1T/GXAQXXXX—2025實(shí)驗(yàn)動(dòng)物小鼠脊髓損傷模型制備方法本文件界定了實(shí)驗(yàn)動(dòng)物小鼠脊髓損傷模型制備方法的相關(guān)術(shù)語和定義、規(guī)定了基本條件、實(shí)驗(yàn)鼠選擇、造模前準(zhǔn)備、麻醉、SCI造模及術(shù)后護(hù)理。本文件適用于小鼠脊髓損傷模型制備，在飼養(yǎng)環(huán)境中，應(yīng)按照標(biāo)準(zhǔn)對小鼠脊髓損傷模型進(jìn)行檢測。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。RB/T210實(shí)驗(yàn)室能力驗(yàn)證動(dòng)物檢疫領(lǐng)域技術(shù)要求GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB14922實(shí)驗(yàn)動(dòng)物微生物、寄生蟲學(xué)等級及監(jiān)測GB14925實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境和設(shè)施GB19489實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求GB/T27416實(shí)驗(yàn)動(dòng)物機(jī)構(gòu)質(zhì)量和能力的通用要求GB/T39760實(shí)驗(yàn)動(dòng)物安樂死指南3術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1脊髓損傷SCI（spinalcordinjury）3.2BMS評分采用BassoMouseScale評分系統(tǒng)評估運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)情況。3.3假手術(shù)組（Sham）小鼠僅行椎板切除手術(shù)，未真正造成SCI，提供標(biāo)準(zhǔn)飲食和飲水。3.4對照組（Control）小鼠行椎板切除手術(shù)后，接受打擊法，擊打脊髓，造成SCI，提供標(biāo)準(zhǔn)飲食和飲水。4基本條件4.1人員、設(shè)備、繁殖與生產(chǎn)、使用、福利倫理應(yīng)按GB/T34791要求執(zhí)行。4.2飼料的營養(yǎng)成分應(yīng)符合GB14924.3的要求。4.3實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的環(huán)境及設(shè)施應(yīng)符合GB14925的要求。T/GXAQXXXX—202525實(shí)驗(yàn)鼠選擇5.1引種應(yīng)按GB/Z34792規(guī)定執(zhí)行。5.2隔離應(yīng)放入規(guī)定的隔離檢疫室或隔離器中，隔離觀察2天后，無異常情況的轉(zhuǎn)入動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室。如有異常的小鼠，應(yīng)進(jìn)行必要的微生物學(xué)質(zhì)量檢測。5.3性別應(yīng)選擇同一性別（如雄性）以減少性別對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。5.4年齡應(yīng)選擇相同年齡段（如6-8周齡），以確保生理狀態(tài)一致。5.5分組選取了6至8周齡的雌性C57BL/6小鼠，將其隨機(jī)劃分為兩個(gè)不同的實(shí)驗(yàn)組別(每組≥6只)。5.5.1假手術(shù)組5.5.2對照組5.6飼養(yǎng)管理5.6.1日常飼養(yǎng)應(yīng)根據(jù)地區(qū)、季節(jié)、設(shè)施設(shè)備條件的不同制定切實(shí)可行的管理操作規(guī)程。5.6.2人員進(jìn)入動(dòng)物設(shè)施應(yīng)按照進(jìn)入該級別動(dòng)物設(shè)施的操作規(guī)程進(jìn)行。5.6.3工作時(shí)留意是否有疾病征兆或死亡小鼠，并及時(shí)處理進(jìn)行診斷。5.7微生物、寄生蟲學(xué)質(zhì)量控制應(yīng)按照GB14922中規(guī)定執(zhí)行，監(jiān)測工作應(yīng)由專業(yè)人員完成。6造模前準(zhǔn)備6.1環(huán)境和設(shè)施應(yīng)符合GB14925的要求。6.2儀器和設(shè)備6.2.1脊髓損傷打擊器（HI-0400）。6.2.2經(jīng)滅菌的常規(guī)手術(shù)器械，包括手術(shù)刀柄、刀片、止血鉗、手術(shù)剪、手術(shù)鑷、腸鉗、持針器、縫針、縫線、創(chuàng)巾、敷料、綁定繩、毛巾等若干。6.2.3去毛器。6.2.4一次性5mL和10mL滅菌注射器若干。6.2.5保溫墊。6.3藥品6.3.1麻醉鎮(zhèn)痛藥品。6.3.1.1異氟烷。6.3.1.2鹽酸利多卡因注射液。6.3.1.3丁丙諾啡。6.3.2常規(guī)藥品T/GXAQXXXX—202536.3.2.1碘伏。6.3.2.2酒精。6.3.2.3生理鹽水。6.3.2.4廣譜抗生素（如頭孢類等）。6.3.2.5新潔爾滅溶液。7麻醉7.1麻醉方法采用吸入麻醉結(jié)合局部麻醉，應(yīng)符合GB/T27416的規(guī)定。7.2步驟7.2.1手術(shù)前禁食12h。7.2.2麻醉前檢查呼吸麻醉設(shè)備，確認(rèn)監(jiān)護(hù)設(shè)備的功能完整性以及麻醉機(jī)的氣密性。7.2.3稱重，記錄后將小鼠放置麻醉盒，麻醉實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用標(biāo)準(zhǔn)吸入性麻醉劑異氟烷，使用濃度是3%的異氟烷和氧氣的混合氣體進(jìn)行吸入誘導(dǎo)麻醉，并將小鼠以臥位穩(wěn)定地放置于潔凈的實(shí)驗(yàn)手術(shù)板上并給予異氟烷持續(xù)麻醉（2。7.2.4局部麻醉采取腹腔注射與切口線性阻滯麻醉。根據(jù)體重?fù)Q算出麻醉劑的劑量，麻醉劑用量為0.2mg/kg。注射器抽取所需的麻醉劑，然后將其前后肢固定并進(jìn)行麻醉，進(jìn)針角度為45°,插入小鼠腹腔，進(jìn)入一瞬間出現(xiàn)落空感。應(yīng)防止注射針刺入內(nèi)臟，針頭進(jìn)入回抽注射器未見血液后緩慢勻速推入麻醉劑。推注鹽酸利多卡因（0.05mg/kg）。手術(shù)切口可使用鹽酸利多卡因（0.2mg/kg）進(jìn)行線性阻滯麻醉。8SCI造模8.1術(shù)部選擇從小鼠頸部從前往后按壓棘突(有明顯突起處即為T10)，以此處為中心上下左右2-3cm對小鼠進(jìn)行備皮。標(biāo)記以T10棘突為中心，取背部正中切口，長約2cm手術(shù)切口。此過程勿將小鼠背部劃傷，防止感染。8.2術(shù)部消毒8.2.1在手術(shù)準(zhǔn)備區(qū)，用溫?zé)崴潦酶蓛簦儆?.1％潔兒滅溶液清洗術(shù)部。8.2.2用滅菌紗布擦干，使用75％酒精脫脂。8.2.3用1％碘伏消毒術(shù)部，使用75％酒精脫碘，覆蓋無菌創(chuàng)巾。8.3SCI手術(shù)8.3.1以T10棘突為中心作手術(shù)切口長約2cm，用手術(shù)刀劃開皮膚，銳性切開椎旁肌并向脊柱兩側(cè)分離，顯露T8-L1椎體棘突及椎板，使用咬骨鉗小心咬出T9-T11棘突及全椎板，進(jìn)而暴露其T10處脊椎。8.3.2將小鼠規(guī)定于脊髓損傷打擊器臺面，對脊髓T10處進(jìn)行打擊，打擊力度設(shè)置為：輕度脊髓損傷60（N）及中度脊髓損傷70-75（N）。致傷瞬間，小鼠痙攣性擺尾，雙下肢及軀體回縮撲動(dòng)后雙下肢癱瘓，為造模成功標(biāo)志。8.3.3完成打擊后小鼠T10脊髓處會(huì)有明顯充血，對小鼠進(jìn)行由內(nèi)至外的縫合，進(jìn)而對小鼠傷口進(jìn)行消毒。8.3.4雙后肢各注射0.5ml生理鹽水用以補(bǔ)液，任意一側(cè)后肢肌肉注射500000U的氨芐青霉素鈉用以防止感染。9術(shù)后護(hù)理9.1將小鼠安置在保溫墊上，直至其完全恢復(fù)意識。T/GXAQXXXX—202549.2應(yīng)為術(shù)后小鼠留有適當(dāng)活動(dòng)的飼養(yǎng)空間，以防止腹腔臟器發(fā)生粘連。9.3在SCI術(shù)后的三天內(nèi)，每天兩次給予丁丙諾啡（0.05mg/kg）以