項目二十三非發酵菌鑒定學習目標1．掌握銅綠假單胞菌的主要生物學特性、微生物學檢驗方法及鑒定依據。2．熟悉不動桿菌屬和產堿桿菌屬主要生物學特性、微生物學檢驗方法及鑒定依據。3．了解常見非發酵革蘭陰性桿菌的臨床意義。4．具有正確采集和處理常見非發酵革蘭陰性桿菌檢驗標本及進行相關檢測的能力。5．能正確選擇試驗項目對常見非發酵革蘭陰性桿菌進行檢驗，能正確判斷和分析試驗結果并發出檢驗報告。項目二十三非發酵菌鑒定思維導圖項目二十三非發酵菌鑒定一、假單胞菌屬的鑒定項目二十三非發酵菌鑒定一、假單胞菌屬的鑒定概述1.假單胞菌屬（Pseudomonas）為嚴格需氧、有鞭毛、無芽胞、無莢膜的革蘭陰性桿菌，氧化酶試驗均陽性，是假單胞菌科的代表菌屬，包括200多個菌種。2.假單胞菌屬是一類無芽胞、散在排列的革蘭陰性桿菌，菌體直或微彎，有單鞭毛或叢鞭毛，運動活潑，專性需氧。3.與人類關系密切的有銅綠假單胞菌、熒光假單胞菌、惡臭假單胞菌、產堿假單胞菌等，是醫院感染的主要病原菌。1.生物學性狀（1）形態與染色：革蘭陰性細長桿菌，有莢膜，單鞭毛，運動活潑一、假單胞菌屬的鑒定（一）銅綠假單胞菌1.生物學性狀（2）培養特性：營養要求不高，專性需氧，4℃不生長，42℃可生長。普通培養基上生長，80～90％產生各種水溶性色素，如綠膿素和熒光素。一、假單胞菌屬的鑒定（一）銅綠假單胞菌1.生物學性狀（3）生化反應：氧化酶陽性，氧化分解葡萄糖、木糖產酸不產氣，液化明膠，還原硝酸鹽為亞硝酸鹽并產生氮氣，吲哚陰性，利用枸櫞酸鹽，精氨酸雙水解酶陽性。一、假單胞菌屬的鑒定（一）銅綠假單胞菌1.生物學性狀（4）抗原構造

菌體（O）抗原

鞭毛（H）抗原外膜蛋白：具有屬的特異性脂多糖：具有型特異性一、假單胞菌屬的鑒定（一）銅綠假單胞菌1.生物學性狀（5）抵抗力：抵抗力強，對干燥、紫外線有抵抗力，對熱抵抗力不強，56℃30min可被殺死，對某些消毒劑敏感，1%石炭酸處理5min即被殺死，臨床分離菌株對多種抗生素不敏感一、假單胞菌屬的鑒定（一）銅綠假單胞菌2.臨床意義（1）主要致病物質：

銅綠假單胞菌有多種致病因子，包括結構成分、毒素和酶，如粘附素、多糖莢膜樣物質、內毒素、外毒素A、彈性蛋白酶、磷脂酶C等（2）所致疾?。恒~綠假單胞菌是條件致病菌，免疫力低下者易感染，是醫院內感染的主要菌之一。臨床表現多樣，引起化膿性感染，如燒傷感染、呼吸道感染、中耳炎、眼角膜炎等，合并敗血癥者死亡率高。（3）藥物敏感性：對抗假單胞菌青霉素類、氨基糖苷類、環丙沙星、頭孢吡肟、頭孢他定、美羅培能、亞胺培南敏感。醫院獲得性銅綠假單胞菌較社區分離株有較高的耐藥性，常顯示多重耐藥。一、假單胞菌屬的鑒定（一）銅綠假單胞菌3.微生物學檢驗（1）標本采集：根據疾病及檢查目的分別采集不同的臨床標本，如血液、痰液、腦脊液、胸（腹）水、尿液、膿液、分泌液、糞便等。醫院環境檢測可從空氣、水、物體表面等處采樣。一、假單胞菌屬的鑒定（一）銅綠假單胞菌3.微生物學檢驗（2）檢驗程序標本增菌

分離培養（血平板）最后鑒定可疑菌落（性狀、色素）初步鑒定涂片染色鏡檢血標本涂片鏡檢氧化酶菌落特征綠膿素氣味42℃生長分型生化鑒定：O/F

O枸櫞酸鹽利用＋精氨酸雙水解＋乙酰胺酶＋明膠液化＋一、假單胞菌屬的鑒定（一）銅綠假單胞菌3.微生物學檢驗（3）檢驗方法1）直接鏡檢：涂片、革蘭染色2）分離培養：直接接種或增菌后接種血平板和MAC3）鑒定：根據菌落特征、色素、菌體形態、生化反應等作出鑒定。對無色素菌株應與其他假單胞菌鑒別一、假單胞菌屬的鑒定（一）銅綠假單胞菌銅綠假單胞菌與其他假單胞菌的鑒別

銅綠假單胞菌熒光假單胞菌惡臭假單胞菌韋龍氏假單胞菌產堿假單胞菌氧化酶999710010096溴化-16-烷基-3-甲胺生長948987ND156.5%氯化鈉生長6543100ND4142℃生長1000000硝酸鹽還原9819010054青膿素6596931000精氨酸雙水解酶1009710010012尿素水解575275250明膠水解821000130葡萄糖產酸971001001000枸櫞酸鹽9593100ND65一、假單胞菌屬的鑒定（一）銅綠假單胞菌1.生物學特性（1）形態與染色：為革蘭氏陰性桿菌，大小為0.7～0.8μm×2.3～2.8μm，有鞭毛，無芽孢，有數根極生鞭毛。（2）培養特性：需氧，最適生長溫度是25～30℃，4℃生長，42℃不生長，在血平板上30℃孵育24h后形成灰白色、扁平稍隆起、濕潤、光滑、邊緣整齊的菌落，無溶血，挑取菌落呈黏絲狀。能分泌黃綠色熒光色素發出熒光一、假單胞菌屬的鑒定（二）熒光假單胞菌2.臨床意義

熒光假單胞菌具有嗜冷性，可在血庫儲存的血中繁殖，若輸入含有此種細菌的庫存血液或血制品，可導致敗血癥、感染性休克或血管內凝血等嚴重后果，其內毒素的磷脂部分，可導致輸血后不可逆的休克。3.微生物學檢驗

熒光假單胞菌生化能力活躍，氧化酶陽性，觸酶陽性，能利用葡萄糖和果糖，有些菌株能從蔗糖合成果聚糖，液化明膠。在4℃生長和液化明膠(4～7d)，這兩個特性可與惡臭假單胞菌相鑒別，后者均陰性。一、假單胞菌屬的鑒定（二）熒光假單胞菌1.生物學特性（1）形態與染色：革蘭陰性桿菌，有些菌株為卵圓形，單端叢毛菌，運動活潑。（2）培養特性：專性需氧，最適生長溫度25～30℃，4℃和42℃均不生長，在血平板上形成光滑、濕潤、邊緣整齊的灰色菌落，不溶血，菌落與銅綠假單胞菌相似，但只產生熒光素，不產生綠膿素，借此可與銅綠假單胞菌相區別，其陳舊培養物有腥臭味。一、假單胞菌屬的鑒定（三）惡臭假單胞菌2.臨床意義

惡臭假單胞菌為魚的一種致病菌，常從腐敗的魚中檢出，可作為人類咽部的正常菌群，是人類少見的條件致病菌，偶從人類尿道感染、皮膚感染和骨髓炎標本中分離出，分泌物有腥臭味。惡臭假單胞菌感染通常病情較重。

3.微生物學檢驗

惡臭假單胞菌氧化酶、過氧化氫酶、枸緣酸利用陽性，精氨酸雙水解酶陽性，硝酸鹽還原、鳥氨酸脫羧酶、賴氨酸脫羧酶、明膠酶、尿素酶、V-P反應、吲哚反應陰性。一、假單胞菌屬的鑒定（三）惡臭假單胞菌1.生物學特性（1）形態與染色：革蘭氏陰性菌桿菌，直徑0.5μm×2～3μm；有極生單鞭毛。（2）培養特性：最適生長溫度35℃，專性需氧，在血平板上形成圓形，邊緣整齊，隆起，表面光滑，濕潤的菌落。一、假單胞菌屬的鑒定（四）產堿假單胞菌2.臨床意義

產堿假單胞菌為自然界腐生菌，廣泛存在于多種水源中，是醫療用水污染的主要原因，如污染新生兒溫箱濕化用水和氧氣濕化用水，極容易導致新生兒呼吸道感染甚至敗血癥等。還可引起化膿性腦膜炎、尿道炎、肺炎、心內膜炎、新生兒敗血癥、膿胸眼部感染及膿腫等感染性疾病。3.微生物學檢驗

產堿假單胞菌氧化酶陽性，O/F試驗為產堿型，42℃不生長，不產色素，不分解尿素，不液化明膠。一、假單胞菌屬的鑒定（四）產堿假單胞菌二、不動桿菌屬的鑒定項目二十三非發酵菌鑒定二、不動桿菌屬的鑒定1.形態與染色

革蘭陰性桿菌，常成雙排列，多數有莢膜、無芽孢、無鞭毛。2.培養特性專性需要，營養要求不高，最適溫度35℃，鮑曼不動桿菌42℃可生長。（一）生物學特性2.培養特性血平板上菌落圓形凸起，中等大小，光滑、邊緣整齊、灰白色的菌落，部分菌落呈粘液狀，不產色素；在麥康凱平板上形成粉紅色菌落。二、不動桿菌屬的鑒定（一）生物學特性醋酸鈣不動桿菌菌落（MAC）鮑曼不動桿菌菌落（MAC）二、不動桿菌屬的鑒定（一）生物學特性3.生化反應

氧化酶陰性，觸酶陽性，硝酸鹽還原陰性，O/F為氧化型。動力、甲基紅、V-P、H2S和硝酸鹽還原試驗陰性。不同的菌種對糖的氧化分解能力不同，醋酸鈣不動桿菌、鮑曼不動桿菌氧化分解葡萄糖和乳糖產酸，多數菌種能利用枸櫞酸鹽。二、不動桿菌屬的鑒定（一）生物學特性1.致病物質

致病機制尚不完全清楚，未發現不動桿菌能分泌毒素或細胞溶解素，其致病力主要由莢膜、菌毛、產物酶、脂質及載體等組成。2.所致疾病

本屬細菌為條件致病菌，在非發酵菌中本菌的分離率僅次于銅綠假單胞菌，也是醫院感染的主要病原菌之一，常引起呼吸道、消化道及泌尿生殖道感染。3.藥物敏感性

對青霉素、氨芐西林和頭孢拉啶耐藥；多數菌株對氯霉素耐藥；對復方新諾明、哌拉西林/他唑巴坦、多西環素、和氟喹諾酮類較敏感。二、不動桿菌屬的鑒定（二）臨床意義1.標本采集

呼吸道、泌尿道及化膿感染的患者可采集尿液、痰液及膿液等標本；對疑為菌血癥和腦膜炎的患者可采集血液和腦脊液標本。2.檢驗方法

（1）顯微鏡檢查：

涂片革蘭染色鏡檢，革蘭陰性球桿菌，常成雙排列，有莢膜，有菌毛。

（2）分離培養：在血瓊脂培養基上，醋酸鈣不動桿菌菌落較大，洛菲不動桿菌菌落較小，圓形、凸起、表面光滑、邊緣整齊、灰白色、有黏性的β溶血菌落。在麥康凱瓊脂平板上，醋酸鈣不動桿菌形成粉紅色的菌落，而洛菲不動桿菌形成黃色菌落。（3）生化反應：一般不產生色素，少數菌株可產生色素，氧化酶陰性，動力陰性，硝酸鹽還原試驗陰性，觸酶陽性。

二、不動桿菌屬的鑒定（三）微生物學檢驗

醋酸鈣不動桿菌鮑曼不動桿菌溶血不動桿菌瓊氏不動桿菌約翰遜不動桿菌洛菲不動桿菌葡萄糖氧化＋＋＋／－－－－木糖氧化－＋＋／－－－－乳糖氧化＋＋－＋＋＋精氨酸雙水解酶＋＋＋＋－／＋－鳥氨酸脫羧酶＋＋－－－－苯丙氨酸脫氨酶＋＋－－－－丙二酸鹽利用試驗＋＋＋－－／＋－檸檬酸鹽利用試驗＋＋＋＋／－＋－明膠液化－－＋－－－37℃生長＋＋＋＋－＋42℃生長－＋－－－－不動桿菌屬主要菌種的鑒別要點二、不動桿菌屬的鑒定（三）微生物學檢驗三、產堿桿菌屬的鑒定項目二十三非發酵菌鑒定1.形態與染色革蘭陰性短桿菌，成對或鏈狀排列，有周鞭毛，無芽胞，多數無莢膜。三、產堿桿菌屬的鑒定（一）生物學特性2.培養特性專性需氧，最適生長溫度25～35℃，營養要求不高，在普通培養基上生長良好，麥康凱和SS平板亦可生長。三、產堿桿菌屬的鑒定（一）生物學特性1.致病物質

本屬中臨床分離最常見的是糞產堿桿菌，大部分感染是條件致病，主要來自潮濕環境，如霧化器、呼吸機和灌洗液等，血、痰、尿、腦脊液等是常見的發現部位，是醫院感染的病原菌之一。其致病物質主要是菌體成分如內毒素等。2.所致疾病

可致抵抗力低下的患者發生菌血癥，也可引起呼吸道、泌尿道及中樞神經系統感染。3.藥物敏感性

藥物敏感試驗的藥物選擇與假單胞菌相同。臨床治療可用哌拉西林及替卡西林。三、產堿桿菌屬的鑒定（二）臨床意義1.標本采集

根據臨床疾病不同采集不同的標本，如血液、尿液、痰液、膿汁、腦脊液等。2.檢驗方法（1）顯微鏡檢查：

腦脊液、尿液離心取沉淀涂片，膿汁和痰液可直接涂片革蘭染色鏡檢，為革蘭陰性短桿菌，有周鞭毛.（2）分離培養：在血平板上可形成大小不等、灰白色、扁平、邊緣稍薄的濕潤菌落，糞產堿桿菌部分菌株有水果香味；在麥康凱和SS平板上形成無色透明菌落。（3）生化反應：不分解任何糖類，O/F不分解糖類呈堿性，氧化酶陽性，觸酶陽性，分解胺類產堿。三、產堿桿菌屬的鑒定（三）微生物學檢驗

糞產堿桿菌皮喬特產堿桿菌糞產堿桿菌Ⅱ型木糖氧化產堿桿菌42℃生長－－－＋亞硝酸鹽還原＋－－＋硝酸鹽還原－＋－＋丙二酸鹽＋＋－＋木糖－－－＋常見產堿桿菌的特性