畜禽血清中黃曲霉毒素B?生物標志物的測定高效液相色譜法I本文件按照GB/T1.1—2020《標準化工作導則第1部分：標準化文件的結構和起草規則》的規定本文件起草單位：安徽農業大學、安徽浩翔農牧有限公司(農業農村部豬室)、望江縣小月山農業發展有限公司、和縣農業農村局、望江縣畜牧獸畜禽血清中黃曲霉毒素B?生物標志物的測定高效液相色譜法25.1.12AFB?生物標志物標準品AFB?-Lysine(純度≥99%)。5.2.1高效液相色譜儀(含熒光檢測器、柱溫箱)。5.2.7天平(感量0.0001g)。1002223444665886736.2.1.3血清總蛋白含量計算公式見公式(1)、公式(2)、公式(3): (2) 3標準品1002354565706.2.2.3150μL血清白蛋白計算公式見公式(4)、公式(5)、公式(6): 4速順序分兩次各加入1mL水洗滌、1mL甲醇-水溶液(附錄A.1.4)和氫氧化銨(附錄A.1.8)洗滌，在0.5mL甲醇中洗脫后干燥，用1mL甲酸-水溶液(附錄A.1.5)洗脫純化兩次，收集洗脫液，干6.5.2檢測波長：激發波長405nm,發射波長470nm。時間%%056.6.1在6.5色譜條件下，將150.0μLAFB?生物標志物標準工作溶液(附錄A.2.2)按濃度從低到5高依次注入高效液相色譜儀，AFB?生物標志物標準品色譜圖參考附錄B;待儀器條件穩定后，以目標物質的濃度為橫坐標(x軸),目標物質的峰面積為縱坐標(y軸),對各個數據點進行最小二乘線性擬合，標準曲線見公式(7):b——標準曲線的截距。6.6.2標準工作溶液和樣液中待測物的響應值均應在儀器線性響應范圍內，如果樣本含量超過標準曲6.7空白試驗不加入標準品，按6.3、6.4的步驟做空白實驗。確認不含有干擾待測組分的物質。7測定結果的表述樣品分析見公式(8):X——待測血清白蛋白中AFB?生物標志物的含量，單位為皮克每毫克(pg/mg);Ci——待測物進樣液中AFB?生物標志物的濃度，單位為納克每毫升(ng/mL);V——定容體積，單位為毫升(mL);m——150.0μL血清中白蛋白含量，單位為毫克(mg)。8重復性血清樣本中AFB?生物標志物含量在重復性條件下獲得的絕對差值不得超過算術平均值的15%。9檢出限與定量限本標準血清AFB?生物標志物的最低檢出限為0.02ng/mL,定量限為1.0ng/mL。10回收率添加濃度在0.5ng/mL～1.0ng/mL時，回收率在75%～94%之間。6A.1.1磷酸二氫銨(20mmol/L,pH7.2水調pH至7.2,混合均勻。A.1.2疊氮化鈉(0.001%):稱取疊氮化鈉1.0mg,溶于100mL水，混合均勻。A.1.3甲醇-水溶液(25+75):分別量取250mL甲醇和750mL水，混合均勻。A.1.5甲酸-水溶液(2+98):分別量取2氯化鉀，用980mL水溶解，然后用鹽酸調整pH至7.4,最后用水稀釋至1000mL,混合均勻。A.1.8氫氧化銨-水溶液(1+99):分別量取10mL氫氧化銨和990mL水，混合均勻。A.2.1標準儲備溶