臨床醫學檢驗技術11臨床醫學檢驗技術臨床醫學檢驗技術12前言

“工欲善其事，必先利其器”

臨床醫學檢驗技術13第一章概述技術和儀器在檢驗醫學中的重要作用

項目、方法和儀器的評估指標

檢驗技術基本知識

臨床醫學檢驗技術14第一節技術和儀器在檢驗醫學中的重要作用技術和儀器的重要作用：技術和儀器是實驗室工作人員的主要工具技術和方法

儀器實驗室工作者臨床檢驗診斷臨床醫學檢驗技術15臨床醫學檢驗技術16選擇合適的技術和項目是實驗室的重要工作：疾病診斷項目檢測方法選擇:WHY?臨床醫學檢驗技術17HOW?疾病項目方法選擇原則:項目選擇:方法選擇:實用性與可靠性①利用項目評估指標，了解項目的特性，優、缺點；②參考國內外項目應用資料，特別注意權威學術團體制訂的指南、準則，如有國家標準更好；③現有的儀器是否適合該項測試；④臨床需要。臨床醫學檢驗技術18選擇合適的儀器是確保實驗室水平和質量的保證：儀器類型選擇和型號的選擇

首先要收集多方面資料，了解各種相似機器的特性和原理、應用范圍，儀器的敏感性、特異性、重復性，運用速度應和實際工作相適應(保留一定的潛在能力，如比當前工作能力多20％)；

其次從公司和其他用戶處了解故障率，維修工程師的水平和最短維修期，機器價格，培訓情況，試劑是否開放等臨床醫學檢驗技術19了解實驗室和現代醫學的最新發展動態，使實驗室始終處于先進水平實驗醫學的發展:：

l．從技術角度看實驗醫學發展的基本趨勢是能測定的物質越來越多，由宏觀到微觀，由宏量到微量，更準確、更本質地反映生命科學的規律。２．從儀器角度看隨著生物物理技術、光電信號轉化技術的發展，特別是計算機的運用，大量新型儀器進入了實驗室，檢測自動化、微量化、多樣化。臨床醫學檢驗技術110

自動化的優點:①提高工作效率20％～50％②減少人為的差錯③改進方法④降低試劑用量、成本⑤加快檢測周期(TAT)⑥試驗方法標準化、規范化⑦可以使用一些手工方法無法做到的精密試驗，如連續監測法等臨床醫學檢驗技術111第二節項目、方法和儀器的評估指標評估指標分三個層次：評價項目的指標確定項目后選擇具體方法和儀器的指標常規工作的質量控制指標臨床醫學檢驗技術112一、項目的評估指標:

評估對象：臨床應用價值，即檢驗項目對臨床某種疾病或臨床異常情況的診斷、病程監測、療效評估、預后判斷的能力。1．金標準2．敏感性(sensitivity，靈敏度)3．特異性(specificity)4．預測值(predictivevalue，PV)5．準確度(accuracy6．受試者工作曲線(receiveroperatingcharacteristiccurve，ROC)臨床醫學檢驗技術113金標準與診斷試驗定義:

金標準：通過活檢、尸檢、外科手術、隨訪等所作出的決定性診斷，公認最可靠，即確診試驗。診斷試驗：指一般臨床實驗檢查方法，費用低、操作簡單，對病人無損害，快速等優點。

臨床醫學檢驗技術114診斷試驗和金標準的應用：診斷試驗金標準臨床上診斷：提供病人患病或不患病的可能性金標準診斷試驗診斷結果為患者和非患者診斷試驗的性能評價：診斷結果為患者和非患者測得其陰性或陽性結果拿不準進行各種分析臨床醫學檢驗技術115臨床醫學檢驗技術116臨床醫學檢驗技術117ROC的作用:

1．用于確定醫學決定值

2．比較項目的優劣，ROC的右側面積越大，該標志診斷價值越大臨床醫學檢驗技術118二、方法、儀器和試劑的評估指標評估對象：方法（儀器和試劑）本身穩定性和可靠性1．精密度2．準確度3．分析靈敏度(最低檢測限)4．分析范圍5．分析干擾(方法的特異性)6．受試者工作曲線和醫學決定值7．性價比臨床醫學檢驗技術1191．精密度定義：通過重復性試驗計算測定結果間的一致性，強調的是隨機誤差1、按正態分布的計量資料的不精密度通常用標準差(s)和變異系數(CV％)來表示2、計數資料的精密度往往用觀察符合率和卡帕(Kappa)值來表示表示：臨床醫學檢驗技術1202(ad－bc)(a＋b)(b＋d)＋(a＋c)(c＋b)Kappa指數＝

真陽性＋真陰性符合率＝————————————————×100%

真陽性＋假陽性＋真陰性＋假陰性計量資料計數資料臨床醫學檢驗技術121批內是將評價樣品隨機插入患者標本中被檢測，在一批內連做20次；收集試驗數據，計算均值、標準差和變異系數。批間是每天做一次評價樣品，累積20次結果。收集試驗數據，計算均值、標準差和變異系數。測定：臨床醫學檢驗技術1222．準確度定義：待測物的測定值與其真值的一致性程度，強調的也是誤差不準確度＝總誤差＝分析過程的隨機誤差＋分析過程的系統誤差

表示（實際工作中）：不精密度不正確度臨床醫學檢驗技術123測定：

對一分析物重復多次測定，所得均值與其真值或參考靶值之間的差異亦即偏倚即為測定的不正確度．回收試驗、干擾試驗、線性范圍試驗系統誤差：總誤差：對比試驗臨床醫學檢驗技術1243．分析靈敏度(最低檢測限)靈敏度（sensitivity，S）定義：是指檢測信號變化量（Δy）與被測物變化量（Δx）的比值，又稱為敏感度檢測限（DL、D或LOD）定義：在給定的置信水平上能夠檢出被測物的最小濃度或最小質量，又稱檢出限、檢測低限、檢出低限。臨床醫學檢驗技術1254．分析范圍分析測量范圍(AMR)，分析方法能直接測定樣本中的待測物質而不需稀釋或濃縮或其他的預處理臨床可報告范圍(CRR)，樣本可通過稀釋或濃縮或其他的預處理，以擴展其準確測定的范圍5．分析干擾(方法的特異性)干擾試驗臨床醫學檢驗技術126干擾試驗實例原理：

將可能引起干擾的物質配成一系列濃度的溶液加到病人樣品中成為若干個干擾樣本，在原樣品中加入相同量的無干擾物質的溶劑作為基礎樣品，均用候選方法測定，各干擾樣本與基礎樣品結果之差表示一定濃度下該干擾物質產生的干擾值（偏差）。

臨床醫學檢驗技術127試劑：

1.樣品收集無肝炎病毒污染、無溶血、無脂濁的人（或動物）血清，采用候選方法測定其濃度，并用生理鹽水稀釋至3.0mmol/L2.尿酸校準液

濃度為：4.5mmol/L和9.0mmol/L。3.其他試劑

GOD-POD法測定血糖試劑

臨床醫學檢驗技術128操作步驟：1.樣本制備：

原樣品：混合血清

基礎樣品：混合血清0.9ml+蒸餾水0.1ml

干擾樣本1：混合血清0.9ml+4.5mmol/L尿酸0.1ml

干擾樣本2：混合血清0.9ml+9.0mmol/L尿酸0.1ml2.血糖濃度測定對以上各樣品按GOD-POD法雙份測定，結果取平均吸光度值、平均濃度值。臨床醫學檢驗技術129計算：臨床醫學檢驗技術130干擾試驗習題

某血糖測定樣本濃度為6.5mmol/L，通過干擾試驗求得每mmol/L的尿酸的平均干擾值為-0.7，求當尿酸濃度為0.4mmol/L時，該法測得的恒定系統誤差值以及血糖標本的實際濃度。臨床醫學檢驗技術131回收試驗目的：

用來考察候選方法對加入到常規分析樣品中的純分析物含量進行準確測定的能力，其目的是檢測候選方法的比例系統誤差（PE），以恒量該方法的準確度。意義：測得的比例系統誤差（PE）值隨被測物濃度的增加而增加。實驗內容臨床醫學檢驗技術132原理：

將濃度已知的含被測物的各校準液加入至病人樣品（原樣品）中成為一系列分析樣品（回收樣品），在原樣品中加入相同體積的無被測物的溶劑作為基礎樣品，用候選方法對這些樣品進行同步測定，計算回收率、平均回收率，考察候選方法的比例系統誤差。一般項目的平均回收率應在95％～105％之間。臨床醫學檢驗技術133試劑：

1.樣品收集無肝炎病毒污染、無溶血、無脂濁的人（或動物）血清，采用候選方法測定其濃度，并用生理鹽水稀釋至3.0mmol/L。2.葡萄糖校準液濃度分別為：36.0mmol/L、70.0mmol/L。3.其他試劑GOD-POD法測定血糖試劑臨床醫學檢驗技術134操作步驟：1.樣品制備：

原樣品：混合血清

基礎樣品：混合血清0.9ml+蒸餾水0.1ml

回收樣品1：混合血清0.9ml+36.0mmol/L葡萄糖校準液0.1ml

回收樣品2：混合血清0.9ml+70.0mmol/L葡萄糖校準液0.1ml2.血糖濃度測定按照GOD-POD法對以上各樣品進行雙份檢測，結果取平均吸光度值、平均濃度值。臨床醫學檢驗技術135計算：1.計算公式：臨床醫學檢驗技術136

如果某回收率為98％，原樣本的測定值為10.0mmol/L，求該法的比例系統誤差，比例系統誤差值，用該法測得原樣本的準確值。

回收試驗習題臨床醫學檢驗技術1376．受試者工作曲線和醫學決定值醫學決定水平，就是臨床按照不同病情給予不同處理的指標閾值醫學決定值,根據不同的目的，研究健康(或稱非病理的)與病理的分界水平受試者工作曲線臨床醫學檢驗技術138三、常規工作中的質量監控指標質量監控的目的：

質量控制方法的核心：由檢出隨機誤差和系統誤差的質量控制規則組成

為了監測和評估實驗室的工作質量，排除檢測過程中導致不滿意的原因質量監控的內容：

分析前、分析中、分析后質量控制臨床醫學檢驗技術139

圖全面質量控制實驗保證體系分析后質量評估分析中質量控制

病人準備檢查病人申請檢驗標本采集標本運送標本處理人員素質工作環境實驗用水實驗室管理儀器質量保證方法選擇與評價試劑選擇與評價建立操作規程室內質控及分析標本分析測定臨床醫師反饋信息室內復查保留標本隨時復查運送報告病人投訴室間質評登記填發報告分析前質量保證分析中質量控制臨床醫學檢驗技術1401．室內質控指標(Internalqualifycontrol，IQC)

由實驗室工作人員采取一定的方法和步驟，連續評價本實驗室工作的可靠性程度，監測和控制本室常規工作的精密度，提高本室常規工作中批內、批間樣本檢驗的一致性。首先，選擇好質控物其次，室內質控要求每天至少檢測一次質控物，然后把結果繪制在質控圖上。最后,根據質控規則判斷分析結果在控或失控Ｌevey-Ｊennings質控Westgard多規則質控法臨床醫學檢驗技術141Ｌevey-Ｊennings質控d均數+2S-2S+3S-3S正常分布Ｌevey-Ｊennings質控圖臨床醫學檢驗技術142趨勢性變化漂移精度變化-S質控圖的常見的幾種常見的失控表現-3S+3S+2S-2Sd均數臨床醫學檢驗技術143Westgard多規則質控①12S警告規則：當同一批兩個水平的質控血清中的任意1份測定值超出±2S范圍，為“警報”信號。②13S失控規則：當同一批兩個水平的質控血清中的任意1份測定值超過±3S界限，為“失控”。提示存在隨機誤差。③22S失控規則：同一批兩個水平的質控品結果同方向超出±2S限值，或同一質控品連續兩次質控結果超出±2S限值為“失控”，多由系統誤差造成。④R4S失控規則：同一批中兩個水平的質控結果之差超出4S范圍，其中一個超出＋2S限值，另一個超出－2S限值，為“失控”，屬隨機誤差過大。⑤41S規則：當1份質控血清的測定結果連續4次同方向超過＋1S或－1S界限，或同一批兩個水平的質控血清的測定結果同時連續2次同方向超過＋1S或－1S界限時，為“失控”，一般由系統誤差所至。⑥10規則：當1份質控血清測定結果連續10次偏于均值一側時，或同一批兩個水平的質控血清的測定結果同時連續5次偏于一側時，為“失控”，是系統誤差所至。臨床醫學檢驗技術144臨床醫學檢驗技術1453．注意臨床反饋意見2．室間質控(exmnalqualifyassessment，EQA)

由第三方機構，采取一定的方法，連續、客觀地評價實驗室的結果，發現實驗室本身不易發現的不準確性，了解各實驗室之間結果的差異，幫助其校正，使其結果具有可比性。PT方案VIS評分法臨床醫學檢驗技術146第三節檢驗技術基本知識化學物質的基本要求標準品實驗室基本用品臨床醫學檢驗技術147一、化學物質的基本要求1、純水天然水自來水實驗用純水經簡單的物理、化學方法處理，除去懸浮物質和部分無機鹽經蒸餾、離子交換、活性炭吸附、超濾等處理，除去雜質(懸浮物,膠體物質,溶解物質)臨床醫學檢驗技術148表2-1美國NCCLS等級純水的規定及用途(1985)級別Ⅰ級Ⅱ級Ⅲ級pH未定未定5.0～8.0電阻率(MΩ·cm,25℃,最大量)102.01.0硅(mgSiO2/L,最大量)0.050.11.0微生物含量（每毫升最大菌落數）10103未定硅（mgSiO2/L，最大量）0.050.11.0微粒0.2μm微孔膜過濾未定未定有機物質活性碳過濾未定未定用途原子吸收，火焰光度，熒光，電解質，酶，高效層析，電泳，參比液，緩沖液。一般實驗室檢驗，器皿沖洗。器皿洗滌，要求不高的定性試驗。臨床醫學檢驗技術1492．試劑的純度要求臨床醫學檢驗技術150

1.一級優級純（G.R）又稱保證試劑，綠色標簽，該級別純度最高、雜質含量最低，適用于科研和配制校準溶液

.

2.二級分析純（A.R）又稱分析試劑，紅色標簽，該級別純度較高、雜質含量較低，適用于定性和定量分析.

3.三級化學純（C.P），藍色標簽，該級別質量略低于二級品，適用于一般定量分析和定性試驗

.4.四級實驗試劑（L.R），黃色標簽，該級別試劑質量較低、但比工業用高，適用于一般定性實驗

.普通生化檢驗準確的定量分析或配制校準溶液

臨床醫學檢驗技術151二、標準品1．原始參考品

是一種可以直接稱量、檢測、配制成任何濃度溶液的物質，可用以定標，國際理論應用化學聯合會(IntematlonalUnionofPureandAppliedChemistry，IUPAC)認為其純度達99．98％2．二級參考品

由原始標準品在特定的方法下標定的