順苯磺阿曲庫銨的測定

苯磺阿托唑胺是1996年首次在英國上市的非除異質結肌松弛劑。順式阿曲庫銨是阿曲庫銨(atracuriumbesylate)1R順式-1R’順式異構體,約占阿曲庫銨混合物總量的15%,相較于阿曲庫銨,不容易誘發組織胺釋放,對于健康成人或冠狀動脈疾病患者具有較佳的心血管安全性。本實驗通過對順苯磺阿曲庫銨有關物質及異構體檢查的方法學研究,旨在建立一種簡易準確的符合工業化生產需要的雜質檢測方法,并為原料藥的質量控制提供數據支持。1紫外質譜檢測島津LC-10Avp高效液相色譜儀系統,包括LC-10ATvp泵,SPD-10ATvp紫外檢測器,N2000色譜工作站;順苯磺阿曲庫銨(南京正大天晴制藥有限公司,批號081101,081102,081201);順-順阿曲庫銨對照品、反-反和順-反異構體由制備液相分離自制;乙腈、甲醇為色譜純,其余試劑為分析純。2測定條件及檢測限取樣品和對照品適量,精密稱定,分別用甲醇、水、0.1mol·L-1鹽酸溶液及0.1mol·L-1氫氧化鈉溶液溶解并稀釋制成每1mL中含50μg順苯磺阿曲庫銨的溶液,在200～400nm的波長范圍內掃描,結果在280nm波長處均有特征吸收。并參考相關文獻,確定檢測波長為280nm,見圖1。參考文獻中有關物質檢查方法,采用KrornasilC18(4.6mm×250mm,5μm)柱、280nm為檢測波長、柱溫30℃,0.075mol·L-1磷酸二氫鉀溶液(用磷酸調節至pH3.1)-甲醇-乙腈(75∶5∶20)為流動相A,0.075mol·L-1磷酸二氫鉀溶液(用磷酸調節至pH3.1)-甲醇-乙腈(50∶20∶30)為流動相B,流速為1.0mL·min-1,進行梯度洗脫。取苯磺阿曲庫銨消旋體適量,加流動相A溶解并稀釋制成每1mL中約含0.2mg的溶液,精密量取20μL注入液相色譜儀,調節檢測器靈敏度,使主成分峰的峰高為滿量程的20%～25%,記錄色譜圖。理論塔板數按順苯磺阿曲庫銨峰計約為18750。精密稱取反-反和順-反異構體適量,加流動相A溶解,精密量取20μL注入液相色譜儀,記錄色譜圖,見圖2。取有關物質檢查項下的供試品溶液,置(6±2)℃密閉放置,分別于放置后0,2,4,6,8h進樣,測定有關物質及順苯磺阿曲庫銨峰面積,結果以峰面積計RSD為0.33%,有關物質基本無變化。精密稱取樣品適量3份,置10mL量瓶中,分別加0.1mol·L-1鹽酸溶液、0.1mol·L-1氫氧化鈉溶液、10%過氧化氫溶液5mL,置室溫放置2h后,調pH至近中性;另取2份,加水5mL,置強光條件下(7000Lx)放置2h、100℃水浴60min,再加流動相A稀釋至刻度,搖勻,用0.45μm微孔濾膜過濾,精密量取續濾液20μL注入液相色譜儀,記錄色譜圖。結果表明:樣品在光照、酸、堿、氧化、高溫條件下均有不同程度的破壞,在主峰前后產生數個降解產物峰,各降解產物峰與主峰分離較好。取順-順對照品適量,用流動相A逐級稀釋,分別精密量取20μL注入液相色譜儀,記錄色譜圖。S/N=10∶1作定量限,結果為3ng;S/N=3∶1作檢測限,結果為1ng。取本品適量,置10mL量瓶中,加流動相A溶解并稀釋至刻度,搖勻,作為供試品溶液;精密量取供試品溶液5mL,置100mL量瓶中,加流動相A稀釋至刻度,搖勻,作為對照溶液(1)。另取苯磺阿曲庫銨消旋體適量,加流動相A溶解并稀釋制成每1mL中約含0.2mg的溶液,作為對照溶液(2)。取對照溶液(2)20μL注入液相色譜儀,各組分出峰順序依次為苯磺阿曲庫銨的反-反、順-反和順-順異構體。再精密量取對照溶液(1)及供試品溶液各20μL,分別注入液相色譜儀,記錄色譜圖。供試品溶液色譜圖中如有雜質峰,量取所有雜質峰峰面積的總和與對照溶液主峰面積,與對照溶液(1)的主峰面積相比較,計算總有關物質;供試品溶液的色譜圖中如有與對照溶液(2)中相應保留時間的色譜峰,量取其峰面積并計算其峰面積和,與對照溶液(1)的主峰面積相比較,得相應順-反、反-反異構體含量。結果見表2。根據文獻中流動相條件,選擇硫酸-三氟醋酸-甲醇(1∶4∶1000)與乙腈-10%磷酸-水(90∶10∶6)2種流動相,流速1.0mL·min-1,恒流洗脫,進行比較。結果表明:梯度條件下順苯磺阿曲庫銨與異構體之間分離效果最好,且柱效最高,因此確定為流動相條件。順苯磺阿曲庫銨在室溫下極不穩定,因此采用(6±2)℃密閉放置條件試驗溶液穩定性。反-反、順-反異構體均通過制備液相獲得,產量較低,因此稱量時不很準確,導致峰大小差異較大。2.1檢測波長的選擇2.2流量選擇2.3系統適用性測試2.4溶液穩定性2.5急性試驗2.6試驗和定量限制2.7樣品測定3討論3.1流量選擇3.