活中性粒細(xì)胞形成中性粒細(xì)胞胞外陷阱(neutrophilextracellulartraps,NETs)。這種特異性中性粒細(xì)胞效應(yīng)器功能的特征是中性粒細(xì)胞將組蛋白和抗微生物蛋白修飾的染色質(zhì)纖維排出到細(xì)胞、血小板和血栓形成(也稱為免疫血栓形成)之間的中介。NETEQ\*jc3\*hps13\o\al(\s\up3(O1),nm)Ann-KatrinWienkamp',LuiseErpenbeck"andJanRossaint"1、背景：細(xì)胞(如單核細(xì)胞和中性粒細(xì)胞)形成聚集體。中性粒細(xì)胞是循環(huán)中最豐富的先天免疫細(xì)胞,也是第一個被募集到粒細(xì)胞彈性蛋白酶(NE)和組織蛋白酶G,具有高度殺菌作用，進(jìn)NETosis(中性粒細(xì)胞的炎性細(xì)胞死亡方式)形成。此外，NETs似乎位于免疫和血栓形成的界面，作為血小板聚集的橋梁并參與凝血級聯(lián)反應(yīng)。從生理學(xué)的角度來看，這是一種重要的機(jī)制，血小板和中性粒細(xì)胞結(jié)合在一起阻止病原體傳播，但在心血管疾病和自身免疫中，它也與長期炎癥和血栓性失調(diào)有關(guān)。在這篇綜述中，作者將深入研究血小板如何激活中性粒細(xì)胞以形成NET,NET如何觸發(fā)血小板激活以及凝血，以及這種密切的相互作用如何影響炎癥事件期間的病程。最后，作者將討論針對血小板-NET相互作用的可能治療方法，并指出該研究領(lǐng)域的未來前景。血小板與中性粒細(xì)胞之間的物理相互作用最重要的是由血小板P-選擇素和中性粒細(xì)胞P-選擇素糖蛋白配體1(PSGL-1)介導(dǎo)的，其誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞上細(xì)胞表面整合素的激活如LFA-1和Mac-1,提供了向兩個參與者之間更緊密的結(jié)合形成過渡的可能性。受體配體介導(dǎo)的血小板-中性粒細(xì)胞串?dāng)_和隨后的激活在以往文獻(xiàn)中已進(jìn)行了廣泛的綜述，因此不是本綜述的主要內(nèi)容。2.1血小板-中性粒細(xì)胞相互作用導(dǎo)致NET形成在過去的20年里，科學(xué)界已經(jīng)從根本上理解了血小板如何刺激中性粒細(xì)胞形成NETs。主要有兩種機(jī)制可導(dǎo)致血小板誘導(dǎo)的NETosis:第一，血小板和中性粒細(xì)胞之間的直接細(xì)胞-細(xì)胞接觸和受體-原體被發(fā)現(xiàn)直接作用于血小板,從而導(dǎo)致NETs的下游形成(圖2)。形成。Clark等人在2007年的第一份報告不僅表明活化的血小板小板活化，增強(qiáng)血小板與中性粒細(xì)胞的結(jié)合，中性粒細(xì)胞脫顆粒，毒癥血漿刺激的血小板共孵育后在流動條件下形成。此外，NET癥小鼠模型中,血小板-中性粒細(xì)胞的相互作用也導(dǎo)致NET的形成，顯著減少，這與腹膜感染后更高的細(xì)菌傳播一致。令人驚訝的是，肝竇中形成的血管內(nèi)NETs在捕獲細(xì)菌方面甚至比庫普弗細(xì)胞更重Mnitoghtesticetiur圖1.炎癥誘導(dǎo)的血小板介導(dǎo)的NET形成nnfw圖2.病原體誘導(dǎo)的血小板介導(dǎo)的NET形成。抗劑替羅非班顯著減少了NET的形成，并保護(hù)小鼠免受TRALI的1(PAR-1)激動劑、凝血酶受體激活肽(TRAPNET的形成，這表明NADPH氧化酶(NADPHox)依賴性血小板消融以及G蛋白偶聯(lián)受體(GPCR)信號傳導(dǎo)的抑制(通過百日咳毒素)阻止了NETs的形成，從而表明該步驟可能需要整合素和G成的背景下,血小板和中性粒細(xì)胞之間受體V)患者的血小板與通過膜分離的中性粒細(xì)胞孵育，血XA)受體有效地減輕了NETosis,說明血小板激活后血小板釋放黃色葡萄球菌期間,血小板釋放的hBD-1有效地抑制了細(xì)菌生長，2.3病毒感染中血小板介導(dǎo)的NET形成文獻(xiàn)中沒有支持這一假設(shè)的報道。登革熱病毒(DV)誘導(dǎo)的血小也激活了血小板上的CLEC2,這導(dǎo)致細(xì)胞外小泡(EV)的脫落，病毒被血小板吞噬然后導(dǎo)致顆粒補(bǔ)體蛋白C3的釋放，這刺激中性也發(fā)揮關(guān)鍵作用。特別是高遷移率族蛋白B1(HMGB1)蛋白和微以TLR-或RAGE(晚期糖基化終產(chǎn)物受體)依賴性方式引發(fā)炎癥。也可以從受刺激的血小板中主動釋放,并通過RAGE在中性粒細(xì)胞中誘導(dǎo)NETs。Hmgb1-1-血小板誘導(dǎo)NETosis的能力受到阻礙，中性粒細(xì)胞中的自噬被抑制時，HMGB1刺激后的NET形成過程也被消除。有多篇文獻(xiàn)報道了自噬信號通路和NETosis之間的聯(lián)系，據(jù)推測，自噬使中性粒細(xì)胞傾向于NET的形成。這似乎至少在一定程度上取決于哺乳動物雷帕霉素靶點(mTOR)/Akt途徑，已知該途徑可調(diào)節(jié)自噬。值得注意的是，兩種血小板衍生的外泌體微小RNA,miR-15b-5p和miR-378a-3p,顯示出抑制抗吞噬細(xì)血栓形成的生理學(xué)通常由Virchow三聯(lián)征來解釋，該三聯(lián)征包括三類：血流停滯、血管壁損傷和高凝狀態(tài)。通常，出現(xiàn)上述三個參數(shù)中的一個就可能導(dǎo)致血栓形成。令人驚訝的是，NETs可以作為血栓形成的支架，在炎癥和血栓形成之間提供實質(zhì)性的聯(lián)系。事實上，血小板粘附在NETs上從而被激活。這仍然留下了一個問題，NETs的哪一部分實際上觸發(fā)了這種血小板反應(yīng)。完整的NETs在體外通常不能誘導(dǎo)凝血或血小板活化。DNA組織成染色質(zhì)，中和負(fù)電荷，完全消除了DNA觸發(fā)凝血酶誘導(dǎo)的凝血的能力，這可能解釋了為什么同樣由染色質(zhì)纖維組成的完整NETs往往不能做到這一點。另一方面，完整的NETs(含組蛋白)被證明通過凝血因子后，這一點得到了增強(qiáng)，假定釋放了NET-結(jié)合的組蛋白和其他蛋的內(nèi)在途徑。有趣的是，在動脈ST段抬高型心肌梗死(STP)在小鼠腹部敗血癥中粘附于NETs,并促進(jìn)凝血酶NET形成途徑無關(guān)，因此必須獨立于NET的形成而發(fā)生，盡管可通過凝血的內(nèi)在途徑誘導(dǎo)凝血酶的產(chǎn)生，可能促進(jìn)(更局部的)血化和聚集(圖3)。組蛋白H3和H4因此可以通過TLR2和TLR4途徑發(fā)揮作用。此外，組蛋白(特別是H3和H4)觸發(fā)血小板中結(jié)節(jié)樣受體蛋白(NLRP)-3炎癥小體信號傳導(dǎo)和胱天蛋白酶-1應(yīng)蛋白解整合素金屬鈦酶13(ADAMTS13)通常將形成的VWF潛在地改變A2結(jié)構(gòu)域(ADAMTS13的切割位點)周圍的電荷，太大影響。肽基精氨酸脫氨酶4(PAD4)是一種參與組蛋白瓜氨3.2NETs誘導(dǎo)組織因子產(chǎn)生并裂解血栓反應(yīng)蛋白-1在大腸桿菌存在下,中性粒細(xì)胞與細(xì)胞因子混合物孵育后這一點大管功能障礙、自身免疫性疾病、癌癥和感染性疾病，最近在新冠肺炎中得到證實。在下一節(jié)中，作者將更詳細(xì)地闡述這種相互作用的4.1血小板-NET在靜脈和動脈血栓形成中的相互作用血小板和中性粒細(xì)胞作為炎癥細(xì)胞,在心血管疾病的發(fā)病機(jī)制中各自都有明確的貢獻(xiàn)。然而，它們在NET形成和血栓形成方面的協(xié)同作用具有特殊的科學(xué)意義，因為NET已被確定為靜脈和動脈血NET和DVT之間的緊密聯(lián)系已在瓦格納小組的工作中得到證明。靜脈狹窄模型中的小鼠深靜脈血栓在血栓富含紅細(xì)胞的部分含有中性粒細(xì)胞和NETs在血栓內(nèi)的分布表明，血小板介導(dǎo)的中性粒細(xì)在一起。事實證明,血小板對于白細(xì)胞的進(jìn)一步募集是必不可少的。此外,血栓結(jié)合的FXⅡ和血小板誘導(dǎo)/支持的NET形成中的中性粒血栓形成的最初觸發(fā)因素，但肯定會促進(jìn)血栓形成，血小板募集并激活中性粒細(xì)胞導(dǎo)致NETosis。一項對DVT和肺栓塞引起的人類靜脈血栓的研究表明，在血栓形成的組織階段，有大量的NETs,其特征是免疫細(xì)胞浸潤到形成的血栓中。NETs與VWF共定位，也位于血小板旁邊，表明NETs通過NET結(jié)合的VWF進(jìn)一步募集AD)和隨后發(fā)生腦缺血性卒中的顱內(nèi)動脈粥樣硬化疾病。中性粒DNA)抗體，這些抗體在疾病進(jìn)展過程中會引起炎癥、血管病或性aPL綜合癥期間(沒有同時診斷為SLE)也是如此。在原發(fā)性a2-GPI)在中性粒細(xì)胞中通過TLR4/MyD88/MAPK軸的血小板可誘導(dǎo)NETosis與中性粒細(xì)胞聚集。狼瘡患者的血清因子誘導(dǎo)中性粒細(xì)胞發(fā)育，DNA損傷反應(yīng)蛋白1(REDD1)誘導(dǎo)中ANCA相關(guān)血管炎(AAV)是一種系統(tǒng)性自身免疫性疾病，專門影O和/或蛋白酶3(PR3)的自身抗體是這種疾病的特征。小血管的血管炎和嗜酸性肉芽腫伴多血管炎(EGPA)。AAV患者的中性粒細(xì)胞不僅表現(xiàn)出更高的基線NET形成，而且AAV患者血小板通過T的形成可能通過觸發(fā)新的血管炎而導(dǎo)致血栓形成和一般疾病進(jìn)展，因為自身抗原可能在NET中大量存在。中性粒細(xì)胞浸潤、NET形成與1型糖尿病的發(fā)展之間的關(guān)聯(lián)已在非肥胖糖尿病(NOD)小鼠模型中得到證實。現(xiàn)在，已經(jīng)提出了血小板-中性粒細(xì)胞相互作用與1型糖尿病之間的聯(lián)系。循環(huán)中血小板-中性粒細(xì)胞聚集體的增加與NOD小鼠胰腺中的NET標(biāo)記物相關(guān)，這表明血小板可能激活中性粒細(xì)胞遷移到胰島，隨后發(fā)生NETosis和胰島破壞。盡管在小鼠NOD胰島中，NETs的形成不如激活的中性粒細(xì)胞(MPO+和H3cit+)的跡象那么容易被檢測到，但組織和NETs能夠在體外分別損傷小鼠和人的細(xì)胞以及胰腺。這表明了在活體內(nèi)觀察到的進(jìn)展中的胰島破壞和血小板活化的中性粒細(xì)胞之間的聯(lián)系，盡管在活體內(nèi)NET誘導(dǎo)的胰島損傷的相關(guān)性肯定需要進(jìn)一步的研究。長期以來，人們一直認(rèn)為癌癥的發(fā)展伴隨著血栓形成風(fēng)險的增加。在許多被診斷為癌癥的患者中觀察到高凝狀態(tài)。其原因尚不完全清楚，可分為患者相關(guān)、治療相關(guān)和癌癥相關(guān)。例如，腫瘤介導(dǎo)的促凝血因子的分泌,如TF被證明與癌癥誘導(dǎo)的血栓形成有關(guān)。然而，惡性腫瘤也可能通過激活血小板和/或中性粒細(xì)胞并伴隨NET形成來減少免疫血栓形成。4.3.1腫瘤細(xì)胞激活血小板已證明腫瘤細(xì)胞激活了血小板，不同類型的癌癥的潛在過程不同。許多腫瘤，例如胰腺癌，都能分泌凝血酶，這是一種有效的血小板激活劑。此外，COX-2在癌癥中的表達(dá)可能導(dǎo)致TXA2的下游合成，這不僅導(dǎo)致炎癥進(jìn)展，還導(dǎo)致血小板活化和聚集。卵巢癌細(xì)胞分泌ADP,ADP可以與血小板上的P2Y1和P2Y12結(jié)合，從而形成正反饋回路，血小板從致密粒釋放更多ADP。結(jié)直腸癌細(xì)胞分泌促凝血因子，并作為微粒體(MP)內(nèi)循環(huán)腫瘤細(xì)胞的一部分。TF通過作用于外源性凝血級聯(lián)反應(yīng)啟動血管內(nèi)凝血，特異性作用于腫瘤MP由于PtdSer在膜的外小葉上的存在而提供促凝表面。足蛋白表達(dá)的癌癥細(xì)胞可以與血小板CLEC-2相互作用，從而導(dǎo)致血小板活化。因此，血小板軸可能是促進(jìn)血栓形成的直接途徑，或者腫瘤可能直接通過血小板介導(dǎo)的NET形成。文獻(xiàn)中有證據(jù)表明，血小板和NET與癌癥的免疫血栓形成密切相關(guān)。例如，胰腺癌細(xì)胞可以誘導(dǎo)NETosis,并且在用胰腺癌細(xì)胞引發(fā)血小板后，這種情況進(jìn)一步增加，這表明活化的血小板在與腫瘤細(xì)胞接觸后，可能會傳播NET的形成。血小板介導(dǎo)的NET形成與高級別神經(jīng)膠質(zhì)瘤患者VTE的發(fā)展有關(guān)，并且這至少部分依賴于P-選擇素和PSGL-1的相互作用。NET介導(dǎo)的PtdSer在血小板和內(nèi)皮細(xì)胞上的表達(dá)，4.3.2腫瘤細(xì)胞誘導(dǎo)NETs形成明的。但是，癌癥究竟是如何誘發(fā)NETosis的呢?推測的答案主-CSF預(yù)刺激后，注射4T1乳腺癌細(xì)胞的雌性小鼠癌細(xì)胞源性外泌補(bǔ)體因子C3a激活中性粒細(xì)胞產(chǎn)生NETs的結(jié)果。根據(jù)動物模型，但是，腫瘤誘導(dǎo)的NET形成和假定的隨后血栓形成的(病理)生理后果是什么?通常，腫瘤本身似乎得益于激活血小板或中性粒細(xì)當(dāng)DNase或嗜中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶抑制劑抑制NET形成時,這相互作用直接影響腫瘤的發(fā)展，因為用低分子肝素(LMWH)阻4.4NETs和血小板在COVID-19患者免疫血栓形成中的假定作用嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒-2(SARS-CoV-2)是2019年冠狀病毒(新冠肺炎)大流行的病原體。該病毒通過氣溶膠傳播，并通蛋白與肺上皮細(xì)胞膜頂端表達(dá)的血管緊張素轉(zhuǎn)換酶2受體結(jié)合,從和多器官衰竭，迫切需要進(jìn)入重癥監(jiān)護(hù)室(ICU)并在ICU進(jìn)行治較高的中性粒細(xì)胞與淋巴細(xì)胞比值通常預(yù)示著患者在多種疾病背ARS-CoV-2,并且形成NETs的能力增加可能是嚴(yán)重急性呼吸系統(tǒng)冠狀病毒2通過尚未確定的機(jī)制感染中性粒細(xì)胞。或者，更可能的是，中性粒細(xì)胞作為吞噬細(xì)胞清除病毒和凋亡體，從而被動地吸收病毒顆粒。這究竟是如何導(dǎo)致中性粒細(xì)胞中NET的形成仍有待闡明。例如，對于其他病毒，已經(jīng)證明中性粒細(xì)胞模式識別受體是重要的不敏感病毒成分，同時可能是NETosis途徑的轉(zhuǎn)導(dǎo)者，這在嚴(yán)重急性呼吸系統(tǒng)綜合征冠狀病毒2型的情況下也可能成立。迄今為止，尚不清楚新冠肺炎的NET形成是否先于血小板活化，或者血小板是否導(dǎo)致免疫血栓形成和隨后的并發(fā)癥。可能是中性粒細(xì)胞首先通過形成NETs發(fā)揮作用，并引發(fā)隨后的級聯(lián)反應(yīng)。觀察到的中性粒細(xì)胞增多癥，以及NET標(biāo)記物與凝血病之間的相關(guān)性支持了這一框架。然而，血小板也可以被病毒和免疫系統(tǒng)的其他成分激活。最后，可以肯定的是，這兩個級聯(lián)至少可以相互支持，因為中性粒細(xì)胞和血小板都是肺組織中的敏感細(xì)胞,因此可能與病毒顆粒、危險相關(guān)分子模式(DAMP)和細(xì)胞因子風(fēng)暴接觸，根據(jù)Fajgenbaum等人提出的定義。在新冠肺炎患者中表現(xiàn)為循環(huán)細(xì)胞因子水平升高和急性全身炎癥癥狀，繼發(fā)性器官功能障礙是由炎癥引起的，超出了對病毒的異常反應(yīng)。鑒于NETs會對旁觀者組織和細(xì)胞造成重大損傷，包括血栓形成前的潛力，失調(diào)的NET形成很可能會增加ARDS、肺損傷和凝血障礙的發(fā)展。最后，究竟是什么首先導(dǎo)致了NET形成的增加，目前仍不清