菌種保存、傳代、使用、銷毀管理規(guī)程,操作規(guī)程?建立菌種保存、傳代、使用、銷毀的標準操作規(guī)程，確保菌種的生物學特性穩(wěn)定，防止菌種污染、變異和丟失，保證檢驗工作的準確性和可靠性。二、適用范圍適用于本實驗室所有菌種的保存、傳代、使用、銷毀管理。三、職責1.質量管理部門負責制定和修訂菌種保存、傳代、使用、銷毀管理規(guī)程。監(jiān)督檢查菌種管理的執(zhí)行情況。2.微生物實驗室負責菌種的保存、傳代、使用和日常管理工作。按照規(guī)定的方法和條件進行菌種操作，確保菌種質量。3.相關使用部門負責本部門所需菌種的領用、使用和歸還，并確保菌種在使用過程中的安全和正確。四、菌種的分類與編號1.分類依據(jù)根據(jù)菌種的來源、特性、用途等進行分類，如細菌、真菌、放線菌等。2.編號規(guī)則采用統(tǒng)一的編號系統(tǒng)，編號應包含菌種名稱、來源、年份、序號等信息，便于識別和管理。例如：BS202301，其中BS表示細菌菌種，2023表示年份，01表示該年份的第1個編號。五、菌種的保存1.保存條件低溫保存：大部分菌種采用甘油管冷凍保存于80℃冰箱。凍干保存：對于一些需要長期保存且對活性要求較高的菌種，采用凍干技術保存于20℃冰箱或更低溫度。2.保存方法甘油管保存取對數(shù)生長期的新鮮培養(yǎng)物，離心收集菌體。用適量的無菌甘油（終濃度一般為15%20%）重懸菌體，充分混勻。分裝于無菌的凍存管中，每管12ml，標注菌種名稱、編號、日期等信息。直接放入80℃冰箱保存。凍干保存準備凍干保護劑，常用的有脫脂牛奶、蔗糖等。將培養(yǎng)好的菌體與適量的凍干保護劑混合均勻。分裝于無菌的凍干管中，每管0.51ml。采用凍干機進行凍干處理，凍干后的菌種密封保存于20℃冰箱或更低溫度。3.保存期限定期對保存的菌種進行復蘇檢查，一般每半年至一年復蘇一次。對于仍具有活性的菌種，可繼續(xù)保存；對于活性喪失或污染的菌種，應及時處理。不同菌種的具體保存期限根據(jù)其特性和相關文獻資料確定，一般細菌菌種可保存35年，真菌菌種可保存510年。六、菌種的傳代1.傳代原則嚴格控制傳代次數(shù)，避免因過度傳代導致菌種變異。傳代應在無菌條件下進行，防止污染。2.傳代方法斜面接種傳代從保存的菌種管中挑取少量菌苔，接種于新鮮的斜面培養(yǎng)基上。置于適宜的培養(yǎng)溫度和條件下培養(yǎng)，待斜面長滿菌落后，即為傳代后的菌種。液體接種傳代取適量保存的菌種，接種于液體培養(yǎng)基中。置于搖床或適宜的培養(yǎng)條件下培養(yǎng)，待菌液達到一定濃度后，即為傳代后的菌種。3.傳代次數(shù)一般細菌菌種傳代次數(shù)不超過5代，真菌菌種傳代次數(shù)不超過3代。特殊情況下，如需增加傳代次數(shù)，應進行充分的評估和驗證，并記錄相關信息。七、菌種的使用1.使用申請使用部門需要領取菌種時，應填寫《菌種使用申請表》，注明菌種名稱、編號、用途、使用數(shù)量、預計使用時間等信息。申請表經部門負責人審核簽字后，提交至微生物實驗室。2.菌種發(fā)放微生物實驗室收到申請表后，核對申請信息，確認無誤后，按照規(guī)定的程序發(fā)放菌種。發(fā)放的菌種應保證活性良好，無污染跡象，并向使用部門提供菌種的相關信息和使用注意事項。3.使用記錄使用部門應建立菌種使用臺賬，詳細記錄菌種的領取時間、使用情況、剩余菌種數(shù)量、歸還時間等信息。使用過程中應嚴格按照操作規(guī)程進行，確保菌種的正確使用和安全。4.菌種歸還使用完畢后，使用部門應及時將剩余菌種歸還至微生物實驗室，并在臺賬上記錄歸還情況。微生物實驗室對歸還的菌種進行檢查，如發(fā)現(xiàn)菌種有污染、變異等情況，應及時與使用部門溝通并采取相應措施。八、菌種的銷毀1.銷毀原因菌種保存期限屆滿且不再需要繼續(xù)保存。菌種發(fā)生污染、變異，已失去使用價值。因工作需要，不再使用的特定菌種。2.銷毀申請由微生物實驗室填寫《菌種銷毀申請表》，說明銷毀菌種的名稱、編號、銷毀原因等信息。申請表經質量管理部門審核批準后，方可進行銷毀操作。3.銷毀方法高壓蒸汽滅菌：對于一些非致病性的細菌和真菌菌種，可采用高壓蒸汽滅菌法進行銷毀。將菌種管置于高壓蒸汽滅菌鍋中，在121℃、1520分鐘的條件下進行滅菌處理。化學消毒：對于一些對熱敏感的菌種或含有特殊成分的菌種，可采用化學消毒劑進行消毒處理。常用的化學消毒劑有含氯消毒劑、過氧乙酸等，按照規(guī)定的濃度和時間進行處理。焚燒：對于一些烈性傳染病菌或具有潛在危害的菌種，應采用焚燒的方法進行銷毀，確保徹底消除菌種的活性。4.銷毀記錄微生物實驗室應詳細記錄菌種的銷毀過程，包括銷毀時間、銷毀方法、操作人員等信息。銷毀記錄應保存至少3年，以備追溯和查詢。九、菌種的標識與管理1.標識要求菌種保存管、凍干管等容器上應清晰標注菌種名稱、編號、保存日期、傳代次數(shù)等信息。標識應使用耐久性好的材料制作，確保在保存和使用過程中不褪色、不脫落。2.庫存管理微生物實驗室應建立菌種庫存臺賬，記錄菌種的入庫、保存、傳代、使用、銷毀等情況。定期對菌種庫存進行盤點，確保賬物相符。如發(fā)現(xiàn)菌種數(shù)量不符或其他異常情況，應及時查找原因并進行處理。3.環(huán)境要求菌種保存場所應保持清潔、干燥、通風良好，溫度和濕度應符合菌種保存的要求。定期對保存場所進行消毒和清潔，防止菌種受到污染。十、人員培訓1.培訓計劃質量管理部門應制定菌種管理相關的培訓計劃，定期組織微生物實驗室人員和相關使用部門人員進行培訓。培訓內容包括菌種保存、傳代、使用、銷毀的操作規(guī)程、質量控制要求、安全注意事項等。2.培訓方式采用集中授課、現(xiàn)場演示、操作練習等多種培訓方式，確保培訓效果。培訓后應進行考核，考核合格者方可從事相關菌種管理工作。十一、質量控制1.復蘇檢查定期對保存的菌種進行復蘇檢查，觀察菌種的生長情況、形態(tài)特征等是否符合原菌種的特性。如發(fā)現(xiàn)復蘇后的菌種與原菌種特性不符，應及時進行評估和處理，如重新鑒定、廢棄等。2.純度檢測對傳代后的菌種進行純度檢測，采用平板劃線、革蘭氏染色、生化鑒定等方法，確保菌種的純度。如發(fā)現(xiàn)菌種不純，應重新進行分離純化或廢棄該菌種。3.記錄審核定期對菌種保存、傳代、使用、銷毀等記錄進行審核，檢查記錄的完整性、準確性和規(guī)范性。如發(fā)現(xiàn)記錄存在問題，應及時要求相關人員進行整改。十二、安全注意事項1.生物安全防護操作人員應嚴格遵守生物安全操作規(guī)程，穿戴好防護用品，如工作服、口罩、手套等。在進行菌種操作時，應在生物安全柜或其他防護設備內進行，防止菌種泄漏和擴散。2.廢棄物處理菌種操作過程中產生的廢棄物，如廢棄的培養(yǎng)基、菌種管等，應按照生物廢棄物處理規(guī)定進行處理，防止污染環(huán)境。3.應急處理制定菌種操作過程中的應急處理預案，如發(fā)生菌種泄漏、人員感染等