PAGEPAGE3課題3血紅蛋白的提取與分別一、選擇題1．為防止血液凝固，在采血容器中要預先加入下列哪一種抗凝血劑(D)A．NaCl B．甲苯C．蒸餾水 D．檸檬酸鈉[解析]采集到簇新的血液時，要加入檸檬酸鈉，目的是防止血液凝固。2．將攪拌好的混合液轉移到離心管中，離心后，可以明顯看到試管中的溶液分為4層，其中第3層是(C)A．無色透亮的甲苯層B．脂溶性物質的沉淀層C．血紅蛋白的水溶液D．其他雜質的暗紅色沉淀物[解析]分別血紅蛋白溶液時，將攪拌好的混合液轉移到離心管中，經過中速長時離心后，可明顯看到試管中溶液分為4層，從上往下數，第1層為甲苯層，第2層為脂溶性物質的沉淀層，第3層為血紅蛋白水溶液，第4層為雜質沉淀層。3．紅細胞的洗滌過程錯誤的是(C)A．低速短時間離心，如500r/min離心2minB．離心后用膠頭吸管吸出上層透亮的黃色血漿C．將下層暗紅色的紅細胞液體倒入燒杯，再加入五倍體積的蒸餾水D．直至上清液中沒有黃色，表明紅細胞已洗滌干凈[解析]紅細胞的洗滌過程中，采納低速短時間離心，如500r/min離心2min，故A正確；紅細胞離心后用膠頭吸管吸出上層透亮的黃色血漿，故B正確；紅細胞的洗滌過程應當用生理鹽水洗滌，不能用蒸餾水洗滌，故C錯誤；紅細胞的洗滌過程中，直至上清液中沒有黃色，表明紅細胞已洗滌干凈，故D正確。4．在裝填凝膠柱時，不得有氣泡存在的緣由是(A)A．氣泡會攪亂洗脫液中蛋白質的洗脫次序，降低分別效果B．氣泡阻礙蛋白質的運動C．氣泡能與蛋白質發(fā)生化學反應D．氣泡會在裝填凝膠的時候，使凝膠不緊密[解析]裝填凝膠色譜柱時，色譜柱內不能有氣泡存在，因為氣泡會擾亂洗脫液中蛋白質中的洗脫次序，使得到的紅色帶區(qū)歪曲、散亂，降低分別效果。5．下列有關，“血紅蛋白提取和分別”的相關敘述中，正確的是(D)A．用蒸餾水進行紅細胞的洗滌，其目的是去除細胞表面的雜蛋白B．將血紅蛋白溶液進行透析，其目的是去除相對分子質量較大的雜質C．血紅蛋白釋放時加入有機溶劑，其目的是使血紅蛋白溶于有機溶劑D．整個過程不斷用磷酸緩沖液處理，是為了維持血紅蛋白的結構[解析]紅細胞的洗滌應用生理鹽水，其目的是去除血漿蛋白等雜質，有利于后續(xù)步驟的分別純化，而不是洗去細胞表面的雜蛋白，A項不正確。將血紅蛋白溶液進行透析，其目的是去除相對分子質量較小的雜質，B項不正確。血紅蛋白釋放時加入有機溶劑，其目的是溶解細胞膜，有利于血紅蛋白的釋放，而不是溶解血紅蛋白，C項不正確。整個過程不斷用磷酸緩沖液處理，是為了維持血紅蛋白的結構。D項正確。6．已知某樣品中存在甲、乙、丙、丁、戊5種蛋白質分子，分子大小、電荷的性質和數量狀況如圖所示，下列有關蛋白質分別的敘述正確的是(A)A．若將樣品以2000r/min的速度離心1.0min，分子戊在沉淀中，則丙也肯定在沉淀中B．若用凝膠色譜法分別樣品中的蛋白質，則分子甲移動速度最快C．將樣品裝入透析袋中透析12h，若分子丙保留在袋內，則乙也肯定保留在袋內D．若用SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳分別樣品中的蛋白質分子，則分子甲和分子丁形成的電泳帶相距最遠[解析]分子丙的相對分子質量大于戊，所以，在離心時戊存在于沉淀中，丙也肯定在沉淀中，A項正確。用凝膠色譜法分別蛋白質時，甲相對分子質量最小，簡單進入凝膠內部，則移動速度最慢，B項錯誤。分子丙的相對分子質量大于乙，則丙保留在袋內，乙可能在袋外也可能在袋內，C項錯誤。SDS—聚丙烯酰胺凝膠電泳的遷移速度完全取決于分子的大小，因此，分子甲與丙形成的電泳帶相距最遠，D項錯誤。二、非選擇題7．凝膠色譜技術不但應用于科學試驗探討，而且已經大規(guī)模地用于工業(yè)生產。下圖甲為凝膠色譜柱分別蛋白質的示意圖，圖乙為幾種被分別蛋白質相對分子質量大小與洗脫液的洗脫體積的關系，請據圖分析回答：(1)圖甲a、b均為蛋白質分子，其中先從層析柱中洗脫出來的是__a__，緣由是__a相對分子質量較大，無法進入凝膠內部的通道，只能在凝膠外部移動，路程較短，移動速度較快__。(2)自己制作凝膠色譜柱時，在色譜柱底部d位置相當于多孔板的結構可由__尼龍網和100目的尼龍紗__替代。(3)裝填凝膠色譜柱時，色譜柱內不能有氣泡存在，緣由是__氣泡會攪亂洗脫液中蛋白質的洗脫次序，降低分別效果__。(4)若圖乙被分別的蛋白質混合液中含有肌紅蛋白(相對分子質量為16900)、血清蛋白(相對分子質量為68500)、牛乳球蛋白(相對分子質量為35000)、牛胰島素(相對分子質量為5700)，則圖乙中A、B、C、D代表的物質依次是__牛胰島素、肌紅蛋白、牛乳球蛋白、血清蛋白__。[解析](1)由于不同蛋白質的相對分子質量不同，相對分子質量較大的蛋白質不能進入凝膠內部通道，只能在凝膠外部移動，路程短，速度快，易洗脫；相對分子質量較小的蛋白質則進入凝膠內部通道，路程長，速度慢。(2)凝膠色譜柱的制作：底部橡皮塞的凹穴上覆蓋尼龍網和100目的尼龍紗，相當于多孔板。(3)凝膠色譜柱的裝填：裝填時盡量緊密，不能有氣泡存在，因為氣泡會攪亂洗脫液中蛋白質的洗脫次序，降低分別效果。(4)據圖可知，四種蛋白質的相對分子質量漸漸增大，因此圖乙中A、B、C、D代表的物質依次是牛胰島素、肌紅蛋白、牛乳球蛋白、血清蛋白。8．如圖表示血紅蛋白提取和分別的部分試驗裝置，請據圖回答下列問題。(1)血紅蛋白是人和其他脊椎動物紅細胞的主要組成成分，它在紅細胞中的作用體現(xiàn)了蛋白質具有__運輸__功能。(2)甲裝置中，B是血紅蛋白溶液，則A是__磷酸緩沖溶液__；乙裝置中，C溶液的作用是__洗脫血紅蛋白__。(3)甲裝置用于__透析(粗分別)__，目的是__去除樣品中相對分子質量較小的雜質__。用乙裝置分別蛋白質的方法叫__凝膠色譜法__。(4)用乙裝置分別血紅蛋白時，待__紅色的蛋白質接近色譜柱的底端__時，用試管收集流出液，每5mL收集一管，連續(xù)收集。[解析](1)紅細胞中含有血紅蛋白，血紅蛋白可以運輸氧，其在紅細胞中的作用體現(xiàn)了蛋白質具有運輸功能。(2)由血紅蛋白提取和分別的試驗原理可知，甲裝置中，B是血紅蛋白溶液，則A是磷酸緩沖液，抵制外界酸、堿對溶液pH的干擾而保持pH穩(wěn)定；乙裝置中，C溶液的作用是洗脫血紅