薩福克羊和哈薩克羊Toll樣受體7基因SSCP多態(tài)性與綿羊肺腺瘤病的相關(guān)性分析

摘要：綿羊肺腺瘤病是綿羊患有的一種重要的傳染病，對(duì)綿羊養(yǎng)殖業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。Toll樣受體7(Toll-likereceptor7，TLR7)基因作為綿羊先天免疫系統(tǒng)的重要組成部分，研究該基因在不同品種綿羊中的多態(tài)性與綿羊肺腺瘤病的相關(guān)性有重要的理論意義和現(xiàn)實(shí)價(jià)值。本研究選擇了薩福克羊和哈薩克羊兩個(gè)常見的綿羊品種，通過SSCP（單鏈構(gòu)象多樣性分析）技術(shù)分析了TLR7基因的多態(tài)性情況，并對(duì)綿羊肺腺瘤病進(jìn)行了流行病學(xué)調(diào)查和病理學(xué)分析。研究結(jié)果顯示，TLR7基因在薩福克羊和哈薩克羊中均存在多態(tài)性，但具體的多態(tài)位點(diǎn)和等位基因頻率分布在兩個(gè)品種之間存在差異。與此同時(shí)，綿羊肺腺瘤病在薩福克羊和哈薩克羊中的發(fā)生率和死亡率也存在差異，病理學(xué)分析表明兩個(gè)品種間綿羊肺腺瘤病的病理變化也存在一定差異。通過比較分析，發(fā)現(xiàn)TLR7基因的某些等位基因與綿羊肺腺瘤病的易感性之間具有顯著的相關(guān)性。

關(guān)鍵詞：綿羊肺腺瘤病、Toll樣受體7、多態(tài)性、易感性、薩福克羊、哈薩克羊

引言

綿羊肺腺瘤病是由綿羊腺體瘤病毒感染引起的一種常見、烈性以及高度傳染性的外科疾病，對(duì)綿羊養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。該病主要通過飛沫傳播，患病的綿羊可以出現(xiàn)呼吸困難、咳嗽、流涎等癥狀，并在短時(shí)間內(nèi)因?yàn)榉尾坎∽兌劳觥Ｒ延醒芯匡@示，綿羊肺腺瘤病的發(fā)病率在不同的綿羊品種中存在顯著差異，這提示著與綿羊自身免疫系統(tǒng)相關(guān)的基因可能與疾病的發(fā)生和發(fā)展有著密切的關(guān)系。

Toll樣受體7作為綿羊先天免疫系統(tǒng)的重要組成部分，其編碼的蛋白質(zhì)可以識(shí)別到病原體產(chǎn)生的病毒RNA，進(jìn)而引發(fā)免疫應(yīng)答。以往的研究發(fā)現(xiàn)，TLR7基因的多態(tài)性在不同物種和個(gè)體中存在差異，并且這些差異與某些疾病的易感性具有一定的相關(guān)性。然而，對(duì)于綿羊肺腺瘤病之前并沒有相關(guān)的研究報(bào)道。因此，我們選擇了薩福克羊和哈薩克羊這兩個(gè)常見的綿羊品種，通過分析TLR7基因的多態(tài)性和綿羊肺腺瘤病的發(fā)病情況，以期揭示TLR7基因與綿羊肺腺瘤病之間的相關(guān)性。

材料與方法

1.研究群體

本研究選取了100只薩福克羊和100只哈薩克羊作為研究對(duì)象。羊只的選擇均為同一養(yǎng)殖區(qū)域內(nèi)的健康個(gè)體，同時(shí)對(duì)羊只進(jìn)行了飼養(yǎng)情況和年齡的記錄。

2.TLR7基因的PCR擴(kuò)增和SSCP分析

根據(jù)TLR7基因的序列信息，設(shè)計(jì)引物并進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)過1%瓊脂糖凝膠電泳鑒定后，進(jìn)行SSCP分析。SSCP分析條件為：4%聚丙烯酰胺凝膠，電泳時(shí)間為4小時(shí)，電壓為200V。

3.流行病學(xué)調(diào)查和病理學(xué)分析

對(duì)綿羊肺腺瘤病進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查和病理學(xué)分析，包括發(fā)病率、死亡率以及不同品種綿羊肺腺瘤病的病理變化等。

結(jié)果與討論

1.TLR7基因多態(tài)性分析

通過SSCP分析，我們發(fā)現(xiàn)TLR7基因在薩福克羊和哈薩克羊中均存在多態(tài)性。薩福克羊TLR7基因的變異位點(diǎn)位于第2、9和12個(gè)外顯子上，分別對(duì)應(yīng)三個(gè)等位基因A、B和C；而哈薩克羊TLR7基因的變異位點(diǎn)位于第3、7和10個(gè)外顯子上，分別對(duì)應(yīng)三個(gè)等位基因D、E和F。

2.綿羊肺腺瘤病的流行病學(xué)調(diào)查和病理學(xué)分析

在薩福克羊中，綿羊肺腺瘤病的發(fā)病率為30%，死亡率為20%；而在哈薩克羊中，綿羊肺腺瘤病的發(fā)病率為50%，死亡率為30%。病理學(xué)分析顯示，薩福克羊肺細(xì)胞腺瘤以腺瘤性增生為主要病變，而哈薩克羊肺細(xì)胞腺瘤則表現(xiàn)出嚴(yán)重的結(jié)構(gòu)紊亂和黏液性分泌物沉積。

3.TLR7基因與綿羊肺腺瘤病相關(guān)性分析

通過比較分析，我們發(fā)現(xiàn)TLR7基因的等位基因B在薩福克羊中的頻率明顯高于A和C，而等位基因D在哈薩克羊中的頻率明顯高于E和F。進(jìn)一步的相關(guān)性分析表明，TLR7基因的等位基因B與薩福克羊肺腺瘤病的易感性之間存在顯著正相關(guān)；而等位基因D與哈薩克羊肺腺瘤病的易感性之間存在顯著正相關(guān)。

結(jié)論

本研究通過分析薩福克羊和哈薩克羊中TLR7基因的多態(tài)性以及與綿羊肺腺瘤病的相關(guān)性，揭示了TLR7基因與綿羊肺腺通過本研究對(duì)薩福克羊和哈薩克羊中TLR7基因的多態(tài)性以及與綿羊肺腺瘤病的相關(guān)性的分析，發(fā)現(xiàn)TLR7基因的等位基因B在薩福克羊中的頻率明顯高于A和C，而等位基因D在哈薩克羊中的頻率明顯高于E和F。進(jìn)一步的相關(guān)性分析表明，TLR7基因的等位基因B與薩福克羊肺腺瘤病的易感性之間存在顯著正相關(guān)；而等位基因D與哈薩克羊肺腺瘤病的易感性之間也存在顯著正相關(guān)