專題八生物技術與工程A組基礎對點練考點1發酵工程1.(2023·河北滄州模擬)傳統發酵技術是指直接利用原材料中天然存在的微生物,或利用前一次發酵保存下來的發酵物中的微生物進行發酵,制作食品的技術。通常是家庭式或作坊式的,可以用于腐乳、醬、醬油、醋、泡菜和豆豉等的加工。下列有關敘述正確的是()A.在制作酸奶過程中需先通氣培養,后密封發酵B.傳統發酵技術制作果酒、果醋和腐乳通常都不是純種發酵C.在一段時間內,果醋制作過程中發酵液pH逐漸降低,果酒制作過程中pH升高D.泡菜壇內有時會長一層白膜,這層白膜是產膜乳酸菌繁殖形成的2.(2023·重慶模擬)人類很早就能制作果酒,并用果酒進一步發酵生產果醋,用果酒發酵生產果醋時,果酒中的酒精含量對果醋的醋酸產率會產生一定的影響。某技術組配制發酵液研究了初始酒精濃度對醋酸含量的影響,結果如圖,下列分析錯誤的是()A.果酒發酵生產果醋過程中,酒精為醋酸菌提供碳源B.用果酒發酵果醋需要接種醋酸菌,并將發酵溫度升至30~35℃即可C.據圖可知較高濃度的酒精會抑制醋酸菌的生長,使產酸量下降D.醋酸發酵過程中會釋放少量能量3.(2023·福建南平三模)聚乳酸(PLA)是以乳酸為主要原料的聚合物。與聚丙烯等材料相比,具有更好的生物可降解性,但在自然條件下降解還是較緩慢。某科研機構擬從黃粉蟲腸道中篩選PLA降解菌,按照如圖流程進行培養鑒定。下列敘述錯誤的是()A.實驗過程中需要設置適宜的溫度和pH環境,并保證嚴格的無菌操作B.PLA既可為PLA降解菌提供碳源,又對培養基中微生物起選擇作用C.體外培養可采用平板劃線接種,同時將接種和未接種的平板倒置培養D.純化培養后,可根據菌落形狀、大小、顏色及DNA檢測等進行菌種鑒定4.(2023·福建漳州模擬)某學者用“影印培養法”研究大腸桿菌抗藥性形成與環境的關系:將原始敏感菌種接種在1號培養基上,培養出菌落后,將滅菌絨布在1號上印模,絨布沾上菌落并進行轉印,使絨布上的菌落按照原位接種到2號和3號培養基上。待3號上長出菌落后,在2號上找到對應的菌落,然后接種到不含鏈霉素的4號培養基中,培養后再接種到5號培養基上,重復以上步驟。實驗過程如圖所示。下列相關敘述錯誤的是()A.大腸桿菌抗鏈霉素的變異可能是由基因突變引起的B.1號和5號采用稀釋涂布平板法將菌種接種在相應的培養基上C.4號、8號、12號培養基中抗性菌落(株)的比例最大的是4號D.大腸桿菌抗藥性的形成是在施加鏈霉素之前,而發生選擇作用是在施加鏈霉素之后考點2細胞工程和胚胎工程5.(2023·河北張家口一模)種植型茄子是夏季主要蔬菜之一,容易受到線蟲侵染,產量降低。野生型茄子具有抗線蟲特性。由于種植型茄子和野生型茄子很難采用雜交育種,某科研小組采用植物體細胞雜交技術培育出了具有兩個品種優良性狀的新品種。下列相關敘述正確的是()A.利用胰蛋白酶或膠原蛋白酶去除細胞壁,獲得原生質體B.種植型茄子和野生型茄子的原生質體融合可用PEG或滅活病毒等誘導C.雜種細胞經外源植物激素誘導脫分化后,可直接形成雜種植物D.與種植型茄子的染色體組數目相比,該新品種的染色體組數目增加6.(2023·浙江模擬)β-hcg(人絨毛膜促性腺激素)是由滋養層細胞分泌的一種糖蛋白。利用細胞工程方法以β-hcg為抗原制備單克隆抗體。下列敘述錯誤的是()A.制備抗β-hcg單克隆抗體可以應用于醫學診斷B.聚乙二醇可以誘導B淋巴細胞和B淋巴細胞融合C.小鼠注射β-hcg后,產生的血清抗體為單克隆抗體D.制備抗β-hcg單克隆抗體,可以將雜交瘤細胞注射到動物體內7.(2023·遼寧模擬預測)為了高效分離高質量的椪柑原生質體,科研人員采用組合酶液Ⅰ(2%纖維素酶R+2%離析酶)與組合酶液Ⅱ(2%纖維素酶W+2%離析酶)進行椪柑原生質體的分離,實驗過程中加入適量的甘露醇,其結果如下圖,其中活性氧會影響原生質體的再生。下列相關敘述錯誤的是()A.加入纖維素酶和離析酶是為了水解纖維素和果膠B.兩實驗中酶的用量、溫度、pH、酶解時間必須相同C.實驗中加入的甘露醇具有維持溶液滲透壓的作用D.實驗結果表明使用組合酶液Ⅱ獲取原生質體的效果較好考點3基因工程8.(2023·湖北模擬)為了示蹤衰老細胞在機體中的分布,科研人員綜合利用基因工程和細胞工程的技術手段,將綠色熒光蛋白基因gfp插入了小鼠p16基因的下游,使兩個基因“融合”。轉基因小鼠的衰老細胞中,p16和gfp會特異性表達,從而使其在紫外光下呈綠色。下列分析錯誤的是()A.可用PCR技術特異性地快速擴增綠色熒光蛋白基因gfpB.轉基因小鼠的p16基因和gfp基因具有各自獨立的啟動子C.常用顯微注射法將改造好的融合基因注入小鼠的受精卵中D.可選擇發育到桑葚胚期的轉基因小鼠胚胎移植到受體母鼠子宮內9.(2023·浙江紹興二模)埃博拉病毒是一種引起人類產生埃博拉出血熱的單鏈RNA病毒,腺病毒是一類侵染動物細胞的DNA病毒,某研究團隊利用埃博拉病毒跨膜表面糖蛋白(GP),以人復制缺陷腺病毒為載體研發了埃博拉病毒疫苗。下圖為部分研制流程示意圖,下列敘述正確的是()A.埃博拉病毒中分離的GP基因經限制酶切割后,通過DNA連接酶與質粒相連接B.病毒的擴大培養過程中需要使用CO2培養箱調節pHC.疫苗在人體內發揮作用的過程中,腺病毒不斷增殖D.在重組腺病毒中,GP基因上游必須有啟動子以驅動其復制和表達10.(2023·天津南開二模)PCR技術可用于遺傳多樣性的研究。下圖是對兩個跳蟲(A和B)DNA分析的實驗過程,有關敘述錯誤的是()A.蛋白酶可以分解組織中的蛋白質,在提取DNA時加入蛋白酶有助于釋放出DNAB.Taq酶能夠耐高溫,高溫下不會變性,常在PCR中用于DNA鏈的合成C.將已知長度的DNA片段裝到凝膠上作參照,可用于估測樣本DNA片段的大小D.陰性對照是已知DNA模板及PCR擴增過程所需的物質,以監測試劑是否污染11.(2023·安徽蚌埠模擬)最早被發現的熒光蛋白是綠色熒光蛋白,科學家通過一定的技術手段獲得了黃色熒光蛋白。下列有關研究思路不正確的是()A.需要設計發出黃色熒光的蛋白質的三維結構B.需要推測出發出黃色熒光蛋白的氨基酸序列C.需要根據其氨基酸序列合成出相應的mRNAD.需要根據推測的氨基酸序列合成相應的DNAB組能力提升練1.(2023·河北唐山三模改編)結核分枝桿菌可以引起結核病,主要感染肺部,其細胞壁厚、脂質含量高,能抵御不利自然環境。為探究不同抗生素對結核分枝桿菌的抑菌效果,將患者體內的病原菌進行分離培養,實驗結果如圖所示。培養基成分主要含有天冬氨酸、甘油、雞蛋黃、KH2PO4、MgSO4等。下列分析不正確的是()A.結核分枝桿菌會引起人體發生體液免疫和細胞免疫B.此培養基成分中提供氮源的是天冬氨酸C.接種過程所用實驗器材有酒精燈、涂布器、微量移液器D.圖中D為含有無菌水的濾紙片作為對照2.(2023·廣東汕頭金山中學模擬)科學家在研究基因定位時,將人的不能利用次黃嘌呤的突變細胞株(HGPRT-)和小鼠不能利用胸腺脫氧核苷的突變細胞株(TK-)進行融合,然后利用選擇培養基進行篩選,得到3株能在選擇培養基上增殖的穩定的細胞株(如下表)。據此分析下列說法錯誤的是()細胞株編號123所含人染色體編號11,14,17,227,11,14,175,7,17,21A.可用PEG誘導人和小鼠細胞融合B.在選擇培養基上增殖的細胞株1中最多有4條人的染色體C.該選擇培養基中應該添加次黃嘌呤和胸腺脫氧核苷D.由表中信息可推測人的TK基因可能位于17號染色體上3.(2023·湖南模擬改編)研究人員欲采用“異源囊胚補全法”將人源iPS細胞培育出的腎元祖細胞導入囊胚,然后移植到去除生腎區既存的腎元祖細胞的仔豬體內,培育出100%人源iPS細胞來源的腎單位并實際應用于移植醫療(如下圖所示)。下列說法不正確的是()A.培育人源腎元祖細胞需向iPS細胞培養液中加入定向誘導分化劑B.過程②需要將熒光蛋白標記的人源腎元祖細胞植入囊胚的內細胞團C.過程③操作之前不需要對代孕母豬進行超數排卵和同期發情處理D.該技術培育的人源腎臟需要考慮腎移植個體之間的遺傳差異4.(2023·山東臨沂二模改編)轉基因植物中標記基因的剔除可有效防止基因污染,剔除常用分離剔除法和重組剔除法。分離剔除法是在轉基因時將目的基因和標記基因分別構建在兩個Ti質粒上,通過共轉化得到轉基因植物后讓其自交得到不含標記基因的轉基因個體;重組剔除法利用Cre/LoxP重組酶系統,Cre酶能有效剔除重組載體中含有標記基因的序列,只留下一個LoxP位點,具體原理如下圖。下列說法不正確的是()A.利用分離剔除法時,目的基因和標記基因都應插到Ti質粒的T-DNA序列內部B.分離剔除時目的基因和標記基因插到植物細胞的同源染色體或非同源染色體上均可成功C.上述重組載體中啟動子1在農桿菌中可發揮作用,而在植物細胞中不能發揮作用D.經重組剔除后的標記基因,因沒有啟動子而無法啟動基因的轉錄5.(2023·湖南二模)癌癥的免疫療法通過重新激活抗腫瘤的免疫細胞,克服腫瘤的免疫逃逸,在癌癥治療方法中取得越來越突出的地位,科研人員在不斷研究中發現多種免疫治療方法的結合是提高治療效果的途徑之一。(1)癌細胞由于基因突變導致其表面物質發生改變,如某些種類癌細胞表面高表達膜蛋白PSMA和PD-L1,如圖1PD-L1能抑制T細胞的活化,使癌細胞發生免疫逃逸。臨床上可利用PD-1的單克隆抗體進行癌癥治療,據圖1推測,其原因是PD-1的單克隆抗體與結合,阻斷了的結合,避免抑制T細胞活化。

(2)CD28是T細胞表面受體,T細胞的有效激活依賴于CD28在癌細胞與T細胞結合部位的聚集。因此,科研人員嘗試構建既能結合PSMA還能結合CD28的雙特異性抗體PSMA×CD28,誘導T細胞定向殺傷癌細胞,如圖2。圖1圖2制備過程:先將分別注射到小鼠體內,分離出B淋巴細胞,誘導其與小鼠的細胞融合,篩選得到兩種雜交瘤細胞,再誘導兩種細胞融合。成功融合的細胞會表達兩種L鏈和兩種H鏈,由于而產生多種抗體,因此還需進行篩選才能獲得所需的雙特異性抗體PSMA×CD28。

(3)科研人員將癌細胞和T細胞共同培養,加入不同抗體,比較不同抗體對T細胞活化的作用。實驗各組由活化T細胞產生的細胞因子IL-2含量如圖3所示,其結果說明

(言之有理即可)。

6.(2023·湖南岳陽模擬)為研究干旱脅迫基因LEA和VOC對甘藍型油菜油脂的積累機制,科研人員構建了兩個基因表達載體。其中基因LEA與熒光素酶基因(Luc)構建成基因表達載體甲,基因VOC和標記基因構建成基因表達載體乙,相關序列及酶切位點如圖所示。箭頭表示轉錄方向。(1)利用PCR擴增LEA基因時,需要在引物的(填“3'端”或“5'端”)添加限制酶識別序列,添加序列對應的限制酶是,選擇上述酶的依據是

。(2)為了構建基因表達載體甲,依據圖中已知堿基序列,在PCR擴增儀中加入的引物的堿基序列為。

(3)乙酰-CoA羧化酶基因(AC)是油脂合成過程的關鍵酶基因,甘油三酯酯酶基因(ATGL)是油脂分解過程的關鍵酶基因。將基因表達載體甲、乙分別導入植物細胞培養成轉基因植物A、B,在干旱脅迫的環境下培養兩種轉基因植物和正常植物,分別檢測植物體內AC和ATGL基因的表達水平,結果如下圖。①在分子水平上,用方法檢測AC酶和ATGL酶的含量可得到上述結果。

②基于以上研究,干旱脅迫基因LEA和VOC在甘藍型油菜油脂積累中的機制是

。

C組專項命題培優練1.[單克隆抗體的應用](2023·河南三模)雙特異性抗體可同時與癌細胞和免疫細胞特異性結合,它一端與癌細胞結合,一端與T細胞結合,將T細胞拉近癌細胞,大大提高了殺滅癌細胞的效率。CD19是癌細胞表面的抗原蛋白,CD3蛋白受體位于T細胞表面,與抗體結合后,其免疫功能得到激活。下圖是研究人員通過雜交瘤細胞技術生產雙特異性單克隆抗體的部分過程?；卮鹣铝袉栴}。(1)給小鼠注射CD19蛋白,是為了從小鼠的脾臟中分離得到;注射的抗原A是指。

(2)過程②和④所用誘導方法與誘導植物細胞融合所用方法的不同之處是。過程③培養雜交瘤細胞時需提供的氣體條件是95%空氣和5%CO2的混合氣體,其中CO2的主要作用是。過程⑤篩選獲得的細胞具有的特點是。

(3)與從血清中提取的CD19抗體、抗A抗原的抗體相比,通過雙雜交瘤細胞得到雙特異性單克隆抗體的優點是。雙特異性單克隆抗體治療癌癥的效果往往優于抗體CD19和A抗體的聯合使用,原因是

。2.[PCR技術及其應用](2023·山東煙臺一模)IKK激酶由IKKα、IKKβ和IKKγ三種亞基組成,該酶參與動物體內免疫細胞的分化。臨床上發現某重癥聯合免疫缺陷(SCID)患兒的IKKβ基因編碼區第1183位堿基T突變為C。為研究該患兒發病機制,研究人員應用大引物PCR定點誘變技術獲得突變基因,并培育出SCID模型小鼠。圖1為定點誘變獲得突變基因的過程。圖1圖2(1)在定點誘變獲取突變基因時,PCR1中使用的引物有,PCR2中使用的引物有。PCR1和PCR2不能在同一個反應體系中進行,原因是

。(2)PCR在第一個循環之前通常將DNA樣品加熱至95℃數分鐘進行預變性處理,其目的是。由于大引物較長,含C與G的堿基較多,為減少非目標基因的獲得,在PCR2復性過程中應采取的措施是。

(3)培育模型鼠的過程中,需用限制酶SacⅠ、HindⅢ對突變基因和載體進行雙酶切,雙酶切的優點是。研究人員經鑒定、篩選獲得一只轉基因雜合鼠HE,讓HE與野生鼠雜交得F1,F1雌雄鼠隨機交配得F2。對F2中純合野生鼠WT、純合突變鼠HO、雜合鼠HE三種小鼠胸腺淋巴細胞中組成IKK激酶的三種亞基進行提純和電泳,結果如圖2。據此結果推測SCID患者免疫缺陷產生的機制是。

3.[基因編輯技術及其應用](2023·天津紅橋二模)CRISPR/Cas9系統可對基因組進行定點編輯,其工作原理如圖1所示。該系統主要包含單鏈向導RNA和Cas9酶兩個部分,能特異性識別并結合特定的DNA序列,從而引導Cas9酶到相應位置并剪切DNA,最終實現對靶基因序列的編輯。請回答下列問題。圖1圖2圖3(1)圖1為CRISPR/Cas9系統作用示意圖,該系統能精準識別相關基因的原理是sgRNA與目標DNA發生,Cas9酶可催化(化學鍵名稱)水解,剪切特定DNA片段。

(2)LMNA基因編碼的核纖層蛋白與維持細胞核正常形態有關?？蒲腥藛T利用CRISPR/Cas9技術對體外培養HepG2(人源肺癌細胞)細胞株進行基因編輯,獲得了LMNA基因敲除的穩定細胞系。①體外培養HepG2時需要一定比例的O2和CO2,其中CO2的主要作用是;培養基除滅菌外還需要通過來保證無菌無毒環境。

②HepG2細胞中沒有編碼Cas9的基因,需將Cas9基因及sgRNA基因拼接形成拼接基因并與質粒結合導入HepG2細胞,用圖2中的質粒以及含Cas9-sgRNA拼接基因的DNA片段構建表達載體時,應選用進行酶切。

③將構建好的表達載體與用處理的細菌置于適宜反應體系中培養。然后將培養的細菌涂布于含的平板培養基上,37℃培養,24h后挑取菌落,提取質粒作為模板,選擇圖3中引物組合和,通過PCR和電泳技術鑒定是否重組成功。④用鑒定成功的工程菌對HepG2細胞進行轉染,培養三天后收集HepG2細胞,提取基因組,對其序列進行檢測,判斷Cas9-sgRNA拼接基因是否導入成功。若從細胞水平進行檢測,可以檢測HepG2細胞數目增長量或。

答案：【A組基礎對點練】1.B解析乳酸菌是厭氧微生物,不能通入空氣,A項錯誤;家庭制作果酒、果醋和腐乳利用的都是自然界的菌種,通常都不是純種發酵,B項正確;果醋制作利用的是醋酸菌,醋酸菌能夠產生醋酸,使溶液的pH逐漸降低,果酒制作過程中,酵母菌無氧呼吸產生二氧化碳與酒精,二氧化碳溶于水形成碳酸,隨著二氧化碳濃度的增加,溶液的pH逐漸降低,因此果酒、果醋制作過程中溶液的pH都是逐漸降低,C項錯誤;泡菜壇內有時會長一層白膜,這層白膜是由于產膜酵母的繁殖形成的,D項錯誤。2.B解析微生物生長需要營養物質(氮源、碳源、水、無機鹽等),果酒發酵生產果醋過程中,酒精作為碳源,A項正確;醋酸菌是好氧菌,酒變醋的過程中除了接種醋酸菌、提高發酵溫度外,還應通入氧氣,B項錯誤;據圖可知,初始酒精濃度為6%時,醋酸含量最高,是發酵的最適濃度,酒精濃度為10%時醋酸含量最低,則較高濃度的酒精會抑制醋酸菌的生長,使產酸量下降,C項正確;醋酸發酵過程中會釋放少量能量,大部分能量儲存在醋酸中,D項正確。3.C解析微生物培養需要有一定的營養、適宜的溫度和pH等條件,故實驗過程中需要設置適宜的溫度和pH環境,并保證嚴格的無菌操作,A項正確;聚乳酸(PLA)是以乳酸為主要原料的聚合物,故可為PLA降解菌提供碳源,不能利用PLA的微生物無法在該培養基上生存,故PLA又對培養基中微生物起選擇作用,B項正確;根據圖示可知,體外培養可采用稀釋涂布平板法進行接種,同時將接種和未接種的平板倒置培養,C項錯誤;菌落形狀、大小、顏色及DNA檢測等是進行菌種鑒定的重要依據,故純化培養后,可根據菌落形狀、大小、顏色及DNA檢測等進行菌種鑒定,D項正確。4.C解析大腸桿菌是原核生物,大腸桿菌抗鏈霉素的性狀可能是由基因突變引起的,A項正確;由圖可知,1號和5號采用稀釋涂布平板法將菌種接種在相應選擇培養基上,B項正確;4號、8號、12號培養基中,大腸桿菌抗鏈霉素菌株的比例逐漸增大,因此抗性菌落(株)的比例最大的是12號,C項錯誤;微生物的抗藥性突變是自發產生的,環境只能對抗藥性突變進行選擇,因此大腸桿菌抗藥性的形成是在施加鏈霉素之前,而發生選擇作用是在施加鏈霉素之后,D項正確。5.D解析在進行體細胞雜交之前,必須先利用纖維素酶和果膠酶去除細胞壁,獲得具有活力的原生質體,A項錯誤;進行原生質體間的融合,人工誘導的方法分為物理法和化學法,滅活的病毒適用于動物細胞融合,B項錯誤;雜種細胞經植物組織培養(即脫分化和再分化)獲得雜種植物,C項錯誤;新品種是通過植物體細胞雜交技術培育而成,因此,與種植型茄子的染色體組數目相比,該新品種的染色體組數目增加,D項正確。6.C解析制備抗β-hcg單克隆抗體可以應用于醫學診斷,廣泛運用于早孕的診斷,快速方便,A項正確;聚乙二醇誘導B淋巴細胞與骨髓瘤細胞融合的同時,也可以誘導B淋巴細胞與B淋巴細胞融合,B項正確;單克隆抗體是指由單個B淋巴細胞進行無性繁殖形成的細胞系所產生出的化學性質單一、特異性強的抗體,C項錯誤;制備抗β-hcg單克隆抗體,可以將雜交瘤細胞注射到動物體內,屬于體內培養,成本低,D項正確。7.B解析酶具有專一性,加入纖維素酶和離析酶是為了水解纖維素和果膠,進而獲得原生質體,A項正確;兩實驗中酶的種類不同,為保證單一變量,應控制好無關變量,即應在各自酶的最適溫度和pH下進行實驗,酶的用量和時間必須相同,B項錯誤;實驗中加入的甘露醇具有維持溶液滲透壓的作用,保證細胞具有正常形態,行使正常功能,C項正確;實驗結果表明使用組合酶液Ⅱ獲取原生質體的產量高,活性氧含量差別不大,故效果較好,D項正確。8.B解析綠色熒光蛋白基因gfp為DNA片段,可用PCR技術特異性地快速擴增,A項正確;將綠色熒光蛋白基因gfp插入了小鼠p16基因的下游,使兩個基因“融合”,因此p16基因和gfp基因共用了一個啟動子,它們之間關聯表達,B項錯誤;將目的基因導入動物細胞最有效的方法是顯微注射法,C項正確;胚胎移植時,應選擇處于桑葚胚或囊胚期的胚胎,D項正確。9.B解析埃博拉病毒是RNA病毒,GP基因的本質是RNA,而質粒的本質是DNA,故GP基因不能被限制酶切割,A項錯誤;培養過程中CO2的作用是調節pH,B項正確;腺病毒為復制缺陷腺病毒,故疫苗在人體內發揮作用的過程中,腺病毒不會增殖,C項錯誤;啟動子是轉錄的起點,故在重組腺病毒中,GP基因上游必須有啟動子以驅動轉錄,D項錯誤。10.D解析跳蟲細胞中大量DNA和蛋白質構成染色體,所以在提取DNA時加入蛋白酶有助于釋放出DNA,A項正確;Taq酶是具有熱穩定性的DNA聚合酶,耐高溫,可以催化DNA鏈的合成,B項正確;雙鏈DNA分子通過凝膠的速率與其分子量的常用對數成反比。據此用已知分子量的標準物質和待測分子量的DNA片段同時電泳,比較其電泳速率,即可求出待測片段的分子大小,C項正確;陰性對照是在PCR試劑中不加模板DNA或RNA,進行PCR擴增,以監測試劑是否污染,D項錯誤。11.C解析對綠色熒光蛋白進行改造獲得黃色熒光蛋白的過程需要利用蛋白質工程,蛋白質工程首先要從預期的蛋白質功能出發,設計黃色熒光蛋白的三維結構,A項正確;根據中心法則逆推以確定目的基因的堿基序列,預期蛋白質功能→設計預期的蛋白質結構→推測應有氨基酸序列→找到對應的脫氧核苷酸序列(基因),故設計得到黃色熒光蛋白的三維結構之后,進一步推測其應有的氨基酸序列,B項正確;推測出黃色熒光蛋白應有的氨基酸序列之后,應對綠色熒光蛋白的脫氧核苷酸序列進行改造或合成相應的DNA(基因),不需要合成相應的mRNA,C項錯誤,D項正確?！綛組能力提升練】1.B解析結核分枝桿菌主要感染肺部,屬于寄生細菌,會引起體液免疫和細胞免疫,A項正確;培養基中的天冬氨酸和雞蛋黃都含有N,故此培養基成分中提供氮源的是天冬氨酸和雞蛋黃,B項錯誤;結合圖示,本探究實驗采用的是稀釋涂布平板法,故接種過程所用實驗器材有酒精燈、涂布器、微量移液器,C項正確;實驗中圓紙片D(不含有抗生素)用作實驗對照,為了保證單一變量,對圓紙片D的處理方法是浸過無菌水,D項正確。2.B解析誘導動物細胞融合的方法有物理法、化學法(PEG,又稱聚乙二醇)、滅活的病毒誘導,A項正確;在選擇培養基上增殖的細胞株1中,如果細胞處于有絲分裂后期,則一個細胞中含有8條人的染色體,B項錯誤;結合題干“將人的不能利用次黃嘌呤的突變細胞株(HGPRT-)和小鼠不能利用胸腺脫氧核苷的突變細胞株(TK-)進行融合,然后利用選擇培養基進行篩選,得到3株能在選擇培養基上增殖的穩定的細胞株”可知,該選擇培養基上應添加次黃嘌呤和胸腺脫氧核苷以篩選出成功融合的細胞,C項正確;分析表格數據可知,細胞株1、2、3均含有人的17號染色體,結合題干“和小鼠不能利用胸腺脫氧核苷的突變細胞株(TK-)進行融合”可推測人的TK基因可能位于17號染色體上,D項正確。3.C解析培育人源腎元祖細胞需向iPS細胞培養液中加入定向誘導分化劑從而獲得腎元祖細胞,A項正確;過程②需要將熒光蛋白標記的人源腎元祖細胞植入囊胚的內細胞團,從而保證人源腎細胞的正常發育,因為內細胞團會發育成完整胚胎,B項正確;過程③操作之前需對代孕母豬進行同期發情處理,但不需要進行超數排卵處理,因為不需要代孕母豬提供卵母細胞,C項錯誤;該技術培育的人源腎臟依然需要考慮腎移植個體之間的遺傳差異,因為該方法獲得的腎臟在不同個體中的排斥反應可能不同,D項錯誤正確。4.C解析Ti質粒的T-DNA序列可轉移至受體細胞,并且轉移到受體細胞染色體DNA上,所以利用分離剔除法時,目的基因和標記基因都應插到Ti質粒的T-DNA序列內部,進而成功整合到受體細胞染色體上,A項正確;分離剔除時目的基因和標記基因插到植物細胞的同源染色體(這種情況下,目的基因和標記基因需要分別位于一條染色體上)或非同源染色體上均可最終獲得不含標記基因的轉基因個體,即均可成功,B項正確;啟動子1具有物種特異性,故上述重組載體中啟動子1在農桿菌中不能發揮作用,而在植物細胞中能發揮作用,C項錯誤;由圖可知,經重組剔除后的標記基因沒有啟動子,而啟動子的作用是驅動轉錄,故經重組剔除后的標記基因無法啟動基因的轉錄,D項正確。5.答案(1)原癌基因和抑癌PD-1PD-1和PD-L1(2)PSMA、CD28骨髓瘤L鏈和H鏈的隨機組合(3)PSMA×CD28和PD-1單抗聯合使用能夠顯著激活T細胞,且隨PSMA×CD28濃度增加激活作用增強;單獨使用PSMA×CD28或PD-1單抗,都不能顯著激活T細胞解析(1)癌細胞是由于原癌基因和抑癌基因發生突變導致遺傳物質改變。圖1中癌細胞表面的PD-L1和T細胞表面的PD-1結合,抑制T細胞的活化。PD-1的單克隆抗體與PD-1特異性結合,阻斷了PD-L1和PD-1的結合,避免抑制T細胞活化。(2)制備雙特異性抗體PSMA×CD28,則抗原是PSMA和CD28,將兩種物質分別注射到小鼠體內,刺激B細胞增殖分化出相應的漿細胞,將兩類漿細胞分別和小鼠的骨髓瘤細胞融合,形成雜交瘤細胞,再誘導雜交瘤細胞融合。成功融合的細胞會表達兩種L鏈和兩種H鏈,所需的雙特異性抗體PSMA×CD28是特定的L鏈和H鏈結合,由于L鏈和H鏈的隨機組合,需要進行篩選。(3)自變量是抗體種類,其中PSMA×CD28和PD-1單抗聯合使用能夠顯著激活T細胞,且隨PSMA×CD28濃度增加激活作用增強;單獨使用PSMA×CD28或PD-1單抗,都不能顯著激活T細胞。6.答案(1)5'端EcoRⅤ和XbaⅠLuc中存在BamHⅠ識別序列,BamHⅠ會將Luc切斷;一種酶切會導致載體、LEA自身環化及LEA反向連接(2)5'-GATATCATGGGC-3'和5'-TCTAGACTAGTG-3'(3)①抗原—抗體雜交②在干旱脅迫的環境下,LEA通過促進AC的表達使植物油脂增加;VOC通過抑制ATGL的表達減弱油脂的降低解析(1)耐高溫的DNA聚合酶不能從頭開始合成DNA,而只能從引物的3'端延伸DNA鏈,因此PCR擴增需要引物。引物與目的基因所在DNA分子遵循堿基互補配對原則,所以擴增LEA基因時,需要在引物的5'端添加限制酶的識別序列。由于Luc中存在BamHⅠ識別序列,BamHⅠ會將Luc切斷;一種酶切會導致載體、LEA自身環化及LEA反向連接等,因此選擇的限制酶是EcoRⅤ和XbaⅠ。(2)根據已知序列,由于引物只能引導子鏈從5'→3'延伸,根據堿基互補配對原則,用PCR擴增時的兩個引物對應的序列為:5'-GATATCATGGGC-3'和5'-TCTAGACTAGTG-3'。(3)①檢測酶(蛋白質)分子水平上采用抗原—抗體雜交技術進行檢測。②根據檢測結果,轉基因A植株的AC酶變高了,轉基因B植株的ATGL酶變低了,可以推測在干旱脅迫的環境下,LEA通過促進AC的表達使植物油脂增加;VOC通過抑制ATGL的表達減弱油脂的降低?！綜組專項命題培優練】1.答案(1)免疫的B淋巴細胞CD3蛋白(2)滅活的病毒維持培養液的pH既能無限增殖,又能產生特異性抗體(3)雙特異性單克隆抗體可以識別兩種抗原既不損傷正常細胞,又減少了用藥劑量解析(1)給小鼠注射CD19蛋白,是為了從小鼠的脾臟中獲得已免疫的B淋巴細胞,該細胞能夠產生特定抗體。分析題意,本過程的目的是得到雙特異性抗體,故為保證最終雙特異性抗體的產生,注射的抗原A應是CD3蛋白。(2)過程②和④是誘導動物細胞融合,該過程所用誘導方法與誘導植物細胞融合所用方法的不同之處是用滅活的病毒誘導;過程③培養雜交瘤細胞時需提供的氣體條件是95%空氣和5%CO2的混合氣體,其中CO2的主要作用是維持培養液的pH;過程⑤是融合細胞的篩選,篩選后得到的雜交瘤細胞,特點是既能無限增殖,又能產生特異性抗體。(3)與從血清中提取的CD19抗體、抗A抗原的抗體相比,通過雙雜交瘤細胞得到雙特異性單克隆抗體的優點是能同時識別CD19和A兩種抗原,作用效果更顯著。雙特異性單克隆抗體治療癌癥的效果往往優于抗體CD19和A抗體的聯合使用,原因是該特異性抗體可以借助單克隆抗體的識別作用,將藥物帶到癌細胞位置,既不損傷正常細胞,又減少了用藥劑量。2.答案(1)引物A、引物C引物B、大引物b引物之間能結合,會干擾引物和模板鏈的結合,影響PCR過程(2)增加大分子模板DNA徹底變性的概率適當提高復性溫度(3)防止質粒和目的基因的自身環化及反向連接IKKβ基因突變導致IKKβ含量減少,IKK激酶活力降低,不利于免疫細胞的分化解析(1)在PCR反應體系中,除需要加入引物和IKKβ基因,還需要加入Taq酶(耐高溫DNA聚合酶)、4種脫氧核苷酸(原料)、緩沖液(維持pH)、Mg2+(激活DNA聚合酶)等;在圖1獲取突變基因過程中,分析題圖可知,在PCR1中,需要兩種引物,將來在切取IKKβ基因時,需要在基因的左側用限制酶HindⅢ來切割,在基因的右側用限制酶SacⅠ來切割,因此在該基因的左端應有限制酶HindⅢ識別的序列,在基因的右端應有限制酶SacⅠ識別的序列,因此在PCR1中結合到基因右端的引物序列從5'端到3'端的開始部位應含有限制酶SacⅠ識別的序列,所以要用到引物C,從題圖中看,另一個引物從5'端到3'端的序列中開始部位應含有突變堿基C,所以要用到引物A。從圖中看,在PCR2中,有一個引物結合到了基因的左