三種檢測方式在腫瘤標志物中的應用研究進展綜述論文摘要：腫瘤標志物的合成與腫瘤細胞的形成和增殖有密切關聯，可通過人體血液、組織或體液等成分進行表達，因而可采用不同方式進行檢測，檢測方式的差異可能會直接影響臨床醫師的判斷，故而需要針對不同臨床檢測方式的特征進行了解，使得更為合適的檢驗手段可在臨床中被應用和選擇以提高檢驗準確性。本文在對各類檢測方式進行綜述后，更有利于臨床醫師延長患者生存期，未來臨床檢驗方法的不斷完善，可能更有利于提升腫瘤標志物的檢測效率，延緩患者生存期。關鍵詞：腫瘤標志物；酶聯免疫吸附法；免疫比濁法；化學發光法腫瘤標志物水平的檢測標準受到不同檢驗方式的影響，故而不同檢測方式所檢驗出的腫瘤標志物水平對于患者病情變化的判斷標準有所差異，而敏感度、特異度更高的檢測方式更有利于臨床醫師對患者病情進行判斷[1]。酶聯免疫吸附檢測法、免疫比濁法和化學發光免疫檢測法均在當前臨床中被廣泛應用[2]。本文通過對不同檢測方式的檢測特征及優缺點進行闡述，來對腫瘤標志物檢測方式的臨床選擇提供參考依據，讓不同檢驗方式的優劣能被臨床醫師認識到，并對相應的腫瘤標志物進行檢驗以提升準確性，從而更加了解腫瘤在患者體內的侵襲程度。1腫瘤標志物的早期檢測方式早期腫瘤一般無特異性癥狀表現，故而一般在經歷醫學檢查時才可以檢測出來，包括CT檢查、彩超檢查等，不同類型腫瘤其檢測方式存在明顯差別，然而一般以獲取的病理組織切片的病理檢查結果為金標準，但由于病理組織通常在手術中才能獲取，不具備一定的時效性，穿刺活檢也成為當前提前診斷腫瘤性質的重要手段。然而病理檢測需要對組織進行免疫組化檢驗，步驟較為繁瑣，且時間較長，為有創檢查，故而臨床對于腫瘤標志物的檢測寄予了厚望[3]。2三種檢測方式在腫瘤標志物中的應用2.1酶聯免疫吸附法酶聯免疫吸附法主要被應用于抗原和抗體的檢測，通過其在結合時產生的特異性現象，并通過酶和基質的催化來實現量化檢測[4]。測定時，將待測樣品和相應的抗原或抗體組合在固體載體上生成免疫復合物，將非結合抗原或抗體從免疫復合物中分離，然后抗原或抗體與載體上的復合物連接，催化基體與辣根過氧化物酶反應，改變反應液的顏色，并根據這種顏色差異實現對定量的判定。這種手段被較多的使用，最重要的是其可以讓相應指標的檢出更具靈敏和特異性，且該方法不會產生反射性損害[5-6]。由于作用后的最終結果在一定程度上受到酶催化影響，進而被放大，甚至不用機器就可對顏色變化進行辨別，且能對皮克級物質的顏色改變進行放大表現。此種檢測方式對抗原抗體結合位點較為看重，否則難以發生反應。如果反應原理不同，其采用的檢測手段也存在一定差別；直接方法是抗原涂在固體載體上，初級抗體和基質通過辣根過氧化物酶連接，并在微孔板讀取器上進行測量，該方法操作方便，無交叉反應；辣根過氧化物酶間接標記在二抗上，酶標抗體與一抗和酶標板上的抗原結合。這種方法適用于不適合標記的抗體，能保持一抗最強的免疫力。缺點是容易發生交叉反應[7]。王海生等[8]采用酶聯免疫吸附法對惡性腫瘤患者體內癌胚抗原血清成分進行檢測，發現ELISA高中低值混合血清內批內或批間精密度均小于15%，其高中低回收率分別可達到93.8%、97.4%、94.6%，能滿足大批體檢標本的檢測。試驗物質的濃度越高，酶標抗原或抗體越少，用儀器測定的吸光度值越低；雙重抗體夾心法適用于含有多個連接部位的聚合物蛋白質的測定。由于受檢抗原與包膜抗體結合，與受檢抗原結合的酶標抗體被孵育，通過過氧化氫的作用生成顏色，其特異性也很明顯[9]。酶聯免疫吸附法能夠被用來檢測抗體和抗原，因為檢驗時間短，且能夠更方便的被操作，故而更多的被應用。任風梅[10]對6種不同類型的腫瘤標志物進行檢測，其血液樣本來自222名癌癥病人，并采用受試者工作曲線對其檢測價值進行評估，發現其與電化學發光法有較佳的一致性，臨床應用價值良好。2.2免疫比濁法免疫比濁法是將抗原和過量抗體按一定比例稀釋，使可溶性免疫復合物因聚乙二醇的催化作用而生成顆粒。免疫比濁法是指蛋白質與抗體的反應使溶液變渾濁，光線通過抗原抗體復合物后可被吸收。被檢測的樣本濃度在可控范圍內時，其可吸收的光越多，那么可生成的免疫結合產物也會明顯增加。紫外分光光度計用于檢測光濃度值，定量地確定測定的試樣。夏勇等[11]根據不同試劑效應識別參數，發現該方法通過建立相關的識別參數，可以使血清的檢測結果更好的用來反應患者病情變化。徐繼等[12]對免疫球蛋白含量進行免疫比濁檢測，其血液樣本均來自肝癌患者，從而使得單純使用動脈栓塞化療及加用參芪扶正注射液的患者免疫球蛋白水平呈現明顯差異，更好的對參芪扶正液的治療效果給予了參考。在可見光范圍內，光透過膠乳粒子被儀器檢測出，檢測出的光的強度越強，被測量樣品的含量越高。劉靈燕等[13]采用快速乳膠散射免疫比濁法對尿視黃醇結合蛋白進行檢測，并對其精密度、線性范圍、準確度、靈敏度和特異度進行評價，認為該種檢測方法具有靈敏度高、精密度高、準確度高，抗干擾性強，故而臨床采用免疫乳膠比濁法檢測具有良好的應用價值。2.3化學發光法化學發光法包括化學發光系統和抗原抗體檢測兩部分，同時具備較強的免疫特異性和較高的發光靈敏性。通過與發光試劑標記的抗原和抗體組合的免疫反應產生免疫現象，加入化學基質，在聚乙烯醇的催化反應下發生電子轉移，氧化成刺激的中間體。這種狀態是不可持續的，很快就會恢復到以前狀態，多余的能量以可見光的形式釋放到外部[14]。此時，可以用化學發光檢測器檢測一定程度的光信號強度，可以定性且定量地確定測量對象的試料。張學棟等[15]將化學發光法應用于腫瘤標志物甲胎蛋白的檢測，發現肝癌患者體內甲胎蛋白含量明顯高于健康志愿者血清水平，認為化學免疫分析法和時間分辨熒光免疫分析法均可取得較高的血清檢測準確性，幫助臨床醫師盡早對肝癌患者病情進行判斷，從而實現早期治療，但臨床一般需根據實際情況對患者血清表達相關水平進行檢測。該種方法所包含的技術有所差異，且不同檢驗技術對于標志物水平的檢測也會產生一定差異。其中化學發光免疫檢測技術反應機理為氧化還原反應，不會對人體產生明顯損害或是造成污染；化學發光酶免疫技術結合的底物與前者有所區別，在與結合抗原抗體分離后可發生能量躍遷，從而發生相應強度的光，從而進行定量；電化學發光免疫檢測技術兼具前兩者的高特異性和點化學發光高敏感性，電化學發光試劑主要用于抗體和抗原的標記，磁珠作為將檢測對象及其相應的抗體固定在磁微球上的固體載體。3小結作為如今社會上人們最為恐懼的疾病，腫瘤患病的人數正在不斷上升。導致惡性腫瘤發生發展的因素多種多樣，且患者在發病初期并沒有明顯感覺，患者由于沒有明顯癥狀表現也不能盡早發現。病灶一旦產生侵襲性，則對人體造成較強的致病性，并且容易于擴散，預后不理想，而了解腫瘤標志物的檢測方式對于幫助臨床醫師認識腫瘤的發生及發展有重要價值。其樣本收集及樣品預處理都應保持質控，降低外界環境對樣本收集的影響。此外本研究還對酶聯免疫吸附檢測法、免疫比濁法和化學發光免疫檢測法等化學檢測法各自的特點進行敘述，認為酶聯免疫吸附檢測在當前的應用較為廣泛，但具體采用的方法需根據實驗設備、腫瘤標志物類別進行選擇。參考文獻[1]王述蓮，呼建民，何光倫,等.血清腫瘤標志物聯合血常規指標檢測在原發性肝癌診斷中的應用研究[J].標記免疫分析與臨床，2017，24(1)：4-7.[2]HiramatsuA，HanaokaH，UyamaY.Characteristicsondrugsafetymeasuresinjapanstratifiedbysystemorganclassesandtherapeuticcategoriesinrelationtotheapprovaldate[J].TherapeuticInnovationandRegulatoryScience，2020，54(7)：1534-1540.[3]白順民，范哲.某院靜脈藥物調配中心抗腫瘤藥物不合理用藥分析[J].中國藥物警戒，2020，17(4)：51-56.[4]FariaSC，SagebielT，PatnanaM，CoxV，ViswanathanC，LallC，QayyumA，BhosalePR.Tumormarkers：mythsandfactsunfolded.AbdomRadiol(NY).2019Apr;44(4)：1575-1600.[5]袁錫裕，李慶賢，羅萍，等.胃癌腫瘤標志物在術前血清中的表達情況與根治性切除可能性的相關性研究[J].中國綜合臨床，2021，37(1)：67-73.[6]GiavarinaD，LippiG.Bloodvenoussamplecollection：Recommendationsoverviewandachecklisttoimprovequality[J].ClinBiochem.2017，50(10)：568-573.[7]B?rsch-SupanA，WeissLM，B?rsch-SupanM，etal.Driedbloodspotcollection，samplequality，andfieldworkconditions：Structuralvalidationsforconversionintostandardvalues[J].AmJHumBiol.2021，33(4)：e23517.[8]王海生.化學發光微粒子免疫分析法和酶聯免疫吸附分析法檢測癌胚抗原的效果[J].臨床醫學研究與實踐,2018，3(36)：151-152.[9]韓素桂，黃彩云，鄭璇,等.比較用凝集素微量離心柱法和酶聯免疫吸附法檢測甲胎蛋白異質體對原發性肝癌的診斷價值[J].中國臨床藥理學雜志，2018，34(13)：2574-2576.[10]任風梅.6項腫瘤標志物應用微陣列酶聯免疫法與電化學發光免疫分析法測定的對比研究[J].系統醫學，2020，5(11)：52-54.[11]夏勇，薛灝，李明洋,等.免疫透射比濁法自建檢測系統鉤狀效應性能確認方法的建立[J].檢驗醫學，2018，33(12)：4.[12]徐繼，何治軍，張巖.參芪扶正對肝癌化療血漿免疫蛋白表達的影響及療效觀察[J].中華中醫藥學刊，2018，36(8)：2026-2030