ICS65.020.20CCSB23TechnicalregulationsfortheproductionofAmorphophallusspp.seedintissueIT/YNRZ019—2024本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定起草。請注意本文件的某些內容有可能涉及專利，本文件的發布機構不承擔識別專利的責任。本文件由云南省熱帶作物科學研究所提出。本文件由云南省熱帶作物學會歸口。本文件起草單位：云南省熱帶作物科學研究所。本文件主要起草人：魏麗萍、黃菁、田耀華、巖香甩、穆洪軍、何海寧、龔燕雄、劉世紅、張兆T/YNRZ019—2024《珠芽黃魔芋組培種苗生產技術規程》標準在文件編制過程中已經識別出文件中的某些內容涉及“一種珠芽魔芋的培養方法”發明專利，專利號：ZL202311206821.6。該專利由云南省熱帶作物科學研究所申報，發明人為魏麗萍、黃菁、龔燕雄、巖香甩等。標準起草人和專利發明人為同一團隊成員。專利持有人已經提交必要專利許可聲明，同意在公平、合理、無歧視基礎上許可任何組織或者個人在實施該文件時涉及專利內容，可以無償使用該專利。本文件的發布機構提請注意,聲明符合本文件時，可能涉及[1、2、3、4條]內容與“一種珠芽魔芋的培養方法”發明專利相關內容的使用。本文件的發布機構對于該專利的真實性、有效性和范圍無任何立場。該專利持有人已向本文件的發布機構承諾，他愿意同任何申請人在合理且無歧視的條款或條件下，就專利可無償使用。該專利持有人的聲明已在本文件的發布機構備案。相關信息可以通過以下聯系方式獲得：專利持有人姓名：魏麗萍、黃菁、龔燕雄、巖香甩、張兆豪、張勇波、謝江、原慧芳、田耀華。地址：云南省景洪市宣慰大道99號。請注意除上述專利外，本文件的某些內容仍可能涉及專利。本文件的發布機構不承擔識別專利的責任。1T/YNRZ019—2024珠芽黃魔芋組培種苗生產技術規程本文件規定了珠芽黃魔芋組培種苗生產技術中的培養基母液的配制、培養基生長調節劑的配制、培養基制備、接種、培養、煉苗移栽和種苗出圃等內容。本文件適用于珠芽黃魔芋組培種苗生產。2規范性引用文件下列文件中的內容通過文中的規范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T317白砂糖GB/T603化學試劑試驗方法中所用制劑及制備GB5749生活飲用水衛生標準GB/T6682分析實驗室用水規格和試驗方法3術語和定義本文件沒有需要界定的術語和定義。4培養基母液的配制4.1母液的配制方法和保存試劑配制嚴格按照GB/T603規定方法配制，所用水執行GB/T6682分析實驗室用水規格和試驗方法標準。通常將常用試劑配制成比培養基所需濃度高10倍～100倍的母液，母液置于4℃的冰箱中貯存。4.2大量元素母液的配制分別稱取硝酸銨33g、硝酸鉀38g、磷酸二氫鉀3.4g、七水硫酸鎂7.4g、二水氯化鈣8.8g，分別加少量蒸餾水在不同的容器內充分溶解，用玻璃棒攪拌促溶解，定容至1000ml容量瓶，置棕色廣口瓶中保存，貼上標簽。4.3微量元素母液的配制分別稱取碘化鉀0.166g、硼酸1.24g、四水硫酸錳3.38g、七水硫酸鋅1.72g、二水鉬酸鈉0.05g、五水硫酸銅0.005g、六水氯化鈷0.005g，可混合置于燒杯內加少量蒸餾水溶解定容至1000ml容量瓶，置棕色廣口瓶中保存，貼上標簽。4.4鐵鹽母液的配制稱取乙二胺四乙酸二鈉7.46g和硫酸亞鐵5.56g，分別溶于450ml蒸餾水中，加熱，不斷攪拌，溶解后，兩液混合，調PH至5.5加水定容至1000ml，置棕色廣口瓶中保存，貼上標簽。4.5有機母液的配制分別稱取煙酸0.05g、VB?0.01g、VB60.05g、甘氨酸0.2g，混合置于燒杯內加少量蒸餾水溶解定容至1000ml容量瓶，置棕色廣口瓶中保存，貼上標簽。2T/YNRZ019—20245培養基生長調節劑的配制5.1NAA的配制和保存稱取NAA0.1g，先用少量95%乙醇或無水乙醇完全溶解，定容至1000ml容量瓶。5.26-BA的配制稱取6-BA0.1g，先用少量95%乙醇或無水乙醇完全溶解，定容至1000ml容量瓶。5.3KT的配制和保存稱取KT0.1g，先用少量95%乙醇或無水乙醇完全溶解，定容至1000ml容量瓶。5.4TDZ的配制和保存稱取TDZ0.1g，先用少量95%乙醇或無水乙醇完全溶解，定容至1000ml容量瓶。6培養基制備6.1制備方法培養基由試劑、蔗糖、瓊脂、水組成，蔗糖和水應分別符合GB/T317和GB5749規定，試劑配制嚴格按照GB/T603規定方法配制，所用水執行GB/T6682分析實驗室用水規格。6.1.1稱量稱取所需量的瓊脂和蔗糖單獨放入燒杯中，加入少量的蒸餾水，攪拌讓其溶化。6.1.2配制依次把稱取好的母液及生長調節劑倒入已溶化的瓊脂中，加入蔗糖，置于電磁爐上加熱，不斷攪拌，直至瓊脂和蔗糖完全溶解最終定容到所需體積。6.2pH值調整培養基最佳pH值為5.8，采用酸度計或精密pH試紙測定，通常用1mol/L的NaOH或1mol/L的HCL來調節。6.3培養基分裝配制好的培養基需趁熱分裝，分裝量以培養容器體積的1/4～1/3為宜，分裝后應立即密封。6.4培養基滅菌培養基分裝后在24h內完成滅菌工作，在壓力為0.105MPa，溫度121℃的條件下，滅菌25min～30min。6.5培養基保存滅菌后的培養基應保存于潔凈、干燥的培養基儲存室中，2℃~4℃條件下7d內使用。7接種7.1外植體的選擇選用無病蟲害、健壯的珠芽為外植體。7.2外植體的消毒珠芽應先去皮，用自來水沖洗30min，將洗凈后的珠芽轉至超凈工作臺上，用75%乙醇浸泡10s~20s，用無菌水沖洗2次，再用0.1%升汞消毒12min，最后用無菌水沖洗5次～7次后備用。3T/YNRZ019—20247.3外植體的接種在超凈工作臺上，將消毒后的珠芽黃魔芋珠芽切成約0.5cm×0.5cm的小塊，接種到初代培養基上，切口接觸培養基，接種后做好標記。8培養8.1培養條件珠芽黃魔芋最適宜的培養溫度為26℃,光照強度為2000Lx，光照時間為10h/d。8.2初代培養8.2.1初代培養基珠芽黃魔芋組培快繁技術中誘導培養基為MS+TDZ0.5mg/L+NAA2.0mg/L+肌醇0.1g/L+蔗糖30g/L+瓊脂6g/L。8.2.2初代培養基條件接種好的培養瓶放置在培養架上，培養30d～50d形成愈傷組織或叢生芽。叢生芽和愈傷組織繼續培養或者轉接，培養30d左右，形成完整組培苗。8.3增殖培養8.3.1葉片培養將無菌組培苗濃綠厚大的葉片切成大小約0.5cm×0.5cm小塊，葉面朝上平鋪于培養基上，培養周期30d～50d，形成愈傷組織和叢生芽。8.3.2葉柄培養將無菌組培苗生長健壯的葉柄切成約1cm的小段，扦插于培養基上，培養周期30d～50d，形成愈傷組織和叢生芽。8.3.3葉柄和葉片繼代增殖培養基葉柄和葉片繼代增殖培養基為MS+TDZ0.2mg/L+NAA0.4mg/L+6BA1.0mg/L+肌醇0.1g/L+蔗糖30g/L+瓊脂6g/L。8.3.4愈傷組織培養將剪掉葉片和葉柄的愈傷組織分割成約大小0.5cm×0.5cm，轉接到葉柄和葉片繼代增殖培養基上，培養周期30d左右，形成無根苗。8.3.5愈傷組織培養基愈傷組織繼代增殖培養MS+KT0.9mg/L+NAA0.2mg/L+肌醇0.1g/L+蔗糖30g/L+瓊脂6g/L。8.4生根培養8.4.1生根培養條件叢生芽或無根苗轉接至生根培養基上，培養周期15d左右，形成完整的組培苗。8.4.2生根培養基生根培養基為MS+IBA1.0mg/L+肌醇0.1g/L+蔗糖30g/L+瓊脂6g/L。9煉苗移栽9.1煉苗4T/YNRZ019—2024在室溫、自然光下，選擇株高3cm～5cm的組培苗，先擰松瓶蓋放置2d～3d，再半揭瓶蓋放置2d~3d，最后完全揭開瓶蓋放置3d～5d后