ICS01.040.65

CCSB04

TB

團體標準

T/NAIAXXX—XXXX

釀酒葡萄及葡萄酒中氯酸鹽和高氯酸鹽

的測定液相色譜-質譜/質譜法

DeterminationofchlorateandperchlorateinGrapesandWine

Liquidchromatography-massspectrometry

XXXX-XX-XX發布XXXX-XX-XX實施

寧夏化學分析測試協會發布

釀酒葡萄及葡萄酒中氯酸鹽和高氯酸鹽的測定

液相色譜-質譜/質譜法

1范圍

本文件規定了釀酒葡萄及葡萄酒中氯酸鹽和高氯酸鹽含量的液相色譜-串聯質譜測定方

法。

本文件適用于釀酒葡萄及葡萄酒中氯酸鹽和高氯酸鹽含量的測定。

2規范性引用文件

下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版

本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本

文件。

GB/T6682分析實驗室用水規格和試驗方法

BJS201706食品中氯酸鹽和高氯酸鹽的測定

SN/T4089出口食品中高氯酸鹽的測定液相色譜-質譜/質譜法

3術語和定義

本文件沒有界定的術語和定義。

4原理

試樣采用不同體積比的乙腈水溶液高速勻漿提取，勻漿液經離心后，樣液用一定量的

C18和石墨化炭黑(GCB)分散凈化，采用液相色譜-質譜聯用儀檢測，保留時間和離子對定

性，基質外標法定量。

5試劑

除非另有規定外，所有試劑均為分析純，水符合GB/T6682中規定的一級水。

5.1乙腈（CH3CN）：色譜純。

5.2乙酸（CH3COOH）：色譜純。

5.3甲酸銨（HCOONH4）：液質聯用級。

5.4石墨化炭黑(GCB)：120-400目。

5.5C18:40～63μm,100gm。

5.6標準品：氯酸鈉(CAS登錄號CDAA-S-200074-SD，純度＞99%)、高氯酸鈉(CAS登

錄號CDAA-S-200052S，純度＞99%)。

5.7甲酸銨溶液配制

5.7.120mmol/L甲酸銨溶液：稱取0.6306g甲酸銨（5.4），用超純水溶解并稀釋至500

mL，混勻。

5.7.250%乙腈+1%乙酸溶液：量取50mL乙腈（5.1）于250mL燒杯中，加入50mL

去離子水，再加入1.00mL乙酸（5.2），混勻。

5.8標準溶液的配制

5.8.1混合標準中間液：分別準確量取1000mg/L的氯酸鹽和高氯酸鹽標準儲備液0.25

mL，于25.0mL容量瓶中，用超純水稀釋至刻度，搖勻，制成10.0mg/L氯酸鹽、高氯酸

鹽混合標準中間液，4℃保存。

5.8.2混合標準工作溶液：分別準確量取混合標準中間液2.50mL，用超純水稀釋至刻

度，搖勻，制成1.0mg/L的氯酸鹽、高氯酸鹽混合標準工作液，4℃保存。

5.8.3基質混合標準工作溶液：根據需要分取適量混合標準溶液，加入一定量的空白基質

溶液，混勻。基質混合標準工作溶液現用現配。

6儀器和設備

6.1液相色譜質譜/質譜儀：配有電噴霧離子源(ESI)。

6.2渦旋混合器。

6.3高速勻質器。

6.4組織搗碎機。

6.5離心機：4000r/min。

6.6電子天平：感量分別為0.0001g和0.01g。

6.7具塞離心管：50mL。

6.8濾膜：0.22μm，有機相。

7試樣制備與保存

釀酒葡萄樣品去除果梗、雜物后，用組織搗碎機打漿，置于樣品瓶中，-18℃冷凍備

用。葡萄酒樣充分搖勻，取適量有代表性的試樣，均分成兩份，作為試樣和留樣，分別裝

入潔凈容器中，密封并標記，于4℃避光保存。

8測定步驟

8.1樣品提取

準確稱取5.00g（精確至0.01g）樣品于50mL具塞離心管中，準確加入50%乙腈

+1%乙酸溶液（5.7.2）20mL，在勻質器中以100000r/min勻漿2min，4000r/min常溫離

心3min，取上清液待凈化。

8.2凈化

釀酒紅葡萄：取上清液1mL于15mL離心管中(提前稱好150mgC18和50mgGCB)

渦旋凈化，離心2min，凈化液過0.20μm有機相濾膜，用液相色譜-質譜/質譜測定。

釀酒白葡萄：取上清液1mL于15mL離心管中(提前稱好100mgC18和50mgGCB)

渦旋凈化，離心2min，凈化液過0.20μm有機相濾膜，用液相色譜-質譜/質譜測定。

葡萄酒：取上清液1mL于15mL離心管中(提前稱好50mgC18和10mgGCB)渦旋

凈化2min，離心2min，凈化液過0.20μm有機相濾膜，用液相色譜-質譜/質譜測定。

8.3測定

8.3.1液相色譜參考條件

（a）色譜柱：AcclaimTRINITYP1復合離子交換柱（100mm×2.1mm，3μm），或性能

相當者。

（b）流動相：A為乙腈，B為20mmol/L甲酸銨溶液。梯度洗脫程序見表1。

（c）流速：0.4mL/min。

（d）柱溫：35℃。

（e）進樣量：2μL。

表1梯度洗脫程序

時間(min)流動相A(%)流動相B(%)

07030

0.27030

3.09010

7.09010

8.07030

10.07030

8.3.2質譜參考條件

（a）離子源：電噴霧離子源（ESI源）。

（b）檢測方式：采用多反應監測（MRM）模式采集數據。

（c）掃描方式：負離子模式掃描。

（d）離子源溫度：500℃。

（e）霧化氣壓力（GSI）：20psi。

（f）氣簾氣壓力（CUR）：40psi。

（g）離子化電壓（IS）:-4500V。

（h）質譜參數見表2。

表2氯酸鹽和高氯酸鹽定性、定量離子對和質譜分析參數

化合物母離子（m/z）子離子（m/z）去簇電壓（V）碰撞能量（eV）

83.067.0*-120-22

氯酸根

85.069.0-120-25

99.083.0*-120-25

高氯酸根

101.085.0-120-30

*定量離子對。

8.3.3標準工作曲線

分別準確量取1.0mg/L混合標準工作液0μL、25μL、50μL、125μL、200μL、

500μL、700μL、1000μL，用空白基質溶液稀釋并定容至1.0mL。氯酸鹽、高氯酸鹽系列

基質標準溶液濃度依次為：0、2.5ng/mL、5.0ng/mL、12.5ng/mL、20.0ng/mL、50.0

ng/mL、70.0ng/mL、100ng/mL。

將混合標準工作溶液按儀器參考條件進行測定。以混合標準工作溶液的濃度為橫坐

標，以峰面積響應值為縱坐標繪制標準工作曲線。

8.3.4定性測定

在相同試驗條件下測定試樣和混合標準工作溶液，記錄試樣和混合標準工作液中氯酸

鹽、高氯酸鹽的色譜保留時間，以相對于最強離子豐度的百分比作為定性離子的相對離子

豐度。若試樣中檢出與混合標準工作液中氯酸鹽、高氯酸鹽保留時間一致的色譜峰，且其

定性離子與濃度相當的標準溶液中相應的定性離子的相對豐度相比，偏差不超過表3規定

的范圍，則可以確定試樣中檢出相應的氯酸鹽、高氯酸鹽。標準工作液和待測樣液中目

標物的響應值均應在儀器線性響應范圍內。

表3定性確證時相對離子豐度的最大允許偏差

相對離子豐度（%）>50>20~50>10~20≤10

允許的相對偏差（%）±20±25±30±50

8.3.5定量測定

按照儀器條件，試樣檢出與混合標準工作液一致的氯酸鹽、高氯酸鹽，根據基質標準

工作曲線外標法計算含量。

8.4空白試驗

除不加試樣外，均按試樣制備方法操作。

9結果計算

結果按式（1）計算：

CV

X………….(1)

m

式中：

X—試樣中各待測組分的含量，單位為微克每千克（μg/kg)；

c—從標準工作曲線中讀出的供試品溶液中各待測組分的濃度，單位為納克每毫升

（ng/mL）；

V—試樣溶液最終定容體積，單位為毫升（mL）；

m—稱樣量，單位為克（g）。

計算結果以重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示，保留三位有效

數字。

10方法的定量限

本方法的定量限氯酸鹽、高氯酸鹽為10.0μg/kg。

11準確度

本方法在10-100μg/kg添加濃度范圍內，回收率為60.3%-98.0%。添加濃度和回收率范

圍見附錄A。

12精密度

在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的20%。

AA

附錄A

(資料性)

氯酸鹽、高氯酸鹽特征離子色譜圖

Chlorate-1Chlorate-2

83.0/67.085.0/69.0

Prechlorate-1Prechlorate-2

99.0/83.0101.0/85.0

圖A.1氯酸鹽、高氯酸鹽特征離子色譜圖（100mm×2.1mm，3μm規格色譜柱）

附錄B

(規范性)

實驗室內重復性要求

表C.1實驗室內重復性要求

被測組分含量精密度

mg/kg%

≤0.00136

>0.001≤0.0132

>0.01≤0.122

>0.1≤118

>114

附錄C

(資料性)

氯酸鹽及高氯酸鹽回收率范圍

表D.1氯酸鹽及高氯酸鹽在釀酒葡萄、葡萄酒中的添加濃度及回收率范圍(%)

氯酸鹽高氯酸鹽

樣品

加標濃度加標濃度