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職業教育醫學生物技術專業教學資源庫動物克隆胚胎的激活職業教育醫學生物技術專業教學資源庫

克隆胚胎的激活是體細胞克隆技術的關鍵環節。體細胞克隆胚胎的充分激活是保證胚胎正常發育的先決條件，只有在去核卵母細胞充分激活的情況下才可以指導移入的核發生重編程。目前對克隆胚胎的激活方法有電激活、化學激活和電刺激結合化學激活。職業教育醫學生物技術專業教學資源庫2.1電激活

電刺激可產生顯著的跨膜Ca2+內流。一般認為短而高的直流電脈沖可導致真核生物質膜脂雙層不穩定。這種可逆的不穩定使得質膜瞬間產生小孔洞，便于細胞內外離子和大分子的交換。職業教育醫學生物技術專業教學資源庫2.1電激活

孔洞的大小受質膜電位變化、脈沖時程、培養液離子強度以及細胞類型等多個因素影響。在細胞外Ca2+存在時，電穿孔可在多種動物上誘導卵母細胞活化。如兔卵被刺激激活的效果取決于操作液中Ca2+的有無。這表明是Ca2+內流而非電刺激本身具有直接的激活作用。職業教育醫學生物技術專業教學資源庫2.1電激活

根據在核移植前或核移植后進行激活而分為融合前激活、融合激活和融合后激活。

融合前激活，獲得的卵母細胞是萬能受體，即供體細胞不需要同期化，處于任何細胞周期的供體核移入該卵母細胞質中都有發育為成活個體的潛能。首例體細胞克隆山羊就是通過這種方案取得成功的。職業教育醫學生物技術專業教學資源庫2.1電激活

融合同時激活和融合后激活是最常采用的激活方法，尤其是融合后激活法，可以使供體核與卵胞質充分的相互作用，有利于供體核的重編程。職業教育醫學生物技術專業教學資源庫2.2化學激活

常用克隆胚胎的化學激活物質有乙醇、離子霉素、鈣離子載體、放線菌酮和6-DMAP（6-二甲氨基嘌呤）。職業教育醫學生物技術專業教學資源庫2.2化學激活

例如7%乙醇，把需激活的重組卵放入含7%乙醇的培養液中，在37℃、CO2培養箱中處理5min或室溫下處理7min,洗凈后進行培養。離子霉素(ionomycin),使用濃度為5mol/L,處理時間為4～5min；6-DMAP，使用濃度為1.9～2mmol/L,處理時間為3～5h或更長。職業教育醫學生物技術專業教學資源庫2.3電激活結合化學刺激

首先以電刺激激活重構胚胎，然后再放入含放線菌酮的培養液滴培養一段時間，進一步維持MPF（促成熟因子）活性處于低水平。為了減少重編程期間對供體核染色體的過度作用，放線菌酮的作用時間一般是3～5h,之后將克隆胚胎放入不含放線菌酮的相同培養液滴中培養。職業教育醫學生物技術專業教學資源庫

克隆胚胎的激活是哺乳動物體細胞克隆成功的關鍵環節之一。上述的激活方案中最為常用的是電刺激誘導融合，在融合

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