2.2動物細胞工程——動物細胞融合技術與單克隆抗體動物細胞融合技術01020305單克隆抗體的制備單克隆抗體在臨床上的應用我們知道：

運用植物體細胞雜交技術，可以跨越不同植物之間生殖隔離的屏障，培育出新的作物類型。那么，有沒有技術能讓不同種動物的體細胞進行雜交，培育出集不同細胞的優勢于一身的動物細胞呢？1.動物細胞融合實例1：自然條件受精作用1.動物細胞融合1970年人工條件下的人-鼠細胞融合實驗實例2：人工誘導動物細胞融合也稱細胞雜交，是指兩個或多個動物細胞形成一個細胞的過程。1.概念：2.結果：形成的具有原來______________________________的_________細胞，稱為_____________。單核兩個或多個細胞遺傳信息雜交細胞3.原理：細胞膜的流動性4.動物細胞融合的方法：物理方法（離心、振動、電激）化學方法（聚乙二醇融合法）生物方法（滅活病毒誘導法）動物細胞沒有細胞壁，可以直接誘導融合。動物細胞融合所特有的融合方式。1.動物細胞融合1、什么是病毒的滅活？

滅活是指用物理或化學手段使病毒失去感染能力，但是并不破壞病毒的抗原結構。2、滅活的病毒誘導動物細胞融合的機理是什么？

病毒表面含有的糖蛋白和一些酶能夠與細胞膜上的糖蛋白發生作用，使細胞相互凝聚，細胞膜上的蛋白質分子和脂質分子重新排布，細胞膜打開，細胞發生融合。1.動物細胞融合

滅活的病毒顆粒黏附于細胞表面↓細胞膜被病毒顆粒穿通↓細胞膜連接↓細胞核融合，形成雜交細胞用滅活的病毒誘導動物細胞融合過程：動物細胞A動物細胞B動物細胞______培養物理、化學、生物法誘導雜交細胞（單核）膜融合、質融合5.構建動物細胞融合模型：1.動物細胞融合①融合過程:細胞膜融合→細胞質融合→________融合。②重組細胞的特點:具有____________________,雜種細胞表現出兩個____________的特點。③融合后的雜交細胞經過__________后仍能形成兩個完整的雜交細胞細胞核親本細胞有絲分裂兩種細胞的遺傳信息突破了有性雜交方法的局限，使遠緣雜交（種間、屬間、科間、動植物之間）成為可能。成為研究細胞遺傳、細胞免疫、腫瘤和生物新品種培育等的重要手段。特別是利用雜交瘤技術制造單克隆抗體6.意義：7.應用：

前段時間，全國在抗擊COVID-19疫情的時候，我們從新聞里看到很多康復者在捐獻血漿，用來治療其他病人。那么，血漿里到底是什么東西能夠治療新型冠狀病毒感染？2.單克隆抗體反復注射人們獲得抗體的傳統方法：動物體內抗原多種漿細胞缺點：產量低、純度低，制備的抗體特異性差、反應不靈敏每一個漿細胞只能產生一種特異性抗體體內產生的特異性抗體多達百萬種多種抗體（血清）多克隆抗體：由多個漿細胞克隆產生，是多種抗體的混合物。2.單克隆抗體

一個捐獻者的200-300毫升的血漿，如果合格，潛在的也只能治療2-3個患者，如何大量制備？

此外，在鑒定此類抗原時，其專一性不是很理想，常常會出現假陽性，也稱為交叉反應性。如何產生大量的單一抗體呢？1.抗體的產生:效應B淋巴細胞（漿細胞）每一個B淋巴細胞只能分泌一種特異性抗體一個B淋巴細胞克隆B淋巴細胞群產生單克隆抗體

如果利用單個效應B淋巴細胞進行無性繁殖（克?。纬杉毎?，這樣的細胞群就有可能產生出化學性質單一、特異性強、靈敏度高的抗體——單克隆抗體。2.單克隆抗體如何產生大量的單一抗體呢？2.單克隆抗體②什么細胞能無限增殖？癌細胞③有什么方法將這兩種細胞的特點結合起來？動物細胞融合①體外培養的條件下，一個B淋巴細胞能不能無限增殖？不能,單個B淋巴細胞壽命有限，又因為能產生抗體的B淋巴細胞屬于高度分化的細胞，不能無限繁殖不可能無限增殖。B淋巴細胞骨髓瘤細胞動物細胞融合動物細胞培養單克隆抗體雜交瘤細胞米爾斯坦設想：如果把一種B淋巴細胞與能在體外大量增殖的骨髓瘤細胞進行融合，所得到的融合細胞就能大量增殖，產生足夠數量的特定抗體。1975年成功獲得單克隆抗體1984年獲得了諾貝爾生理學或醫學獎科勒英國科學家德國科學家2.單克隆抗體用特定的抗原免疫，從小鼠的脾中得到能產生特定抗體的B淋巴細胞。用特定的選擇培養基進行篩選∶在該培養基上，未融合的親本細胞和融合的具有同種核的細胞都會死亡，只有融合的雜交瘤細胞才能生長。單克隆抗體的制備過程：2.單克隆抗體幾種融合細胞？BB、B瘤、瘤瘤√單克隆抗體的制備過程：2.單克隆抗體對選擇培養的雜交瘤細胞進行克隆化培養和抗體檢測，經多次篩選，就可獲得足夠數量的能分泌所需抗體的細胞。單克隆抗體的制備過程：2.單克隆抗體將抗體檢測呈陽性的雜交瘤細胞在體外條件下大規模培養，或注射到小鼠腹腔內增殖。小鼠腹腔內培養小鼠腹水中提取體外培養細胞培養液提取既能迅速大量繁殖，又能產生專一抗體的雜交瘤細胞（一選）選擇性培養基：篩選出雜交瘤細胞2.單克隆抗體原理：選擇培養基只允許雜交瘤細胞生長、增殖，未融合的親本細胞和融合了同種核的細胞不能生存小資料：細胞合成DNA有D和S兩條途徑，其中D途徑能被氨基嘌呤阻斷。①人淋巴細胞中有這兩種DNA的合成途徑，但一般不分裂增殖。

②鼠骨髓瘤細胞中只有D途徑，沒有S途徑，可是能不斷分裂增殖。在培養液中加入氨基嘌呤，收集雜交瘤細胞！將雜交瘤細胞群稀釋，約每孔1個進行培養（克隆化培養）一段時間后，用標記的抗原檢測每個小孔上清液里是否含有我們需要的特異性的抗體（抗原抗體能結合即為陽性孔）（二選）：篩選能產生所需專一抗體的雜交瘤細胞方法：克隆化培養和專一抗體檢測2.單克隆抗體AB1、AB2、AB3……經過多次克隆化培養以及有限稀釋法的篩選，就能選出需要的那種雜交瘤細胞（AB3）多孔細胞培養板注射特定蛋白免疫小鼠培養小鼠骨髓瘤細胞B淋巴細胞骨髓瘤細胞多種細胞多種雜交瘤細胞能分泌所需抗體的雜交瘤細胞選擇培養基克隆化培養專一抗體檢測注射到小鼠腹腔內增殖體外培養單克隆抗體融合2.單克隆抗體動物細胞融合動物細胞培養篩選一篩選二特異性強、靈敏度高、可大量制備3.單克隆抗體的應用資料1.用抗人絨毛膜促性腺激素單克隆抗體做成的"早早孕診斷試劑盒"，在妊娠第8天就可以作出診斷，這比原來的診斷方法提前了10d左右，可以避免孕婦在不知道妊娠的情況下因服用藥物而對胎兒造成不利影響。該方法檢測的準確率在90%以上。女性懷孕后會分泌一種糖蛋白——人絨毛膜促性腺激素（HCG），尿液中會檢出HCG的存在。用抗HCG單克隆抗體制備的試紙可以測試女性是否懷孕。①作為診斷試劑：(最廣泛的用途)②用于疾病的治療和運載藥物(主要用于癌癥的治療)生物導彈——單克隆抗體＋抗癌藥物(放射性同位素/細胞毒素）3.單克隆抗體的應用單克隆抗體：(1).特異性強、靈敏度高

生物導彈單抗抗癌藥物★原理：★組成：(2).療效高、毒副作用?。翰粨p傷正常細胞，減少劑量導向作用，將藥物定向帶到癌細胞所在位置抗癌藥物：殺死癌細胞1.除了細胞毒素，還有哪些物質理論上可以作為ADC偶聯的藥物？①可以用放射性同位素標記單克隆抗體進行靶向放療；②一些作用于細胞信號轉導通路的藥物可以通過阻斷腫瘤細胞的信號通路來抑制其生長，理論上也可以將這些藥物與單克隆抗體結合進行治療。3.單克隆抗體的應用3.單克隆抗體的應用兩個過程動物細胞融合過程單克隆抗體制備過程三個“一”一個誘導細胞融合的新方法

－－滅活病毒一個新細胞－－雜交瘤細胞一個優勢－－單克隆抗體特異性強、靈敏度高、可大量制備的優勢一、概念檢測1.下列有關動物細胞融合與植物體細胞雜交比較的敘述，錯誤的是（

）A.它們的原理都涉及細胞膜的流動性B.都可以用電融合法或PEG融合法誘導融合C.融合前都需用纖維素酶或果膠酶處理細胞D.前者主要是為了獲得細胞產品，后者主要是為了獲得雜種植株2.科學家以SARS病毒的核衣殼蛋白為抗原，制備出了單克隆抗體。下列相關敘述正確的是（

）A.利用該單克隆抗體可以診斷是否感染SARS病毒B.體外培養單個B淋巴細胞可以獲得針對SARS病毒的單克隆抗體C.將等量B淋巴細胞和骨髓瘤細胞混合，經誘導后融合的細胞即為雜交瘤細胞D.將純化的核衣殼蛋白反復注射到小鼠體內，從小鼠血清中分離出的抗體為單克隆抗體CA二、拓展應用假如你掌握了動物細胞融合技術，你想用這種技術來解決哪些問題?解決這些問題的大致思路是怎樣的?這樣做會有什么風險?請查閱相關資料，完善自己的思路，并形成文字報告，與同學交流。提示：可以利用動物細胞融合技術培育多倍體胚胎，研究其發育機制，甚至可能培育出新的物種。但是，目前相關技術還不成熟，存在融合率低、胚胎死亡率高等問題，并且還可能帶來一些倫理方面的問題。4.下圖表示抗人體胃癌的單克隆抗體的制備過程，下列有關敘述不正確的是A．圖中實驗小鼠注射的甲是能與抗人體胃癌抗體特異性結合的抗原B．利用聚乙二醇、滅活的病毒和電激等方法均可誘導細胞融合獲得乙C．用特定的選擇性培養基對乙篩選，融合細胞均能生長，未融合細胞均不能生長D．丙需進行克隆化培養和抗體檢測，經多次篩選后可獲得大量能分泌所需抗體的丁C單克隆抗體5.英國科學家威爾穆特首次用羊的體細胞、乳腺細胞