高達(dá)65%100%，目前已公認(rèn)為NSE可作為SCLC高特異性、高靈敏性的腫瘤標(biāo)志物，有報(bào)道；NSE水平與SCLC轉(zhuǎn)移程度相關(guān)；但與轉(zhuǎn)移的部位無關(guān)；NSE水平與其對(duì)治療的反應(yīng)性之間也有一個(gè)良好的相關(guān)性。,4堿性磷酸酶（Alkaline Phosphatase,ALP） 堿性磷酸酶異常見于原發(fā)和繼發(fā)性肝癌、膽道癌，在白血病、前列腺癌、淋巴瘤中ALP也會(huì)有所升高。 ALP及其同功能酶結(jié)合，可提高診斷的特異性和敏感性。 動(dòng)態(tài)的觀測(cè)ALP及其同工酶的變化可以有助于判斷預(yù)后。 另外，在精原細(xì)胞瘤中，胎盤堿性磷酸酶陽性率在初次診斷者中為3%，在發(fā)生轉(zhuǎn)移者中為75%。一期精原細(xì)胞瘤病人偶爾可有PLAP增高，而AFP結(jié)果正常時(shí)，則可提示為精原細(xì)胞瘤。,四、激素類腫瘤標(biāo)志物,激素是一類由特異的內(nèi)分泌腺體或散在體內(nèi)的分泌細(xì)胞所產(chǎn)生的生物活性物質(zhì)，當(dāng)此類細(xì)胞發(fā)生癌變時(shí)，就會(huì)使所分泌的激素量發(fā)生異常，此為正位激素異常： 而正常情況下不能分泌激素的細(xì)胞，如若轉(zhuǎn)化為腫瘤細(xì)胞后產(chǎn)生的激素或能產(chǎn)生激素的細(xì)胞癌變后，分泌其他分泌細(xì)胞所產(chǎn)生的激素，則為異位激素。如小細(xì)胞肺癌分泌促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)。,1降鈣素(calcitonin，CT) 降鈣素是由甲狀腺濾泡細(xì)胞合成、分泌的一種由32個(gè)氨基酸組成的單鏈多肽激素，故又稱甲狀腺降鈣素。分子量約為3.5kD，半衰期412分鐘。正常情況下它的靶器官是骨、腎和小腸，它在血清鈣升高時(shí)分泌，抑制鈣從骨中釋放，增加尿磷，降低血鈣和血磷。,CT常用于篩查甲狀髓樣瘤患者的無癥狀家族成員，甲狀腺髓樣癌患者的CT一定會(huì)升高，但由于其半衰期短，且CT和腫瘤大小、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移有關(guān)，如甲狀腺癌或肺癌手術(shù)后，血清CT仍持續(xù)升高，則說明有殘余的腫瘤組織形成，預(yù)后較差。 此外類癌、肺癌、腎癌、肝癌、消化道癌等惡性腫瘤中CT也有所升高；肺部疾病、甲狀旁腺功能亢進(jìn)、惡性貧血、胰腺炎和急、慢性腎功能不全等非腫瘤性疾病也可升高。孕婦和兒童因骨骼生長(zhǎng)，血清降鈣素水平增高，女性停經(jīng)后血清降鈣素水平下降。,2人絨毛膜促性腺激素(hCG) 人絨毛膜促性腺激素是由胎盤滋養(yǎng)細(xì)胞分泌的一類糖蛋白類激素，在正常妊娠婦女血中可檢測(cè)到。 當(dāng)胎盤絨毛膜細(xì)胞惡變?yōu)閻盒云咸烟ズ螅琀CG會(huì)異常升高（100滋養(yǎng)體瘤和絨毛膜上皮細(xì)胞癌HCG異常升高），可達(dá)100萬UL。 部分乳腺癌、胃腸道癌、黑素瘤、卵巢癌、睪丸癌等惡性腫瘤中HCG亦會(huì)升高； 當(dāng)子宮內(nèi)膜異位癥、卵巢囊腫、肝硬化、十二指腸潰瘍、炎癥等非腫瘤狀態(tài)中也可見HCG輕度異常。,3兒茶酚胺類物質(zhì)(catecholamines，CA) 兒茶酚胺類物質(zhì)是由腎上腺髓質(zhì)中的一些交感神經(jīng)節(jié)纖維末梢終止髓質(zhì)細(xì)胞（即嗜鉻細(xì)胞）產(chǎn)生和分泌的，既是激素又是神經(jīng)遞質(zhì)。包括腎上腺素、去甲腎上腺素、香草扁桃酸(VMA)、多巴胺、高香草酸（HVA）等。 促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)為兒茶酚胺類相關(guān)性物質(zhì)，由垂體前葉促皮質(zhì)素細(xì)胞分泌，含39個(gè)氨基酸，相對(duì)分子質(zhì)量4.5kD。,兒茶酚胺類腫瘤標(biāo)志物常被認(rèn)為神經(jīng)母細(xì)胞瘤、神經(jīng)節(jié)瘤和嗜鉻細(xì)胞瘤的標(biāo)志物。 大部分肺癌患者ACTH亦增加，多為相對(duì)分子質(zhì)量為23.6kD的無生物活性的大分子ACTH，但與小相對(duì)分子質(zhì)量的ACTH一樣同樣可以生成黑色素細(xì)胞刺激素。 約70%神經(jīng)母細(xì)胞瘤患者均VMA增高，在四期神經(jīng)瘤患者VMA/HVA的比值可作為預(yù)后評(píng)價(jià)指標(biāo)。同時(shí)是嗜鉻細(xì)胞瘤診斷的首選標(biāo)志物，但由于增高程度不明顯故需同時(shí)測(cè)定尿中的兒茶酚胺和變腎上腺素。目前使用高效液相的紫外檢測(cè)仍是最有效的方法之一。,5乳酸脫氫酶 乳酸脫氫酶（Lactate Dehydrogenase,LD）是糖代謝中的主要酶，催化乳酸變成丙酮酸的氧化反應(yīng)，在人體中分布廣泛，當(dāng)細(xì)胞受到腫瘤侵襲，LD會(huì)從細(xì)胞中釋放出來，使血清中含量升高。 乳酸脫氫酶在肝癌、胰腺癌、前列腺癌、淋巴瘤等惡性腫瘤中均可檢測(cè)到。 另外，在肝炎、心肌梗死、肝硬化等非腫瘤疾病中亦可增高。 由于各組織中的LD含量較高，微量損傷即可使血清LD的升高，故敏感性強(qiáng)，為早期發(fā)現(xiàn)無癥狀腫瘤病人提供線索。,五、某些蛋白質(zhì)類腫瘤標(biāo)志物,蛋白質(zhì)腫瘤標(biāo)志物是最早發(fā)現(xiàn)的腫瘤標(biāo)志物，特異性差。但檢測(cè)方法較容易故作為常規(guī)檢測(cè)項(xiàng)目。 常見的蛋白類腫瘤標(biāo)志物有2微球蛋白、鐵蛋白、本周蛋白、C多肽、甲狀腺球蛋白等。,（一）2微球蛋白 2微球蛋白是由淋巴細(xì)胞產(chǎn)生的一種由100個(gè)氨基酸殘基組成的單鏈多肽小分子蛋白質(zhì)，可自由通過腎小球?yàn)V過，正常情況下可被腎小管全部吸收，故尿液中含量極低。 在原發(fā)性肝癌、肺癌、骨髓瘤等患者的血液及尿中2微球蛋白均有所升高。 但在某些炎癥性疾病或腎小球?yàn)V過功能減低的血清中也會(huì)異常增高，故在診斷時(shí)應(yīng)排除此情況。 另外在腫瘤早期，血清中的2微球蛋白就會(huì)明顯的高于正常值，故有助于鑒別良、惡口腔腫瘤。,（二）鐵蛋白 鐵蛋白于1937年首先分離出來，是一種脫鐵蛋白組成的具有大分子結(jié)構(gòu)的糖蛋白，由24個(gè)亞單位聚集組成，相對(duì)分子量為450000.某些腫瘤細(xì)胞可合成并釋放鐵蛋白。 在肝癌、肺癌、乳腺癌等腫瘤狀態(tài)時(shí)，酸性同分異構(gòu)體鐵蛋白會(huì)異常性增高，而色素沉著、炎癥等非腫瘤狀態(tài)下鐵蛋白也會(huì)升高。,（三）本周蛋白 尿本周蛋白是最早發(fā)現(xiàn)的腫瘤標(biāo)志物，于1963年被證實(shí)尿本周蛋白為免疫球蛋白的輕鏈成分，當(dāng)沉淀系數(shù)為3.6s，分子量為45000時(shí)屬于游離輕鏈雙體，而沉淀系數(shù)為1.8s，分子量為22500時(shí)，多屬于單體。 本周蛋白是多發(fā)性骨髓瘤的典型標(biāo)志物。 但目前已被血和尿中輕鏈成分的檢測(cè)所取代。,六、基因類腫瘤標(biāo)志物,隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，癌基因和抑癌基因的檢測(cè)已成為腫瘤臨床診斷的新一代標(biāo)志物。通過顯色技術(shù)，在同一反應(yīng)體系中患者血清與基因類腫瘤標(biāo)志物試劑進(jìn)行顯色，大大提高了檢測(cè)的敏感度，可以快速、準(zhǔn)確、早期發(fā)現(xiàn)腫瘤。 （一）癌基因腫瘤標(biāo)志物 癌基因是指在自然或?qū)嶒?yàn)條件下，具有潛在誘導(dǎo)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的基因。以ras基因家族及其表達(dá)產(chǎn)物和myc基因家族及其表達(dá)產(chǎn)物為主。,1.ras基因家族及其表達(dá)產(chǎn)物 ras基因是一種原癌基因，其基因編碼產(chǎn)物為p21ras蛋白，其本質(zhì)為膜相關(guān)的G蛋白，具有GTP酶的活化性，可水解GTP生成GDP，參與信號(hào)傳導(dǎo)。作為原癌基因的ras基因被激活以后就變成有致癌活性的癌基因。 當(dāng)機(jī)體發(fā)生腫瘤時(shí)，編碼p21ras蛋白的第12、13及61位氨基酸的核苷酸可以發(fā)生點(diǎn)突變，突變型的蛋白無法將GTP水解為GDP。在乳腺癌、結(jié)直腸癌、肺癌、髓性白血病患者中可檢測(cè)到ras基因家族及其表達(dá)產(chǎn)物異常升高。,2.myc基因家族及其表達(dá)產(chǎn)物,myc基因?qū)儆诰幋a核蛋白的癌基因，編碼一種與細(xì)胞周期調(diào)控有關(guān)的核內(nèi)DNA結(jié)合蛋白。myc基因家族及其產(chǎn)物可促進(jìn)細(xì)胞增殖，永生化，去分化和轉(zhuǎn)化等，在多種腫瘤形成過程中處于重要地位。myc基因家族中的3個(gè)成員對(duì)腫瘤形成及在腫瘤類型方面存在差異。 目前認(rèn)為，C-myc的擴(kuò)增與腫瘤發(fā)生與轉(zhuǎn)歸密切相關(guān)，N-myc的擴(kuò)增對(duì)腫瘤的預(yù)后判斷有意義，L-myc擴(kuò)增與腫瘤的易患性和預(yù)后在不同的腫瘤中表現(xiàn)不一樣。近年來的研究表明，myc基因產(chǎn)物，尤其是c-myc在誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡過程中也起重要作用。,myc基因過度表達(dá)，見于各種腫瘤，如肺癌，胃癌，乳腺癌，結(jié)腸癌，宮頸癌，某些神經(jīng)母細(xì)胞病，粒細(xì)胞性白血病，視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤，成骨肉瘤，軟骨肉瘤，脊索瘤，脂肪肉瘤，橫紋肌肉瘤，何杰金氏病及頭部腫瘤等都有myc基因的擴(kuò)增或過度表達(dá)。,（二）抑癌基因 抑癌基因指對(duì)正常細(xì)胞增殖起負(fù)調(diào)節(jié)作用的基因。此類基因丟失、實(shí)火或變異時(shí)，會(huì)促使細(xì)胞失控而惡性生長(zhǎng)。常見的抑癌基因類腫瘤標(biāo)志物有RB基因及其表達(dá)產(chǎn)物、p53基因及其產(chǎn)物、NF-1等。,1.RB基因及其表達(dá)產(chǎn)物 RB基因是世界上第一個(gè)被克隆和完成全序列測(cè)定的抑癌基因。Rb蛋白分布于核內(nèi)，是一類DNA結(jié)合蛋白。Rb蛋白的磷酸化去磷酸化是其調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)分化的主要形式，在細(xì)胞周期的G0、G1期，它表現(xiàn)為去磷酸化，在G0、S、M期則處于磷酸化狀態(tài)。 RB是首先在兒童視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤研究中發(fā)現(xiàn)的，此類細(xì)胞中染色體13q14缺失。此后在膀胱癌、乳腺癌及肺癌中同時(shí)發(fā)現(xiàn)此基因喪失或失活。近期研究表明RB基因還與卵巢癌有關(guān)。,2.p53基因及其產(chǎn)物 p53基因是一種抑癌基因，編碼393個(gè)氨基酸蛋白,分子量為53KD，在停泊生長(zhǎng)或非轉(zhuǎn)化細(xì)胞中P53mRNA水平很低，但刺激胞液后mRNA顯著增加.持續(xù)生長(zhǎng)的細(xì)胞，其mRNA 水平不隨細(xì)胞周期而出現(xiàn)明顯變化，但經(jīng)誘導(dǎo)分化后mRNA水平降低，部分是轉(zhuǎn)錄后調(diào)控。 p53的突變可見于50%的人類惡性腫瘤中，屬最常見基因改變。乳腺癌、肺癌、肝癌、宮頸癌等均可發(fā)現(xiàn)p53基因突變。,第三節(jié) 常見腫瘤的實(shí)驗(yàn)診斷,一、肺癌 肺癌是常見的惡性腫瘤之一，發(fā)病率已居惡性腫瘤的首位。 目前常用的腫瘤標(biāo)志物有神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）、癌胚抗原（CEA）、細(xì)胞角蛋白、碳水化合物抗原（CA）、鱗狀細(xì)胞癌相關(guān)抗原（SCCA）等。,二、肝癌 原發(fā)性肝癌：原發(fā)性肝癌(Hcc)是一種常見的惡性腫瘤，其惡性程度極高，在全球范圍內(nèi)它在男性惡性腫瘤發(fā)病率中居第七位，女性居第九位。 目前文獻(xiàn)已報(bào)道的肝癌標(biāo)志物達(dá)數(shù)十種之多，主要為AFP、谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶(GGT)及其同工酶、巖藻糖苷酶(AFU)、異常凝血酶原(AP)、鐵蛋白和酸性鐵蛋白等。,三、結(jié)直腸癌 結(jié)直腸癌是常見的消化道惡性腫瘤，發(fā)生率僅次于胃癌和食道癌。好發(fā)部位為直腸及直腸與乙狀結(jié)腸交界處，占60。 癌胚抗原(CEA)是檢測(cè)直腸癌的較特異的最常用的標(biāo)志物，CAl9-9、CA242、CA50和TIMP-1也是臨床常見的用于判斷結(jié)腸癌預(yù)后的腫瘤標(biāo)志物，但是特異性和靈敏性都遠(yuǎn)遠(yuǎn)不及CEA。建議與CEA聯(lián)合檢測(cè)，可大大提高特異性和靈敏性。,四、乳腺癌 乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，據(jù)資料統(tǒng)計(jì)，發(fā)病率占全身各種惡性腫瘤的710%，通常發(fā)生在乳房腺上皮組織，是一種嚴(yán)重影響婦女身心健康甚至危及生命的最常見的惡性腫瘤之一。 目前檢測(cè)乳腺癌常用的標(biāo)記物有：CAl53、端粒酶、環(huán)氧化酶、鈣黏蛋白以及c-erbB2基因 、nm23基因、p53基因等基因標(biāo)志物。,腫瘤分子標(biāo)志物研究進(jìn)展,腫瘤標(biāo)志物的作用已由最初的發(fā)現(xiàn)和診斷腫瘤，發(fā)展到現(xiàn)在應(yīng)用于治療和監(jiān)測(cè)腫瘤預(yù)后。 迄今為止，發(fā)現(xiàn)的腫瘤標(biāo)志物已超過200種，臨床常用的達(dá)40余種。 腫瘤標(biāo)志物除用于腫瘤診斷外，還可以其為靶，進(jìn)行腫瘤的靶向治療及免疫治療，有關(guān)這方面的研究已成為熱點(diǎn)。 而生物芯片技術(shù)的發(fā)展，為腫瘤標(biāo)志物的研究和應(yīng)用提供了一個(gè)廣泛的技術(shù)平臺(tái)。,PSA,The Great ProstateMistake 關(guān)于前列腺的重大錯(cuò)誤,理查德埃布林（RichardAblin）教授 紐約時(shí)報(bào) 自1994年，PSA經(jīng)美國(guó)食品和藥品管理局（FDA）批準(zhǔn)作為前列腺癌檢測(cè)最常用指標(biāo)，全美每年用于PSA篩查的單項(xiàng)費(fèi)用已超過30億美元，但該檢測(cè)對(duì)前列腺癌的預(yù)測(cè)效率“幾乎不比投擲硬幣決定更高”。在國(guó)會(huì)尋找各種途徑壓縮醫(yī)療系統(tǒng)成本的今天，改變這種以PSA來篩查前列腺癌的手段，“將為國(guó)家醫(yī)療體系節(jié)省大量的費(fèi)用。”,PSA檢查“絕對(duì)不應(yīng)用于篩查大于50歲的全部男性”,Ablin教授認(rèn)為：“相關(guān)藥物企業(yè)對(duì)PSA檢測(cè)的過分強(qiáng)調(diào)和推廣，以及對(duì)前列腺癌意識(shí)的倡導(dǎo)，很有可能是受到了利益的驅(qū)動(dòng)”，而“前列腺癌意識(shí)”的強(qiáng)化可能會(huì)為個(gè)人和社會(huì)帶來許多壓力。美國(guó)男性一生中罹患前列腺癌的概率為16%，而大多前列腺癌具有緩慢的生長(zhǎng)方式和低度的侵襲行為，真正的致死率僅為3%。換句話說，男性若有幸活到老年，他們更可能死于其他疾病，而不是死于前列腺癌。,他同時(shí)指出，不應(yīng)否定PSA檢測(cè)的重大意義。當(dāng)對(duì)治療后的前列腺癌患者進(jìn)行隨訪時(shí)，如果發(fā)現(xiàn)PSA水平出現(xiàn)快速升高，則提示前列腺癌的復(fù)發(fā)。同樣，對(duì)于有前列腺癌家族史的男性進(jìn)行定期PSA監(jiān)測(cè)，若PSA水平出現(xiàn)急速升高，往往提示腫瘤的發(fā)生。 Ablin教授說：“我從未想到，自己的發(fā)現(xiàn)在40年后會(huì)導(dǎo)致利益驅(qū)動(dòng)下的公共衛(wèi)生災(zāi)難”，“醫(yī)學(xué)界必須面對(duì)現(xiàn)實(shí)，并且停止PSA檢測(cè)的不恰當(dāng)使用，這樣能節(jié)省數(shù)十億美元，并且能夠從那些不必要的治療中拯救數(shù)十億男性”。他充滿信心地指出，醫(yī)學(xué)界的觀點(diǎn)“正慢慢地向反對(duì)PSA檢測(cè)轉(zhuǎn)變”。,Ablin教授還援引了3月公布的美國(guó)癌癥學(xué)會(huì)指南最新版本作為支持，敦促更加謹(jǐn)慎地使用PSA檢測(cè)。另外，他提到，美國(guó)預(yù)防科學(xué)院已經(jīng)得出相同結(jié)論，即“沒有充分證據(jù)推薦行PSA常規(guī)篩查”。 3月11日，Ablin教授再次發(fā)表觀點(diǎn)，認(rèn)為曾經(jīng)令人類為之深受鼓舞的前列腺癌預(yù)測(cè)的最常用手段PSA篩查，已成為一個(gè)“耗資巨大的公共衛(wèi)生災(zāi)難”。隨后，多位泌尿外科學(xué)界的知名人士對(duì)PSA及PSA篩查發(fā)表了各自的觀點(diǎn)。,來自勞倫斯堪薩斯大學(xué)、美國(guó)泌尿?qū)W會(huì)（AUA）發(fā)言人思拉什（Thrasher）承認(rèn)，“僅靠PSA檢測(cè)確實(shí)不能很好地預(yù)測(cè)前列腺癌”。 而對(duì)于AUA推薦的PSA最佳適用準(zhǔn)則，他解釋說，泌尿外科醫(yī)師對(duì)PSA檢測(cè)結(jié)果的解釋應(yīng)和其他危險(xiǎn)因素結(jié)合分析，如健康狀況、年齡、并發(fā)癥、PSA變化速度（PSA-V）、體格檢查等。他指出：“我不希望人們放棄PSA檢測(cè)這種篩查方法，甚至逐漸將其遺忘”。他在接受Medscape Oncology（Medscape腫瘤學(xué)）的采訪時(shí)，就PSA篩查的必要性也發(fā)表了相同闡述，即“我們不能僅依靠PSA檢測(cè)的單項(xiàng)結(jié)果來預(yù)測(cè)前列腺癌，綜合其他信息進(jìn)行解讀非