1油菜黑脛病室內抗性鑒定技術規程編制說明一、工作簡況項目來源：本標準在自治區科技成果轉化專項—油菜新品種NM88及化肥農藥減施技術應用（2019CG014）、內蒙古與內蒙古農牧業創新基金項目-油菜病蟲草害防控與化學農藥減施技術研究（2016CXJJN04）的資助下開展了相關研究，內蒙古自治區市場監督管理局《關于下達2021年第一批內蒙古自治區地方標準制修訂項目計劃的通知》批準立項。起草單位：內蒙古自治區農牧業科學院主要起草人：宋培玲、李子欽、楊永青、燕孟嬌、皇甫海燕、賈曉清、皇甫九茹、郭晨。二、制定本標準的目的和意義1.油菜黑脛病是限制許多國家油菜產業發展的瓶頸因由小球腔菌屬復合種Leptosphaeriamaculans和Leptosphaeriabiglobosa引起的油菜黑脛病（Phomastemcanker）為世界性的病害，在冬、春性油菜上均可發生危害。該病害能夠在多種不同栽培措施和環境條件下爆發和流行。目前除中國和印度外，油菜黑脛病在世界各大油菜產區均已造成了嚴重的經濟損失，已經成為限制許多國家2油菜產業發展的瓶頸因素。2.油菜黑脛病目前嚴重影響我國油菜產業的發展自1999年首次從我國海拉爾、武漢、合肥、貴陽等地Leptosphaeriabiglobosa以來，油菜黑脛病在我國的發生危害呈擴展蔓延趨勢。目前，我國多個油菜產區內都有L.biglobosa的存在。2011年李國慶等對湖北省的10個主要冬油菜種植區進行了調查，發現所調查的10個油菜種植區都有黑脛病，發病率為1%-95%。2012年李強生等調查發現，我國16個省(市、自治區)60個市(縣)的冬、春油菜產區中14個省的42個市(縣)存在黑脛病，約10%的調查田塊發病，重病田塊發病率達92%，約有5%的植株整株死亡。2018年榮松柏等發現由L.biglobosa引起的油菜黑脛病在安徽、湖北、貴州、河南信陽和陜西漢中等地危害重，產量損失大，黑脛病已成為影響油菜產業發展的重要病害之一。油菜種植是我區陰山北麓及呼倫貝爾等冷涼地區的主導產業，更是促進這些區域經濟增長的重要手段。油菜黑脛病的發生危害逐年加重，對我區的油菜安全生產構成了嚴重威脅。3.抗性鑒定為抗病育種奠定了基礎選育和種植抗病品種是防治黑脛病最理想的方法，也3是控制油菜黑脛病的第一道防線。對現有種質資源進行抗黑脛病的篩選、鑒定研究，篩選、發掘以及創新抗病種質是開展黑脛病抗病育種工作的前提和基礎。4.缺乏油菜黑脛病菌抗性鑒定技術規程目前，檢索全國標準信息公共服務平臺，國內外尚無一套有關油菜黑脛病菌抗性鑒定技術標準可循，因此，建立一套簡單易操作的油菜黑脛病菌抗病鑒定的技術規程十分必要。本標準在自治區科技成果轉化專項、內蒙古農牧業創新基金項目的資助下，明確了油菜黑脛病菌的培養條件、分生孢子懸浮液制備方法、子葉穿刺接種方法及黑脛病菌最適侵染發病條件等各項技術參數，為本標準的制定奠定了基礎。制定《油菜黑脛病室內抗性鑒定技術規程》，為現有及新培育的種質資源進行抗黑脛病的篩選、鑒定研究提供技術支撐和保障。三、主要起草過程項目組以前期試驗結果為依據，結合研究經驗，自2020年12月開始，嚴格按照內蒙古自治區地方標準的編寫格式、結構和表述規則起草了《油菜黑脛病抗性鑒定技術規程》的建議書和草案，經過充分討論、修改，于2021年2月底匯總上報，7月內蒙古自治區市場監督管理局批準立項，8-10月團隊成員完成了《油菜黑脛病抗性鑒定技術規程》編制說4明和標準征求意見稿的撰寫，10月上報征求意見稿。12月收到專家修改意見同月按照專家意見逐條修改上報。四、制定標準的原則和依據本標準以實用、科學合理、可操作性強為基本原則，在不違背現行的法律、法規的前提下，結合實際研究過程中的實驗數據制定了相關內容。五、主要條款的說明本標準規定了《油菜黑脛病室內抗性鑒定技術規程》，適用于油菜黑脛病抗性鑒定，標準中關于油菜黑脛病菌的培養條件、分生孢子懸浮液制備方法、子葉穿刺接種方法及黑脛病菌最適侵染發病條件有詳實可靠的試驗數據為依據，在建立抗性鑒定技術規程的過程中，我們主要開展了如下幾方面的研究：1.不同油菜品種抗病性評價不同油菜品種對黑脛病的抗病性有一定的差異。團隊成員對74份油菜品種（系）進行了抗性鑒定，結果如表1所示，供試的油菜品種（系）均不同程度的感病，病情指數20.47~94.24。以高感品種Drakka為對照，供試材料中沒有高抗和中抗品種（系抗病性最好的為墾油6號，病情指數為20.47；32份材料表現低抗，22份材料表現低感，17份材料表現為中感，3份材料表現高感。5表1不同油菜品種（系）抗黑脛病水平油菜品種病情指數抗病性油菜品種病情指數抗病性墾油6號20.47低抗LRY12650.87低感LS墾油5號21.67低抗LR核優5651.25低感LS墾油4號22.89低抗LRLyy652.56低感LS蘇油1號23.19低抗LRY16052.81低感LS贛兩優2號23.67低抗LR中旗黃油菜54.89低感LS墾油3號26.33低抗LR華油雜10號55.00低感LS華雙5號26.84低抗LR黔黃油21號55.43低感LS青雜3號27.50低抗LRY14256.52低感LSY828.46低抗LR綿新油56.73低感LSLyy130.00低抗LR華協10257.31低感LSLyy531.06低抗LR浙平4號58.26低感LS德核雜油831.15低抗LRLyy258.46低感LS武川黃油菜31.35低抗LRY12158.82低感LSY4231.37低抗LRLyy1459.57低感LSY181低抗LR中雙11號60.00低感LSLyy1232.50低抗LRY12760.34中感MSLyy832.63低抗LR滬油雜1號60.89中感MSLyy1033.33低抗LRY10561.21中感MSLyy1133.33低抗LRY13461.86中感MS青雜4號33.48低抗LRY16661.96中感MSY3333.78低抗LR浙雙7262.80中感MS青雜5號低抗LR秦優10號54.50低感MS滁雜油3號34.17低抗LR皖油2864.74中感MS青雜6號34.23低抗LRLyy965.45中感MSLyy335.92低抗LRY16166.00中感MS青雜7號36.40低抗LRY13967.62中感MSLyy438.26低抗LRY11069.49中感MS新疆黃油菜38.87低抗LRY9870.32中感MS滁核雜1號39.22低抗LRLyy771.33中感MS石寶黃油菜38.32低抗LR秦優11號74.88中感MSY940.00低抗LRLyy1675.24中感MS青油1440.00低抗LRY12475.45中感MSLyy1343.33低感LS揚油6號80.00中感MSLyy1543.75低感LS中油562881.46高感HS錫盟黃油菜44.00低感LSY5581.49高感HS石潭農家種46.82低感LSY14890.48高感HS華協1號核優4647.8950.00低感LS低感LS感對照種）94.24高感HS2.不同溫度對病原菌侵染的影響6子葉期分生孢子懸浮液穿刺接種結果表明，溫度對病原菌的侵染影響很大，21～24℃時最適合病原菌侵染發圍呈輕微黑色或有微小病斑，雖病情指數和病斑面積隨溫度的升高而增大，但在溫度低于18℃時病菌侵染發病能力明顯降低；18～21℃病情指數和病斑面積隨溫度的升高而驟升；21～27℃供試接種的5個油菜品種中有4個品種的病情指數和病斑面積隨溫度的升高而減小。這表明，油菜黑脛病病菌為偏高溫侵染型真菌，21℃以下有利于病菌侵入而不利于其擴展27℃的高溫雖不適于病菌侵入，但有利于已侵入菌絲在寄主葉內擴展。圖1溫度對病原菌侵染的影響3.保濕時間對病原菌侵染的影響件下，保濕時間對病原菌的侵入有較大影響，保濕時間越長，7越有利于病原菌侵入、病斑擴展，病情指數越高，保濕時間越短，病情指數越低。保濕時間12h時供試品種中病情指數最高的只有20，而保濕72h時供試品種中病情指數最低的是90。圖2保濕時間對病原菌侵染的影響4.不同保濕時間與溫度組合對病原菌侵染的影響溫濕度處理組合如圖3所示，15~18℃時，各品種的病情指數均隨保濕時間增長而緩慢升高，即使保濕時間達72h時，病情指數亦低于20；21℃時，保濕48h以上，各品種的病情指數均大幅上升；而27℃時，保濕48h以上，各品種的病情指數雖隨保濕時間的增長而上升，但較21℃條件下緩慢得多。8圖3不同保濕時間與溫度組合對病原菌侵染的影響六、重大意見分歧的處理依據和結果無七、采用國內外同類標準水平的對比情況本標準是依據油菜黑脛病抗性鑒定試驗實際情況所制定，未見國內外同類標準。八、其他應說明的事項無九、標準草稿征求意見情況匯總表9序號地方標準章條編號意見內容提出單位備注13.術語和定義建議將3.1有關油菜黑脛病定義去掉。因為病害名稱不屬于術語的范疇業大學名稱不屬于術但為定義23.病原物更改為4.病原物。其中的3.1病原菌分離自內蒙古呼倫貝爾產區的油菜患病植株，純化并經分子鑒定為Leptosphaeriabiglobosa。建議更改為病原菌從內蒙古呼倫貝爾油菜地中采集的發病植株上分離獲Leptosphaeriabiglobosa。致病力為中等水平。業大學采納33.2.病原物的培養待菌落形成后，在菌落邊緣打取直徑為4mm菌絲塊接于新的PDA培養基中央25℃下進行培養。由于第4條中已經提及到配置分生孢子液進行接種，所以這里就不需要打菌餅了。業大學采納44.孢子懸浮液的制備這里需要明確接種用分生孢子液的濃度業大學采納5接種傷口處接種1×107個/mL黑脛病菌孢子懸浮液，這里需要明確接種了多少毫升接種液，同時還需要設置接種清水的對照業大學采納65.2病情調查表1油菜黑脛病子葉接種鑒定病情分級標準需要有參考文獻標注業大學采納7水平的劃分表2油菜黑脛病抗性分級標準也需要有參考文獻標注業大學采納8標準名稱“油菜黑脛病抗性鑒定技術規程”改為“油菜黑脛病室內抗性鑒定技術規程”牧業技術推廣中心采納9前言“本文件由內蒙古自治區農牧廳提出。”改為“本文件由內蒙古自治區農牧業科學院提出。”牧業技術推廣中心采納1“本文件規定了油菜黑脛病抗性鑒定技術的術語和定義、孢子懸浮液制備、接種及抗病性評價等內容。”改為“本文件規定了油菜黑脛病抗性鑒定技術中的孢子懸浮液制備、接種方法、病情調查及抗性評價和鑒定”；刪除“本文件適用于春油菜品種、品系抗性鑒定評價。”牧業技術推廣中心采納3.1由小球腔菌屬（Leptosphaeriabiglobosa）引起的油菜病害改為“….侵染引起的..”;“分離自內蒙古呼倫貝爾產區的油菜患病植株，純化并經分子鑒定為Leptosphaeriabiglobosa。”改為“內蒙古呼倫貝爾產區的油菜發病植株上分離，純化并經分子鑒定的小球腔菌屬Leptosphaeriabiglobosa。”牧業技術推廣中心采納與趙君教見類合趙修改5.2“接種7-14d后，根據油菜黑脛病子葉接種鑒定的標準(表1)調查、統計植株的發病情況。”改為“接種7-14d后，根據油菜黑脛病子葉接種鑒定病情分級標準(表1)對接種葉片進行調查。”；表1油菜黑脛病子葉接種鑒定病情分級標準，應明確參考文獻。牧業技術推廣中心采納義標號3出現了2次，可改為3.1油菜黑脛病3.2病原菌3.2.1病原菌來源3.2.2病原菌培養學菌來能納入術定義范疇液的制備L.biglobosa斜體；給出孢子懸浮液的孢子密度(含量)？學采納5抗病性鑒定5.1黑脛病菌孢子懸浮液的孢子含量如何測定？是否需要補充方法？學采納英文或拉丁詞語言文字表述應使用“TimesNewRoman”字體，學名注意斜體。全文內容的邏輯、層次和語言表述需要改進。學題無法設置斜其余采納二．制定本標準的目的和意義1)第1頁倒數第5行，句子不通順。建議：本行第二個“發現”改為“中”。2）第2頁第一行的“油菜是我區….冷涼地區的主導產業”改為“油菜種植是我區….冷涼地區的主導產業之一