




版權說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內容提供方,若內容存在侵權,請進行舉報或認領
文檔簡介
67.050B
23
DB12天 津 市 地 方 標 準DB12/T
652—2016轉基因耐除草劑大豆
DAS-68416-4
及其衍生品種定性檢測
PCR
法Detection
of
plants
and
—Qualitative
method
herbicide-resistant
soybean
and
derivates2016-09-27
發布 2016-11-01
實施天津市市場和質量監督管理委員會發布DB12/T
652—2016 本標準按照
GB/T
—
給出的規則起草。本標準由天津市農村工作委員會提出。本標準起草單位:天津市農業質量標準與檢測技術研究所、中國農業科學院生物技術研究所、天津市東麗區產品質量監督檢驗所。本標準主要起草人:蘭青闊、李亮、趙新、劉雪巖、宛煜嵩、王成、陳銳、朱珠、劉娜、徐石勇。本標準
年
9
月首次發布。DB12/T
652—2016
DAS-68416-4
PCR
1 范圍本標準規定了轉基因耐除草劑大豆
DAS-68416-4
轉化體特異性的定性
PCR
檢測方法的術語和定義、檢測方法、結果分析與表述。本標準適用于轉基因耐除草劑大豆
DAS-68416-4
DAS-68416-4
轉化體成分的定性
PCR
檢測。2規范性引用文件下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T
6682 分析實驗室用水規格和試驗方法農業部
1485
4—2010 轉基因植物及其產品成分檢測
DNA
農業部
2031
8—2013 轉基因植物及其產品成分檢測
大豆內標準基因定性
PCR
法農業部
2031
19—2013 轉基因植物及其產品檢測
NY/T
轉基因植物及其產品檢測
通用要求3 術語和定義農業部
2031
8—2013
界定的以及下列術語和定義適用于本文件。3.1Lectin
Lectin
編碼大豆凝集素的基因。3.2DAS-68416-4
轉化體特異性序列
sequence
DAS-68416-4DAS-68416-4
外源插入片段
5′端與大豆基因組的連接區序列。4 原理根據轉基因耐除草劑大豆DAS-68416-4DNA進行PCR擴增。依據是否擴增獲得典型的實時熒光擴增曲線,判斷樣品中是否含有
5 檢測方法5.1
試劑和材料除非另有說明,僅使用分析純試劑和重蒸餾水或符合
GB/T
6682
規定的一級水。5.1.1
熒光定量
PCR
反應試劑盒。5.1.2 引物和探針。DB12/T
652—20165.1.2.1
基因。lec-1215F:5′′lec-1332R:5′′lec-1269P:5′′預期擴增片段大小為
(參見附錄
A)。5.1.2.2
DAS-68416-4
轉化體特異性序列。DAS-68416-4-F:5'-
-
3':
-
3':5'
-
3'預期擴增片段大小為
128
(參見附錄
A
10
μmol/L需避光保存。5.2 儀器
0.1
g
和
0.1
PCR
儀;其他相關儀器設備。5.3 分析步驟5.3.1 按
NY/T
672
和農業部
2031
號公告—19—2013
規定執行。5.3.2 試樣準備按
NY/T
672
和農業部
2031
號公告—19—2013
規定執行。5.3.3 試樣預處理按農業部
1485
號公告—4—2010
規定執行。5.3.4 DNA
模板制備按農業部
1485
號公告—4—2010
規定執行。5.3.5 PCR
反應5.3.5.1 標準樣品和試樣實時熒光
PCR
同時進行標準樣品和試樣的
PCR
反應,每個
PCR
反應設置
3
次平行。DAS-68416-4
轉化體實時熒光
PCR
1
在
PCR
Lectin內標基因實時熒光
PCR
反應按表
2
在
PCR
反應管中依次加入反應試劑,混勻。將
PCR
管放在離心機上,500
g~3
g
離心
10
s
PCR
PCR
熒光
PCR
反應。(反應程序為:94℃變性
5
;進行
45
次循環擴增反應(94
15
s,60℃退火延伸
1
);(60
1×10
DAS-68416-4-F0.8
2.0
10
DAS-68416-4-R0.8
2.0
10
DAS-68416-4-P0.4
.0
2.0
25.0
表示體積不確定。根據
25.0
1×10
lec-1215F0.2
0.5
10
lec-1332R0.2
0.5
10
lec-1269P0.2
0.5
.0
25.0
表示體積不確定。根據
25.0
DB12/T
652—2016表
1 DAS-68416-4表
1 DAS-68416-4
PCR
反應體系表
2 Lectin
PCR
反應體系在試樣
PCR
反應的同時,應設置陰性對照、陽性對照和空白對照。以非轉基因大豆基因組DNA質量分數為0.1%~1.0%的基因組
DNA(或采用
與非轉基因大豆基因組相比的拷貝數分數為
0.1%~1.0%的DNA
溶液)作為陽性對照;以水作為空白對照。各對照
PCR
反應體系中,除模板外,其余組分及
PCR
反應條件與
5.3.5.1
6 結果分析與表述6.1 Lectin內標準基因無典型擴增曲線,表明樣品中未檢出大豆成分,結果表述為“樣品中未檢測出大豆成分,檢測結果為陰性”。6.2 LectinCt值≤38DAS-68416-4轉化體特異性序列出現典型Ct值≤因耐除草劑大豆轉化體成分,檢測結果為陽性”。DB12/T
652—20166.3 LectinCt值≤38DAS-68416-4轉化體特異性序列未出現典型擴增曲線,表明樣品中未檢測出DAS-68416-4轉化體成分,結果表述為“樣品中未檢測出轉基因耐除草劑大豆DAS-68416-4
轉化體成分,檢測結果為陰性”。6.4 Lectin
/或
轉化體特異性序列出現典型擴增曲線,但
Ct
值在
~之間,進行重復實驗。如重復實驗結果符合
~
的情形,依照
6.1~6.3
進行判斷。如重復實驗檢
Ct
值仍在
38~
內標準基因和/或轉化體特異性序列,根據檢出參數情況,參照
~
對樣品進行判定。DB12/T
652—2016附錄A(資料性附錄)A.1 Lectin基因實時熒光PCR擴增產物核苷酸序列(Accession
No.K00821)1
CCACATTTGG
CCGGTAGCGT
TGCCAGCTTC61
GCCGCTTCCT
CTTCTATGCC
AAAGGCTTGC
AGATGGGC
A.2耐除草劑大豆DAS-68416-4轉化體特異性序列1 GGGCCTAACT
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯系上傳者。文件的所有權益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網頁內容里面會有圖紙預覽,若沒有圖紙預覽就沒有圖紙。
- 4. 未經權益所有人同意不得將文件中的內容挪作商業或盈利用途。
- 5. 人人文庫網僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內容的表現方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內容負責。
- 6. 下載文件中如有侵權或不適當內容,請與我們聯系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 2025屆山西省部分學校高三下學期4月模擬考試(省二模)政治試題(含答案)
- 河北旅游職業學院《數字游戲創作》2023-2024學年第二學期期末試卷
- 江西省南昌市教研室2025屆高三下學期開學考物理試題含解析
- 河北省滁州市衡水中學2024-2025學年高三第三次質量預測化學試題試卷含解析
- 鄭州輕工業大學《體育健美操》2023-2024學年第二學期期末試卷
- 上海市閔行區文萊中學2024-2025學年初三中考模擬沖刺卷(提優卷)(三)英語試題文試題含答案
- 江西省宜春市樟樹市2024-2025學年小升初數學高頻考點模擬卷含解析
- 河南臨潁新時代實驗校2025屆初三最后一卷語文試題含解析
- 湖南省株洲市第十八中學2024-2025學年高三下學期期末考試英語試題理試題(A卷)含解析
- 上海市松江區松江二中2024-2025學年高三下學期學前考試數學試題文試題含解析
- 眼科病人的心理護理支持與疏導學習
- 相鄰權糾紛知識講座
- 《天然氣取樣導則》課件
- 《公路建設項目竣工環境保護驗收指南》
- 職業暴露與安全防護ppt
- 抗腫瘤藥物處方審核要點
- 工業用烤箱安全操作規程范本
- 文件資料交接清單
- 人體解剖學與組織胚胎學課件
- 波導圓極化器結構形式的選擇
- 交流電的三要素
評論
0/150
提交評論