《實時熒光定量PCR儀性能評價通則GB/T42753-2023》詳細解讀contents目錄1范圍2規(guī)范性引用文件3術語和定義4縮略語5要求5.1工作條件contents目錄5.2外觀5.3安全性5.4環(huán)境適應性5.5電磁兼容性5.6性能要求6評價方法6.1外觀檢查contents目錄6.2安全性試驗6.3環(huán)境適應性試驗6.4電磁兼容性試驗6.5性能試驗7評價報告contents目錄附錄A(資料性)儀器升降溫循環(huán)程序和樣本測試孔位排布A.1升降溫循環(huán)程序A.2溫度控制性能試驗的孔位排布A.3熒光檢測性能試驗的孔位排布A.4整機性能試驗的孔位排布附錄B(資料性)熒光參比溶液的制備方法contents目錄附錄C(資料性)兩組數(shù)據(jù)顯著差異的判斷方法C.1兩組數(shù)據(jù)顯著差異的判斷方法C.2F分布分位數(shù)表C.3t分布分位數(shù)表附錄D(資料性)報告格式示例參考文獻011范圍適用對象實時熒光定量PCR儀的制造商01實時熒光定量PCR儀的使用者02相關的檢驗檢測機構和技術監(jiān)督部門03實時熒光定量PCR儀的性能參數(shù)性能評價的方法和步驟涵蓋內(nèi)容儀器性能的評價指標及其接受標準適用范圍限定本通則僅適用于實時熒光定量PCR儀的性能評價不涉及儀器使用過程中的樣本處理、試劑準備等操作的評價““010203提供統(tǒng)一的實時熒光定量PCR儀性能評價標準確保儀器性能滿足科研和臨床診斷的需求為制造商和使用者提供儀器性能評價的依據(jù)和方法目的和意義022規(guī)范性引用文件核心引用文件該通則在制定過程中，主要引用了與實時熒光定量PCR儀性能評價密切相關的國家或行業(yè)標準，這些標準為本通則的制定提供了技術支撐和規(guī)范依據(jù)。輔助性引用文件除了核心引用文件外，還參考了一系列與PCR技術、儀器設備性能評價等相關的輔助性標準和規(guī)范，這些文件為通則的細化和實施提供了補充和支持。2.規(guī)范性引用文件文件的選擇原則在選擇規(guī)范性引用文件時，主要考慮了文件的權威性、時效性和適用性。所有引用的文件均經(jīng)過嚴格篩選和評估，確保其內(nèi)容與本通則的要求相契合，并能為實時熒光定量PCR儀的性能評價提供有效的指導。引用文件的作用規(guī)范性引用文件在通則中起到了至關重要的作用。它們不僅為通則的制定提供了技術依據(jù)，還為實施過程中的具體操作提供了標準化的指導。通過引用這些文件，通則能夠更加科學、準確地評價實時熒光定量PCR儀的性能，從而推動行業(yè)的技術進步和質(zhì)量提升。2.規(guī)范性引用文件033術語和定義定義實時熒光定量PCR儀是一種通過熒光測量技術，實時監(jiān)測PCR反應過程中熒光信號變化的儀器。功能該儀器能夠自動收集熒光數(shù)據(jù)，通過計算機進行分析和處理，從而實現(xiàn)對PCR產(chǎn)物的定量檢測。3.1實時熒光定量PCR儀定義熒光定量系統(tǒng)是實時熒光定量PCR儀的核心部件，負責激發(fā)熒光并檢測熒光信號。組成該系統(tǒng)通常由熒光激發(fā)光源、熒光檢測器以及相關的光路系統(tǒng)組成。3.2熒光定量系統(tǒng)3.3循環(huán)過程監(jiān)測意義通過循環(huán)過程監(jiān)測，可以了解PCR反應的實時動態(tài)，為后續(xù)的定量分析和結(jié)果解讀提供依據(jù)。定義循環(huán)過程監(jiān)測是指在PCR反應過程中，對每個循環(huán)的熒光信號進行實時監(jiān)測和記錄。熒光數(shù)據(jù)分析是指對實時熒光定量PCR儀收集的熒光數(shù)據(jù)進行處理和分析的過程。定義熒光數(shù)據(jù)分析通常包括數(shù)據(jù)預處理、熒光曲線擬合、Ct值計算等步驟，旨在從熒光數(shù)據(jù)中提取出有用的生物學信息。方法3.4熒光數(shù)據(jù)分析044縮略語通過特定的引物和耐熱DNA聚合酶，實現(xiàn)DNA的快速復制。在醫(yī)學診斷、法醫(yī)學、生物技術等領域有廣泛應用。聚合酶鏈式反應（PolymeraseChainReaction）：一種分子生物學技術，用于擴增特定的DNA片段。PCR實時熒光定量PCR（QuantitativeReal-TimePolymeraseChainReaction）：在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號實時監(jiān)測PCR進程。可用于定量分析DNA模板的初始濃度，具有靈敏度高、特異性強、準確性好等優(yōu)點。qPCR常用于基因表達分析、病原體檢測、基因突變篩查等。GB/T旨在規(guī)范行業(yè)行為，提高產(chǎn)品質(zhì)量和安全性能。GB/T標準具有較高的權威性和指導意義，但并非強制執(zhí)行。國家推薦性標準（Guobiao/Tuijian）：由國家標準化管理委員會發(fā)布，為全國范圍內(nèi)推薦采用的標準。010203DNA脫氧核糖核酸（DeoxyribonucleicAcid）：生命體內(nèi)存儲遺傳信息的生物大分子。01由四種堿基（A、T、C、G）組成的雙螺旋結(jié)構，決定了生物的遺傳特征。02是生物遺傳信息的載體，也是生物進化的基礎。03055要求1235.1正常工作條件儀器應在一定的環(huán)境溫度和相對濕度下正常工作，通常環(huán)境溫度要求為15℃～30℃，相對濕度不大于80%。供電電源應符合儀器額定電源電壓，且電源電壓波動不應超出標稱電壓的±10%。5要求儀器應遠離機械振動和沖擊，以及強電磁場干擾，以確保穩(wěn)定的工作環(huán)境。5要求5要求5.2儀器外觀儀器的外觀應光潔，無明顯的剝落、擦傷、污垢等瑕疵。銘牌及標志應耐久清晰，內(nèi)容需符合相關法規(guī)和標準要求。儀器的固件不得松動，調(diào)節(jié)件應靈活且功能正常。零件表面不得有銹蝕現(xiàn)象。5要求5.3安全性要求5要求5.4環(huán)境適應性要求若為醫(yī)療儀器，則應滿足YY0648-2008醫(yī)療器械安全標準。分析儀器應滿足GB4793.6-2008,GB4793.9-2013和GB/T34065-2017等電氣安全標準。0102035要求分析儀器應滿足GB/T11606-2007環(huán)境條件分組要求。01醫(yī)療儀器則應符合GB/T14710-2009的環(huán)境條件分組要求。025.5電磁兼容性要求035要求分析儀器應滿足GB/T18268.1的電磁兼容性標準。醫(yī)療儀器則需滿足GB/T18268.26的相應要求，以確保儀器在電磁環(huán)境中的穩(wěn)定運行。溫度控制包括升溫速率和降溫速率，平均速率均不應小于1.5℃/s，以確保快速的熱循環(huán)。同時，溫度波動度應不大于0.2℃，以維持穩(wěn)定的反應環(huán)境。熒光檢測性能標準中詳細規(guī)定了熒光檢測的靈敏度、線性范圍、分辨率等關鍵指標，以確保儀器能夠準確捕捉和量化熒光信號。整機性能除了上述具體的性能指標外，標準還要求對儀器的整體性能進行評估，包括儀器的穩(wěn)定性、可靠性、易用性等方面。這些要求共同確保了實時熒光定量PCR儀能夠在各種實驗條件下提供準確、可重復的結(jié)果。5要求065.1工作條件適宜的環(huán)境溫度范圍通常實時熒光定量PCR儀應在15°C至30°C的環(huán)境溫度下運行，以確保儀器內(nèi)部組件的穩(wěn)定性和性能。濕度控制環(huán)境濕度應保持在30%至70%之間，以避免儀器內(nèi)部電路受潮或過于干燥而影響其正常工作。環(huán)境溫度與濕度電源要求儀器應接入穩(wěn)定、可靠的電源，電壓波動范圍應在儀器規(guī)定的允許范圍內(nèi)，以保證儀器正常運行及延長使用壽命。接地保護為確保操作安全，儀器應具備良好的接地保護，以防止靜電干擾或電氣故障對儀器和操作人員造成損害。電源與接地電磁干擾防護儀器應具備一定的電磁屏蔽能力，以減少外部電磁場對儀器內(nèi)部電路和熒光檢測系統(tǒng)的干擾。光照控制避免外部干擾為避免外部光線對熒光檢測的影響，儀器在工作時應處于避光狀態(tài)，或使用遮光罩等設備進行保護。0102VS實時熒光定量PCR儀應放置在平穩(wěn)、無振動的臺面上，以保證儀器在運行過程中不會因振動而影響其性能和穩(wěn)定性。清潔維護定期對儀器進行清潔和維護，以去除灰塵、污垢等雜質(zhì)，確保儀器始終處于良好的工作狀態(tài)。清潔時應使用無絨布或?qū)Ｓ们鍧崉苊鈱x器表面造成劃傷或腐蝕。放置要求儀器放置與清潔075.2外觀儀器表面應平整、光滑，無明顯的劃痕、凹陷、變形等缺陷。儀器的接縫處應均勻、緊密，無明顯的縫隙和錯位現(xiàn)象。儀器應具備清晰的標識和銘牌，標明儀器名稱、型號、制造商等信息。5.2.1儀器整體外觀010203控制面板應布局合理，按鍵、旋鈕等操作部件應標識清晰，易于辨識和操作。控制面板上的顯示屏應清晰、無閃爍，顯示內(nèi)容應準確、完整。控制面板的材質(zhì)應具有一定的耐磨性和抗腐蝕性，確保長期使用的穩(wěn)定性和可靠性。5.2.2控制面板外觀儀器的內(nèi)部結(jié)構應整齊、有序，各部件之間的連接應牢固、可靠。5.2.3內(nèi)部結(jié)構外觀內(nèi)部結(jié)構應便于清潔和維護，無明顯的積塵和污垢。儀器內(nèi)部的線路和管路應布局合理，避免交叉和干擾，確保儀器運行的穩(wěn)定性和安全性。5.2.4安全防護裝置儀器應具備必要的安全防護裝置，如防護罩、防護門等，確保操作人員的安全。01安全防護裝置應設計合理，便于操作和使用，不影響儀器的正常運行和維修。02安全防護裝置應具備一定的強度和穩(wěn)定性，能夠承受意外情況下的沖擊和碰撞。03085.3安全性電氣安全實時熒光定量PCR儀必須符合相關的電氣安全標準，包括防電擊保護、接地保護等，以確保操作人員在使用過程中的人身安全。5.3安全性機械安全儀器的設計應考慮到機械部件的安全性，如防止夾傷、劃傷等。同時，應確保移動部件的穩(wěn)定性和可靠性，以防止意外發(fā)生。輻射安全由于PCR儀在工作過程中可能會產(chǎn)生一定的電磁輻射，因此必須確保其輻射水平在安全范圍內(nèi)，不會對操作人員造成健康危害。5.3安全性化學安全：考慮到PCR實驗可能涉及有毒或有害的化學物質(zhì)，儀器應設計有適當?shù)姆雷o措施，如防泄漏、防污染等，以保護操作人員和環(huán)境的安全。軟件安全：實時熒光定量PCR儀的軟件系統(tǒng)應具備高度的穩(wěn)定性和安全性，防止數(shù)據(jù)丟失、被篡改或非法訪問。同時，應具備用戶權限管理功能，以確保不同用戶只能訪問其被授權的數(shù)據(jù)和功能。總的來說，安全性是實時熒光定量PCR儀設計和使用過程中必須高度重視的方面。通過嚴格遵守相關安全標準和規(guī)范，可以確保儀器的安全可靠運行，從而保障實驗操作人員的健康和實驗數(shù)據(jù)的準確性。請注意，以上內(nèi)容是基于對《實時熒光定量PCR儀性能評價通則GB/T42753-2023》的理解以及一般實驗室設備安全性的常識進行的解讀。具體的安全要求可能因儀器型號、生產(chǎn)廠家和實驗環(huán)境的不同而有所差異。因此，在實際使用過程中，應參考儀器的具體使用說明和安全手冊進行操作。095.4環(huán)境適應性5.4環(huán)境適應性實時熒光定量PCR儀需要在不同的環(huán)境溫度下保持穩(wěn)定的性能。通則中規(guī)定了儀器在不同溫度條件下的工作范圍和性能要求，確保儀器在各種實驗環(huán)境下均能準確、可靠地運行。01040302溫度適應性濕度對儀器的性能和穩(wěn)定性也有重要影響。通則中考慮了不同濕度條件下儀器的表現(xiàn)，確保在相對潮濕或干燥的環(huán)境中，儀器仍能維持其精度和可靠性。濕度適應性通則還規(guī)定了儀器在不同電源電壓和頻率下的工作性能，以保證在電力供應不穩(wěn)定或電源質(zhì)量不佳的情況下，儀器仍能正常工作，減少因電源問題導致的實驗誤差或設備損壞。電源適應性考慮到實驗室環(huán)境中可能存在的各種電磁干擾，通則對儀器的抗干擾能力提出了明確要求。這有助于確保儀器在復雜電磁環(huán)境下仍能準確讀取數(shù)據(jù)，提高實驗的可靠性和重復性。抗干擾能力105.5電磁兼容性電磁兼容性要求發(fā)射限制儀器在正常工作時產(chǎn)生的電磁發(fā)射應符合相關標準，以避免對其他設備造成干擾。抗擾度實時熒光定量PCR儀應具有一定的抗電磁干擾能力，以確保在復雜電磁環(huán)境中能夠正常工作，且性能不受明顯影響。電磁兼容性測試應在符合標準的電磁屏蔽室或開闊場地進行，以確保測試結(jié)果的準確性和可靠性。測試環(huán)境測試應包括靜電放電、射頻電磁場輻射、電快速瞬變脈沖群、浪涌（沖擊）抗擾度等項目，以全面評估儀器的電磁兼容性性能。測試項目電磁兼容性測試優(yōu)化電路設計，采用濾波、屏蔽、接地等技術手段，提高儀器的抗電磁干擾能力。電路設計選用具有優(yōu)良電磁屏蔽性能的材料，以減少電磁輻射和泄漏。材料選擇通過軟件算法優(yōu)化，提高儀器在復雜電磁環(huán)境中的穩(wěn)定性和可靠性。軟件優(yōu)化電磁兼容性改進措施010203115.6性能要求升溫速率同樣地，儀器的平均降溫速率也應不小于1.5℃/s。快速的降溫速率有助于縮短實驗周期，并減少非特異性擴增的可能性。降溫速率溫度波動度在PCR反應過程中，溫度的穩(wěn)定性至關重要。因此，該通則規(guī)定溫度的波動應不大于0.2℃，以確保反應的準確性和可重復性。實時熒光定量PCR儀的平均升溫速率應不小于1.5℃/s。這一指標確保了儀器能夠快速達到所需的反應溫度，從而提高實驗效率。5.6.1溫度控制性能5.6.2熒光檢測性能熒光信號分辨率為了區(qū)分不同濃度的DNA標準物質(zhì)，儀器應具有高分辨率的熒光信號檢測能力。這有助于在定量分析時獲得更精確的結(jié)果。熒光信號穩(wěn)定性熒光信號的穩(wěn)定性對于長時間運行的實驗尤為重要。通則要求儀器在連續(xù)工作過程中，熒光信號的漂移和噪聲應控制在一定范圍內(nèi)，以確保實驗結(jié)果的可靠性。熒光信號采集儀器應能夠?qū)崟r采集并處理循環(huán)過程中的熒光信號。這要求儀器具備高靈敏度的熒光檢測系統(tǒng)，以確保低濃度樣本的準確檢測。0302015.6.3整機性能正常工作條件通則規(guī)定了儀器在正常工作條件下應滿足的要求，包括環(huán)境溫度、相對濕度、供電電源等。這些條件確保了儀器在常規(guī)實驗室環(huán)境中的穩(wěn)定運行。儀器外觀與安全性儀器的外觀應光潔、無損傷，并符合相關法規(guī)和標準的要求。此外，儀器還應滿足一定的安全性要求，如電氣安全、機械安全等，以保障操作人員的安全。環(huán)境適應性與電磁兼容性儀器應具有良好的環(huán)境適應性和電磁兼容性，以應對不同實驗室環(huán)境和電磁干擾的影響。這有助于確保儀器在各種條件下的穩(wěn)定性能和準確結(jié)果。126評價方法在《實時熒光定量PCR儀性能評價通則》中，評價方法部分詳細闡述了如何對實時熒光定量PCR儀的性能進行全面、客觀的評價。以下是對評價方法的詳細解讀6評價方法“通過記錄儀器從低溫到高溫以及從高溫到低溫的所需時間，計算其平均升溫速率和降溫速率，以驗證是否達到標準要求的≥1.5℃/s。升溫速率和降溫速率測試在設定的溫度點上，記錄儀器在穩(wěn)定狀態(tài)下的溫度波動范圍，以確認其是否滿足≤±0.2℃的要求。溫度波動性測試6評價方法通過比較儀器顯示的溫度與實際測量的溫度之間的差異，來評估溫度示值的準確性，誤差應≤±0.5℃。溫度示值誤差測試6評價方法在儀器工作區(qū)域內(nèi)選取多個測試點，測量各點的溫度值，以計算溫度均勻度，確保其≤1℃。溫度均勻度測試驗證儀器在設定溫度下保持時間的準確性，誤差應控制在≤±5℃范圍內(nèi)。溫度持續(xù)時間誤差測試熒光強度重復性測試通過多次測量同一樣品的熒光強度，計算其相對標準偏差（RSD），以評估熒光強度的穩(wěn)定性，RSD應≤2%。016評價方法熒光強度均勻性測試在儀器檢測區(qū)域內(nèi)選取多個測試點，測量各點的熒光強度值，計算其RSD以評估均勻性，RSD應≤5%。026評價方法熒光強度線性測試通過制備不同濃度的標準樣品，測量其熒光強度并繪制標準曲線，計算線性相關系數(shù)（r），以驗證熒光強度與樣品濃度之間的線性關系，r應≥0.990。6評價方法01整機性能評價需要綜合考慮儀器的溫度控制性能和熒光檢測性能。此外，還需對儀器的外觀、安全性、環(huán)境適應性以及電磁兼容性等方面進行評估。評價方法中還規(guī)定了進行整機性能評價時需要具備的條件和使用的試劑與材料，如DNA標準物質(zhì)和熒光定量PCR檢測試劑等。0203通過這些評價方法，可以對實時熒光定量PCR儀的性能進行全面、客觀的評價，為儀器的研發(fā)、生產(chǎn)和檢驗提供技術依據(jù)，從而推動國產(chǎn)實時熒光定量PCR儀生產(chǎn)技術的發(fā)展和質(zhì)量提升。6.3整機性能評價136.1外觀檢查外殼涂層應均勻，無脫落、起泡等現(xiàn)象。儀器上的標識、標簽應清晰可辨，無模糊、脫落情況。儀器應外觀整潔，無明顯的劃痕、變形或損壞。設備整體外觀控制面板及顯示屏控制面板應布局合理，按鍵靈活可靠，無卡阻現(xiàn)象。01顯示屏應清晰明亮，無壞點、亮點等顯示缺陷。02顯示內(nèi)容應準確無誤，無亂碼、閃爍等問題。03010203儀器各連接部件應緊固可靠，無松動、脫落現(xiàn)象。接口應標準、規(guī)范，方便用戶進行連接操作。接口處應有明確的標識，便于用戶識別。連接部件及接口146.2安全性試驗1.電氣安全實時熒光定量PCR儀必須符合相關的電氣安全標準。這包括儀器的接地、絕緣、耐壓等電氣性能，以確保操作人員在使用過程中不會因電氣問題而受到傷害。2.機械安全儀器的機械結(jié)構必須穩(wěn)固且安全，防止在操作過程中發(fā)生意外移動或損壞。同時，應確保儀器的運動部件在正常運行時不會對人員造成傷害。6.2安全性試驗6.2安全性試驗01由于實時熒光定量PCR儀在工作過程中會產(chǎn)生熱量，因此必須確保儀器的散熱系統(tǒng)有效，并設置過熱保護裝置，以防止因過熱而引發(fā)的安全事故。考慮到實時熒光定量PCR儀在使用過程中可能會接觸到化學試劑，因此儀器應具備一定的化學防護能力，如防腐蝕、防泄漏等，以確保操作人員的化學安全。對于可能產(chǎn)生的電磁輻射或其他類型的輻射，實時熒光定量PCR儀應采取必要的防護措施，以降低輻射對操作人員的影響。02033.熱安全4.化學安全5.輻射安全通過以上幾個方面的安全性試驗，可以全面評估實時熒光定量PCR儀在使用過程中的安全性，從而確保操作人員的生命安全和身體健康。這些安全性要求也是該通則對儀器生產(chǎn)廠家提出的重要標準，有助于推動國產(chǎn)實時熒光定量PCR儀生產(chǎn)技術的發(fā)展和質(zhì)量提升。需要注意的是，雖然該通則為儀器的性能評價提供了全面的指導，但在實際操作過程中，仍需根據(jù)具體情況制定相應的安全操作規(guī)程，并定期對儀器進行安全檢查和維護，以確保其長期安全、穩(wěn)定地運行。6.2安全性試驗156.3環(huán)境適應性試驗01試驗目的環(huán)境適應性試驗是為了驗證實時熒光定量PCR儀在不同環(huán)境條件下的工作穩(wěn)定性和可靠性，以確保儀器在各種實際使用環(huán)境中能夠正常運行，并提供準確的檢測結(jié)果。試驗內(nèi)容環(huán)境適應性試驗通常包括高溫試驗、低溫試驗、濕熱試驗、振動試驗等多個方面。這些試驗旨在模擬儀器可能遇到的各種極端環(huán)境條件，以檢驗其性能和穩(wěn)定性。高溫試驗通過模擬高溫環(huán)境，檢驗儀器在高溫條件下的工作狀況。這包括檢查儀器的散熱性能、電子元件的耐高溫能力以及整體運行的穩(wěn)定性。6.3環(huán)境適應性試驗0203濕熱試驗通過模擬高濕度和溫度變化的環(huán)境，檢驗儀器在潮濕條件下的防潮、防霉變能力以及電氣性能的穩(wěn)定性。低溫試驗在低溫環(huán)境下進行測試，以驗證儀器在寒冷條件下的啟動、運行和性能表現(xiàn)。這有助于確保儀器在寒冷地區(qū)或冬季能夠正常工作。振動試驗模擬運輸或使用過程中可能出現(xiàn)的振動情況，以測試儀器在振動環(huán)境下的結(jié)構強度和性能穩(wěn)定性。這有助于確保儀器在運輸或使用過程中不會因振動而損壞或性能下降。6.3環(huán)境適應性試驗166.4電磁兼容性試驗6.4電磁兼容性試驗電磁兼容性試驗是確保實時熒光定量PCR儀在復雜電磁環(huán)境中能正常工作的重要環(huán)節(jié)。以下是對該部分內(nèi)容的詳細解讀試驗目的：電磁兼容性試驗旨在驗證PCR儀在規(guī)定的電磁環(huán)境下，不會因外界電磁干擾而影響其性能，同時也不會產(chǎn)生過量的電磁干擾影響其他設備。1.抗擾度測試通過模擬各種電磁干擾信號，如靜電放電、射頻電磁場輻射、電快速瞬變脈沖群等，來檢驗PCR儀的抗干擾能力。2.發(fā)射測試測量PCR儀在正常工作時產(chǎn)生的電磁輻射，以確保其符合相關電磁輻射標準，避免對其他電子設備造成干擾。6.4電磁兼容性試驗6.4電磁兼容性試驗試驗結(jié)果評估根據(jù)試驗結(jié)果，評估PCR儀的電磁兼容性性能。如果設備在試驗中表現(xiàn)出良好的抗干擾能力和低電磁輻射水平，則認為其通過了電磁兼容性試驗。試驗環(huán)境與設備試驗應在符合標準的電磁屏蔽室內(nèi)進行，以避免外界電磁干擾對測試結(jié)果的影響。同時，應使用專業(yè)的電磁兼容測試設備，如靜電放電發(fā)生器、射頻信號發(fā)生器等。試驗標準電磁兼容性試驗應遵循國家及國際標準，如GB/T17626系列標準（電磁兼容試驗和測量技術）等，以確保試驗的準確性和有效性。176.5性能試驗1.溫度控制性能測試實時熒光定量PCR儀需要具備精確的溫度控制能力，以確保PCR反應過程中的溫度循環(huán)準確性。性能試驗將評估儀器在不同溫度設定下的穩(wěn)定性、均勻性和升溫降溫速率等。2.熒光檢測性能測試熒光信號的準確檢測是實時熒光定量PCR技術的核心。性能試驗將檢查儀器的熒光檢測系統(tǒng)，包括熒光激發(fā)和發(fā)射光譜的匹配性、熒光信號的靈敏度和線性范圍等。6.5性能試驗6.5性能試驗3.整機性能測試除了針對特定功能的測試外，整機性能測試還將評估儀器在連續(xù)工作、多任務處理以及抗干擾能力等方面的表現(xiàn)。這些測試有助于確保儀器在實際使用中的穩(wěn)定性和耐用性。4.生物檢測功能驗證通過使用標準樣品或已知濃度的靶標核酸進行PCR擴增，驗證儀器的生物檢測功能。這包括評估儀器的特異性、靈敏度和定量準確性等關鍵指標。5.安全性和可靠性測試性能試驗還包括對儀器的安全性和可靠性進行評估，如電氣安全、機械安全以及儀器的使用壽命等。這些測試旨在確保儀器在操作過程中不會對操作人員造成危害，并能長時間穩(wěn)定運行。187評價報告儀器基本信息包括儀器名稱、型號、生產(chǎn)廠家、出廠編號等。報告內(nèi)容要求01評價環(huán)境描述詳細描述評價時的環(huán)境溫度、濕度、電源等條件。02評價方法與過程詳細闡述所采用的評價方法、步驟及操作過程。03評價結(jié)果與分析根據(jù)實驗數(shù)據(jù)，對儀器的各項性能指標進行客觀分析和評價。04報告應使用規(guī)范的語言和術語，確保表述清晰、準確。報告撰寫規(guī)范01報告中的數(shù)據(jù)應真實、可靠，且需經(jīng)過嚴格的統(tǒng)計和分析。02報告中應包含必要的圖表和曲線，以便于更直觀地展示評價結(jié)果。03報告格式應符合相關標準和規(guī)范，排版整潔、美觀。04報告完成后，應經(jīng)過相關負責人或?qū)＜医M的審核，確保報告的質(zhì)量和準確性。審核通過后，報告可由相關機構或部門正式發(fā)布，以供公眾查閱和參考。如有需要，報告還可以提交給相關監(jiān)管部門或行業(yè)協(xié)會，作為儀器質(zhì)量評價和監(jiān)管的依據(jù)。報告審核與發(fā)布01020319附錄A(資料性)儀器升降溫循環(huán)程序和樣本測試孔位排布《實時熒光定量PCR儀性能評價通則GB/T42753-2023》是中國于2023年12月1日開始實施的一項國家標準。該標準規(guī)范了實時熒光定量PCR儀的評價體系與方法，為這類儀器的性能評價提供了統(tǒng)一的準則。以下是對該標準的詳細解讀附錄A(資料性)儀器升降溫循環(huán)程序和樣本測試孔位排布一、標準制定的背景和目的附錄A(資料性)儀器升降溫循環(huán)程序和樣本測試孔位排布實時熒光定量PCR儀在生物分析領域具有廣泛應用，尤其在新冠疫情期間，其重要性更加凸顯。然而，長期以來，該市場主要由國外品牌占據(jù)，國內(nèi)產(chǎn)品的發(fā)展受到一定制約。隨著國內(nèi)科研儀器制造水平的提升，國產(chǎn)化實時熒光定量PCR儀已逐步占領國內(nèi)外市場。此標準的制定旨在規(guī)范儀器的性能評價指標，推動國產(chǎn)實時熒光定量PCR儀生產(chǎn)技術的發(fā)展和質(zhì)量提升。1.術語和定義明確了實時熒光定量PCR儀的相關術語和定義，為后續(xù)的評價工作提供了基礎。2.要求對實時熒光定量PCR儀的性能提出了具體要求，包括溫控性能、熒光檢測性能和整體性能等。附錄A(資料性)儀器升降溫循環(huán)程序和樣本測試孔位排布提供了詳細的評價方法，包括溫度控制性能測試、熒光檢測性能測試和整機性能測試等。這些方法確保了評價的準確性和可重復性。3.評價方法規(guī)定了評價報告的內(nèi)容和格式，便于用戶和相關機構了解儀器的性能情況。4.評價報告附錄A(資料性)儀器升降溫循環(huán)程序和樣本測試孔位排布VS包括升溫速率、降溫速率、溫度波動性、溫度示值誤差、溫度均勻度和溫度持續(xù)時間誤差等關鍵參數(shù)。這些參數(shù)對于確保PCR反應的準確性和可重復性至關重要。2.熒光檢測性能涉及熒光強度重復性、熒光強度均勻性和熒光強度線性等要求。這些要求有助于確保儀器在熒光檢測方面的準確性和穩(wěn)定性。1.溫控性能附錄A(資料性)儀器升降溫循環(huán)程序和樣本測試孔位排布四、評價方法的要點在評價方法中，對整機性能進行評價時需要具備DNA標準物質(zhì)和熒光定量PCR檢測試劑。其中，DNA標準物質(zhì)是國家有證標準物質(zhì)，包括線性標物和樣本標物，且線性標物應為10倍濃度梯度的DNA標準物質(zhì)系列溶液。這些標準物質(zhì)和試劑的選擇確保了評價的可靠性和有效性。附錄A(資料性)儀器升降溫循環(huán)程序和樣本測試孔位排布五、結(jié)論《實時熒光定量PCR儀性能評價通則GB/T42753-2023》的制定和實施對于規(guī)范實時熒光定量PCR儀的性能評價指標具有重要意義。它不僅為生產(chǎn)企業(yè)提供了研發(fā)方向和技術依據(jù)，還為行業(yè)主管部門提供了檢驗標準。這將有助于推動國產(chǎn)實時熒光定量PCR儀生產(chǎn)技術的發(fā)展和質(zhì)量提升，進一步提高我國生物分析行業(yè)的整體水平和核心競爭力。附錄A(資料性)儀器升降溫循環(huán)程序和樣本測試孔位排布20A.1升降溫循環(huán)程序?qū)崟r熒光定量PCR儀的升溫速率應達到或超過1.5℃/s，以確保快速且有效地達到所需的反應溫度。升溫速率同樣地，降溫速率也應達到或超過1.5℃/s，以便在必要時能夠迅速降低溫度，例如在進行某些特定的PCR程序時。降溫速率升溫速率和降溫速率溫度波動性為了保證PCR反應的穩(wěn)定性和一致性，實時熒光定量PCR儀的溫度波動性應控制在±0.2℃以內(nèi)。溫度示值誤差溫度示值誤差是指儀器顯示溫度與實際溫度之間的差異，該誤差應不超過±0.5℃，以確保實驗結(jié)果的準確性。溫度波動性和溫度示值誤差溫度均勻度溫度均勻度是指在儀器工作區(qū)域內(nèi)各點溫度之間的差異，對于實時熒光定量PCR儀來說，溫度均勻度應控制在1℃以內(nèi)，以保證整個反應區(qū)域內(nèi)的溫度一致性。溫度持續(xù)時間誤差溫度均勻度和溫度持續(xù)時間誤差溫度持續(xù)時間誤差是指儀器在設定溫度下保持的時間與實際所需時間之間的差異，該誤差應不超過±5℃，以避免因時間控制不準確而影響實驗結(jié)果。010221A.2溫度控制性能試驗的孔位排布1.試驗孔位選擇為了確保評價的全面性和準確性，通則要求在選擇試驗孔位時應考慮儀器的不同區(qū)域，包括中心區(qū)域和邊緣區(qū)域。這樣可以更全面地反映儀器在整個加熱塊上的溫度均勻性和控制精度。2.孔位排布原則孔位的排布應遵循一定的原則，以確保試驗的有效性和可重復性。通常，孔位會按照特定的圖案或網(wǎng)格進行排列，以便在試驗中能夠均勻地覆蓋整個加熱區(qū)域。A.溫度控制性能試驗的孔位排布A.溫度控制性能試驗的孔位排布3.溫度監(jiān)測點設置在每個選定的孔位中，需要設置溫度監(jiān)測點來實時記錄溫度變化。這些監(jiān)測點通常位于孔位的中心或特定位置，以便準確反映該孔位的實際溫度情況。4.試驗條件與步驟在進行溫度控制性能試驗時，需要遵循一定的試驗條件和步驟。例如，設定特定的溫度程序，包括升溫、降溫和恒溫階段，并記錄每個孔位的溫度變化數(shù)據(jù)。5.數(shù)據(jù)分析與評價標準試驗完成后，需要對收集到的溫度數(shù)據(jù)進行詳細的分析。通過比較不同孔位之間的溫度差異、升溫降溫速率以及溫度波動性等指標，來評價PCR儀的溫度控制性能是否滿足通則的要求。22A.3熒光檢測性能試驗的孔位排布A.3熒光檢測性能試驗的孔位排布排布方式對結(jié)果的影響不同的孔位排布方式可能會對熒光信號的采集和檢測結(jié)果產(chǎn)生影響。例如，如果孔位過于密集，可能會導致熒光信號的相互干擾；而如果孔位過于分散，則可能會降低檢測效率。因此，選擇合適的孔位排布方式對于保證檢測結(jié)果的準確性和可靠性至關重要。標準中的孔位排布要求根據(jù)GB/T42753-2023標準，熒光檢測性能試驗的孔位排布應遵循一定的規(guī)則和原則，以確保試驗的有效性和可比性。具體要求可能包括孔間的距離、孔的布局方式等。孔位排布的重要性熒光檢測性能試驗中，孔位排布是影響檢測結(jié)果準確性和可靠性的關鍵因素之一。合理的孔位排布能夠確保每個樣本都得到均勻且準確的熒光信號檢測。實際操作中的注意事項：在進行熒光檢測性能試驗時，操作人員需要嚴格按照標準中的孔位排布要求進行布局，避免隨意更改孔位排布方式。同時，還需要注意保持試驗環(huán)境的清潔和穩(wěn)定，以減少外界因素對檢測結(jié)果的影響。需要注意的是，以上內(nèi)容僅是對GB/T42753-2023標準中熒光檢測性能試驗孔位排布方面的簡要解讀，具體要求和操作方法還需參考標準中的詳細規(guī)定。此外，對于不同型號和規(guī)格的實時熒光定量PCR儀，其孔位排布方式也可能會有所不同，因此在實際操作中需要結(jié)合具體情況進行靈活調(diào)整。A.3熒光檢測性能試驗的孔位排布23A.4整機性能試驗的孔位排布試驗孔位選擇均勻分布原則孔位的選擇應遵循均勻分布的原則，覆蓋儀器的不同區(qū)域，從而反映儀器整體性能。代表性孔位在整機性能試驗中，應選擇具有代表性的孔位進行測試，以確保評價結(jié)果的全面性和準確性。根據(jù)儀器型號和規(guī)格，確定合理的孔位數(shù)量和分布方式，確保每個孔位都能得到有效測試。數(shù)量與分布對每個選定的孔位進行明確標識和記錄，便于試驗過程中的數(shù)據(jù)追蹤和分析。標識與記錄孔位排布要求在試驗開始前，應對選定孔位進行一致性檢查，確保各孔位之間的初始狀態(tài)相同或相近。一致性檢查在試驗過程中，詳細記錄每個孔位的數(shù)據(jù)，并進行統(tǒng)計分析，以評估整機性能的均勻性和穩(wěn)定性。數(shù)據(jù)記錄與分析試驗過程中的注意事項24附錄B(資料性)熒光參比溶液的制備方法熒光參比溶液在實時熒光定量PCR儀的性能評價中起著關鍵作用。它提供了一個已知的熒光信號標準，用于校準和驗證儀器的熒光檢測系統(tǒng)。通過對比熒光參比溶液的信號輸出，可以確保儀器在不同實驗條件下的一致性和準確性。熒光參比溶液的作用制備熒光參比溶液應遵循精確、可重復和穩(wěn)定的原則。這意味著所使用的熒光物質(zhì)應具有明確的熒光特性，且在溶液中的濃度應精確控制。此外，溶液的保存條件也應經(jīng)過優(yōu)化，以確保其熒光信號的長期穩(wěn)定性。制備方法的原則附錄B(資料性)熒光參比溶液的制備方法注意事項：在制備熒光參比溶液時，需要注意避免污染和熒光猝滅等問題。污染可能會影響溶液的熒光特性，而熒光猝滅則可能導致信號強度的降低。因此，應在潔凈的環(huán)境中進行操作，并使用高質(zhì)量的試劑和容器。同時，還應定期對熒光參比溶液進行更新和重新校準，以確保其持續(xù)的有效性。綜上所述，熒光參比溶液的制備是實時熒光定量PCR儀性能評價中的重要環(huán)節(jié)。通過遵循精確的制備原則和注意相關事項，可以確保所制備的熒光參比溶液具有高度的可靠性和穩(wěn)定性，從而為儀器的準確校準和驗證提供有力支持。附錄B(資料性)熒光參比溶液的制備方法25附錄C(資料性)兩組數(shù)據(jù)顯著差異的判斷方法在《實時熒光定量PCR儀性能評價通則GB/T42753-2023》中，附錄C提供了判斷兩組數(shù)據(jù)是否存在顯著差異的方法。這些方法對于評價PCR儀的性能至關重要，因為它們允許研究人員準確地確定不同條件下儀器性能的變異程度。以下是關于這些方法的詳細解讀附錄C(資料性)兩組數(shù)據(jù)顯著差異的判斷方法1.數(shù)據(jù)正態(tài)性檢驗在進行顯著差異判斷之前，首先需要對兩組數(shù)據(jù)進行正態(tài)性檢驗。這是為了確保數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布，從而可以采用相應的統(tǒng)計方法進行分析。附錄C(資料性)兩組數(shù)據(jù)顯著差異的判斷方法如果數(shù)據(jù)不符合正態(tài)分布，則可以考慮使用非參數(shù)統(tǒng)計方法，如Mann-WhitneyU檢驗（也稱為Wilcoxon秩和檢驗），來比較兩組數(shù)據(jù)的分布是否存在顯著差異。2.t檢驗或U檢驗如果數(shù)據(jù)符合正態(tài)分布，通常可以采用t檢驗來判斷兩組數(shù)據(jù)的均值是否存在顯著差異。附錄C(資料性)兩組數(shù)據(jù)顯著差異的判斷方法0102033.確定顯著性水平在進行差異顯著性檢驗時，需要設定一個顯著性水平（通常為0.05或0.01），用于判斷觀察到的差異是否可能由隨機誤差引起。附錄C(資料性)兩組數(shù)據(jù)顯著差異的判斷方法如果計算出的p值小于設定的顯著性水平，則可以拒絕原假設（即兩組數(shù)據(jù)無顯著差異），認為兩組數(shù)據(jù)存在顯著差異。附錄C(資料性)兩組數(shù)據(jù)顯著差異的判斷方法4.效應量計算除了統(tǒng)計顯著性外，還可以計算效應量來量化兩組數(shù)據(jù)之間的差異程度。例如，可以使用Cohen'sd或η2等指標來衡量差異的幅度。5.結(jié)果解釋與報告根據(jù)統(tǒng)計分析和效應量的結(jié)果，可以對兩組數(shù)據(jù)的差異進行解釋和報告。這有助于理解PCR儀在不同條件下的性能變化，并為儀器優(yōu)化或選擇提供依據(jù)。通過遵循這些步驟和方法，研究人員可以更加科學、準確地評價實時熒光定量PCR儀的性能，并推動相關技術的持續(xù)改進和發(fā)展。附錄C(資料性)兩組數(shù)據(jù)顯著差異的判斷方法26C.1兩組數(shù)據(jù)顯著差異的判斷方法保證樣本量為確保結(jié)果的可靠性，應保證足夠的樣本量，以減少抽樣誤差對結(jié)果的影響。遵循統(tǒng)計學原理顯著差異的判斷應基于統(tǒng)計學原理，通過合理的統(tǒng)計分析方法來確定兩組數(shù)據(jù)間是否存在顯著差異。明確檢驗目的在進行顯著差異判斷前，應明確檢驗的目的和假設，以便選擇合適的統(tǒng)計方法。判斷原則T檢驗適用于兩組數(shù)據(jù)均服從正態(tài)分布且方差相等的情況，通過計算T值來判斷兩組數(shù)據(jù)的均值是否存在顯著差異。01常用判斷方法非參數(shù)檢驗當數(shù)據(jù)不滿足正態(tài)分布或方差不等時，可采用非參數(shù)檢驗方法，如Mann-WhitneyU檢驗等，來判斷兩組數(shù)據(jù)的分布是否存在顯著差異。02方法選擇應根據(jù)數(shù)據(jù)的實際情況選擇合適的判斷方法，以確保結(jié)果的準確性和可靠性。結(jié)果解釋在得出顯著差異的結(jié)論后，應對結(jié)果進行合理解釋，并結(jié)合實際背景進行分析和討論。數(shù)據(jù)清洗在進行顯著差異判斷前，應對數(shù)據(jù)進行清洗和處理，以消除異常值、缺失值等對結(jié)果的影響。注意事項27C.2F分布分位數(shù)表010203F分布是兩個卡方分布變量的比率分布，常用于方差分析、回歸分析等統(tǒng)計推斷中。F分布具有非對稱性，其形狀取決于分子和分母的自由度。F分布的分位數(shù)表是統(tǒng)計推斷中重要的參考工具，可用于確定臨界值