需氧革蘭陽性桿菌 芽胞桿菌屬 Bacillus 李斯特菌屬 Listeria 丹毒斯菌屬 Erysipelothrix 加德納菌屬 Gardnerella 需氧芽胞桿菌屬（Bacillus）48個種 與醫學有關5個種 炭疽芽胞桿菌（B.anthracis） 蠟樣芽胞桿菌（B.cereus） 蕈狀芽胞桿菌（B.mycoides） 巨大芽胞桿菌（B.megaterium） 蘇云金芽胞桿菌（B.thuringiensis ） 1 臨床意義 引起人、蓄共患的急性傳染病，包括皮膚炭疽、肺炭 疽、腸炭疽、敗血性炭疽，烈性傳染病, 死亡率極 致病因子： 莢膜：抗吞噬，有利于細菌在組織內繁殖擴散 炭疽毒素：保護性抗原、致死因子、水腫因子 病后可獲得持久免疫力 炭疽芽胞桿菌2 炭疽芽胞桿菌 革蘭陽性大桿菌，兩端截平，竹節狀排列，有芽胞、 無鞭毛、可有毒株有莢膜，芽胞橢圓形，小于菌體， 位于菌體中央，多在有氧條件下形成，2530，在 培養基中、土壤內、動物尸體解剖后暴露在空氣中， 都易形成芽胞在活體或完整未解剖尸體內不形成芽胞 ，尸體嚴禁解剖 3 普瓊平板：灰色、粗糙型菌 落；卷發狀邊緣（低倍鏡下 ） BAP：不溶血 NaHCO3 BAP： 有毒株產生莢膜呈黏液 型菌落，挑取時呈粘絲狀(鑒 別要點) 無毒株粗糙型菌落 培養特性 n肉湯培養基：絮狀 沉淀 n明膠371824h 表面液化成漏斗狀 ，由于細菌沿穿刺 線向四周擴散形成 倒松樹狀。 4 生化反應 葡萄糖+ 、麥芽糖+ 、蔗糖+、 卵磷脂酶弱+、觸酶+ 硝酸鹽還原試驗+、VP、吲哚、硫化氫 、檸檬酸鹽、尿素 明膠液化 胨化牛乳：在牛乳中生長24天后牛乳凝固 并緩慢胨化 5 抗原 l菌體多糖抗原：與毒力無關，耐熱，特異性 不高，病獸臟器皮毛加熱后仍可與相應抗體 反應，稱Ascoli熱沉淀反應 l莢膜多肽抗原：抗吞噬，與毒力有關 l芽胞抗原： l炭疽毒素Anthrax toxin： 由保護性抗原、 致死因子、水腫因子形成。 6 抵抗力 耐熱、耐干燥 對氧化劑敏感 對青霉素、磺胺類抗生素敏感 7 微生物學檢查 標本的采集：分泌物、痰、血液、糞便 、嘔吐物、腦脊液等，嚴禁宰殺解剖死 蓄。 標本的處理：液體標本取沉渣分離培養 ；固體標本用生理鹽水浸泡，水浴殺死 非芽胞菌；血液、臟器、滲出液增菌或 直接分離培養 8 痰、嘔吐物、CSF 及炎癥分泌物 2%兔血清肉 湯快速增菌 374h 莢膜熒光抗體染色 或莢膜腫脹試驗 直接涂片 莢膜染色 G染色 初步報告 0.2ml注射小白鼠 腹腔，8h后解剖 涂片G染色、 莢膜染色 初步報告 快速檢驗程序 核 酸 檢 測 Ascoli試驗 皮毛、腐 敗臟器等 9 生化反應 噬菌體裂解 青霉素抑制 毒力試驗 皮毛、腐敗臟器等血液 以NG制成懸液 經加溫或飽和 尿素處理 肉湯增 菌培養 BAP或戊 烷脒平板 2%兔血清肉湯48hG染色鏡檢菌落特征 動力觀察 串珠試驗 確定報告 莢膜腫脹試驗 分離培養 檢驗程序 法定報告傳染病，發現疑是病例應于24小時內上報CDC 10 戊烷脒多粘菌素瓊脂 基礎培養基 25g/L戊烷脒: 殺滅利什曼原蟲等寄生蟲 3000IU/L多粘菌素 2%脫纖維羊血 11 檢驗方法 涂片染色：革蘭陽性大桿菌、竹節狀排列、 有明顯莢膜和芽胞初步報告 莢膜熒光抗體染色或莢膜腫脹試驗 核酸檢測：核酸雜交 分離培養：BAP或戊烷脒多粘菌素B等選擇性 培養基。 2%兔血清肉湯增菌分離培養 12 菌落特征 形態染色 生化試驗:表131 串珠試驗: 接種于含青霉素(0.050.5U/ml) 的肉湯中，37 6h，大而均勻成串的圓球 狀菌體，與青霉素抑制細菌細胞壁合成有關 ，類炭疽無此現象 鑒定試驗 13 接種于含青霉素5、10、100U/ml瓊脂平板， 3724h 生長 受抑制不生長 串珠和青霉素抑制聯合試驗： 兔血瓊脂平板 抑菌環 青霉素紙片 青霉素抑制試驗 串珠形成區 14 噬菌體裂解試驗：AP631炭疽噬菌體 NaHCO3毒力試驗：接種于含0.5%NaHCO3和10% 馬血清的平板，10%CO2、37、2448h，有毒株 形成莢膜黏液型菌落，無毒株不形成莢膜粗糙型 菌落 毒素動物試驗：小鼠、家兔或豚鼠皮下接種 植物凝集素試驗：熒光或酶標記PHA與菌體多糖反應 Ascoli熱沉淀試驗：可作追溯性診斷 其它實驗 15 臨床意義 l 食物中毒：含菌量達105/g以上，夏、秋季多 見，中毒食物大多無腐敗、變質現象，感 官性狀正常，應引起注意 嘔吐型耐熱腸毒素 腹瀉型不耐熱腸毒素 l 全眼球炎（外傷后） l 心內膜炎、敗血癥和腦膜炎 蠟樣芽胞桿菌 Bacillus cereus 16 蠟樣芽胞桿菌 Bacillus cereus 形態：革蘭陽性大桿菌、兩端鈍圓 、有芽胞、周鞭毛、無莢膜 培養特性：需氧或兼性厭氧，最適 溫度3035，營養要求不高。 普通瓊脂平板：菌落較大，灰白色， 表面粗糙似毛玻璃狀或融蠟狀，有 蠟樣光澤 BAP 有溶血 卵黃平板生長迅速，培養3h后， 雖看不到菌落，但該菌可分解卵磷 脂而形成白色的混濁環，稱乳光反 應或卵黃反應 17 生化反應 葡萄糖、蔗糖、麥芽糖等 卵磷脂酶+ 、VP 胨化牛乳、液化明膠， 多次傳代后生化特性?？筛淖?18 微生物學檢查 嘔吐物、殘留食物等 活菌計數接種 BM BAP 卵黃瓊脂平板 371824h 直接涂 片染色 鏡檢 動物試驗 生化反應血清凝集 報告結果 19 結果解釋 l因食品暴露于空氣中，在一定程度都會受到 本菌污染，所以不能分離出該菌就認為是引 起食物中毒的病原菌。 從食物中分離出菌數105CFU/g，提示本菌 活躍生長，構成潛在危險 從可疑食物分離到的菌株與從病人糞便和(或 )嘔吐物中分離到的菌株屬同一血清型 20 三、枯草芽胞桿菌 21 生物學性狀形態染色 革蘭陽性大桿菌、 兩端鈍圓 有芽胞、無莢膜、 有鞭毛 22 培養特性 BM：灰白色、不透明、干燥、鋸 齒狀粗糙大菌落 BAP：溶血大菌落 23 生化反應 觸酶+ 葡萄糖、甘露醇、木糖、阿拉伯糖 串珠試驗 卵磷脂酶 24 炭疽芽胞桿菌與其他需氧芽胞桿菌的鑒別 鑒別項目 炭疽芽胞桿菌 枯草芽胞桿菌 蠟樣及其他芽胞桿菌 形態 菌體兩端平截、長鏈 兩端鈍園、短鏈 兩端鈍園、短鏈 莢膜 多肽莢膜 動力 + + 菌落 卷發狀，有毒株為M型 鋸齒狀、R型 蠟樣或R型 肉湯生長 絮狀沉淀、上層清 形成菌膜 均勻混濁有菌膜 卵磷脂酶 + + 溶血反應 不溶或微溶血 溶血 溶血 Ascolis試驗 + 串珠試驗 + 青霉素抑制試驗 + 植物凝集素試驗 + 莢膜腫脹試驗 + 熒光抗體染色 動物毒力試驗 + 蠟樣芽胞桿菌的腸毒素可致 小鼠等動物發病致死，但不產生莢膜，其他需氧芽胞桿菌（） 噬菌體裂解試驗 + 25 李斯特菌屬 產單核細胞李斯特菌 紅斑丹毒絲菌 26 一、產單核細胞李斯特菌 生物學性狀 革蘭陽性短小桿菌成雙排列 有鞭毛（1820有動力； 37動力緩慢），無芽胞，無 莢膜 4可生長 BAP：灰白色菌落，有狹窄的 溶血環 半固體培養基：倒傘形生長 27 生化反應 發酵多種糖類 硝酸鹽還原試驗 甲基紅+ VP試驗+ 抵抗力 n耐堿不耐酸 n對熱敏感 n對多種抗生素敏感（ 首選氨芐青霉素） 對磺胺、桿菌肽、多 粘菌素耐藥 28 臨床意義 主要引起腦膜炎、敗血癥 傳播途徑：糞口途徑，胎盤和產道 致病因子：溶血素和菌體表面成分 29 微生物檢查 標本 涂片革蘭 染色鏡檢 熒光抗 體染色 動力檢查 （25，37） 血液 肉湯增菌 腦脊液 沉淀物 咽喉拭子 、組織、 糞便冷增 菌 接種羊血瓊脂平板 生 化 反 應 血清學試驗 動物試驗 30 二、紅斑丹毒絲菌 革蘭陽性桿菌，無芽胞，無鞭毛，無莢膜 厭氧或微需氧 BAP：形成兩種菌落光滑型小菌落和粗造型大菌 落。 發酵葡萄糖及乳糖、液化明膠、產生硫化氫 主要引起家畜感染及人類丹毒 31 加德納菌屬 陰道加特納菌 32 生物學性狀 多形性，單個或成雙排列，染色不定（視菌 齡和菌種而定：臨床株G+，保存株 G）， 無芽胞、無莢膜、無鞭毛 兼性厭氧，營養要求高，BAP：可有溶血 葡萄糖、麥芽糖、蔗糖 氧化酶、觸酶 對青霉素類敏感、對磺胺類耐藥 33 臨床意義 與非特異性陰道炎（BV）有關 BV是陰道內乳酸桿菌被另一組厭氧 菌為主的細菌取代，同時伴有陰道分泌 物性質改變的一組綜合征。 主要病因為陰道內乳酸桿菌大量減 少，伴有陰道加特納菌、類桿菌、消化 球菌及支原體大量增殖。 34 微生物